易朵
- 作品数:3 被引量:15H指数:2
- 供职机构:湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金湖南省教育厅科研基金长沙市科技计划项目更多>>
- 相关领域:生物学更多>>
- 阿司匹林诱导人恶性睾丸生殖细胞瘤NTera-2细胞凋亡被引量:6
- 2012年
- 阿司匹林,又称乙酰水杨酸,已证实有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和抑制血管生成等多种抗癌功能.除已知对环氧合酶COX-2的活性有抑制外,阿司匹林抗癌分子机制尚不十分清楚.已报道阿司匹林可以降低多种癌症发生风险,但应用于人类睾丸肿瘤治疗的研究报道很少.本文研究了阿司匹林对人恶性睾丸肿瘤NTera-2细胞凋亡的机制.通过MTT方法检测细胞活力,发现阿司匹林以时间和剂量依赖方式抑制NTera-2细胞增殖.不同浓度阿司匹林处理NTera-2细胞后,采用Hoechest 33258染色方法和Annexin V-FITC/PI流式法分别检测NTera-2细胞的形态学变化、凋亡小体形成、细胞凋亡水平;RT-PCR结果显示,NTera-2细胞中Fas和caspase-8的表达以阿司匹林剂量依赖性上升;蛋白印迹结果显示,FasL的蛋白表达水平下降并活化caspase-8、caspase-3蛋白表达,PARP出现剪切体.进一步的实验证明,caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK能够减弱阿司匹林诱导NTera-2细胞凋亡.结果显示,阿司匹林能明显抑制NTera-2细胞活力,并通过激活caspase通路诱导NTera-2细胞的凋亡,为进一步利用阿司匹林治疗人类睾丸肿瘤的研究奠定基础.
- 易朵李晓峰赵晓蒙王成张晓婷刘喜枝周畅
- 关键词:阿司匹林细胞凋亡胱天蛋白酶
- 重叠延伸PCR法构建小鼠Sumf1基因的定点突变真核表达载体被引量:8
- 2009年
- 前期通过染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,CHIP)筛选出了转录因子activator protein.2 alpha(AP-2α)的靶基因Sumf1.采用重叠延伸PCR定点诱变技术,对AP.2α在Sumf1内含子片段上的两个结合位点的碱基进行定点突变,并构建定点突变表达载体.DNA测序表明,Sumf1内含子片段103—111bp,411~419bp两处的碱基已分别由GCCGTCAGG突变为GAAGTCCTG,由GCCTCTAGG突变为GGATCTCTG,成功实现定点诱变,为进一步研究AP-2α对基因Sumf1的表达调控奠定了基础.
- 帅勇胡兴旺易朵王成赵晓蒙周畅
- 关键词:重叠延伸PCR定点诱变
- 高迁移率族蛋白HMGB4的表达及多克隆抗体的制备被引量:1
- 2011年
- 高迁移率族蛋白B4(high mobility group box,HMGB4)是HMGB家族的新成员,研究表明其可能在睾丸发育和精子发生等方面发挥重要作用.为进一步研究HMGB4的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行his-HMGB4融合蛋白表达载体的构建.序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生his-HMGB4融合蛋白,继而纯化获得相对分子质量约25 000的融合蛋白.将此融合蛋白免疫新西兰兔,经Western印迹和ELISA检测,制备的抗体可特异性识别HMGB4蛋白,其效价达1∶20 000.获得的高效价、高特异性的兔抗HMGB4蛋白多克隆抗体为下阶段研究HMGB4的功能奠定了基础.
- 易朵王成帅勇肖湘文赵晓蒙周畅
- 关键词:原核表达纯化多克隆抗体