彭方毅
- 作品数：43 被引量：139H指数：7
- 供职机构：重庆理工大学药学与生物学院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生环境科学与工程生物学文化科学更多>>
- HPV16E6基因原核表达载体的构建及表达
- 2010年
- 构建HPV16E6基因原核表达载体并进行表达。根据GenBank中的人乳头瘤病毒(HPV)序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有HPV全长基因片段重组质粒为模板,经PCR扩增出321 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化JM109大肠杆菌,筛选阳性克隆,其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-HPV16E6已构建成功。提取pGEX-KG-HPV16E6质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE、Western blot鉴定。结果在大肠杆菌中获得HPV16E6基因融合表达,主要以包涵体形式存在;融合蛋白的分子量为38 kD;以IPTG终浓度为1 mmol/L,诱导4 h后融合蛋白产量最高。表达的蛋白能与抗HPV16E6抗体发生特异性反应。HPV16E6基因在大肠杆菌中获得高效表达,为HPV16E6疫苗的研制奠定了基础。
- 彭方毅姜海蓉彭方亮赵卫兵林治华陈远翔陈胜珍
- 关键词：HPV16E6原核表达GST融合蛋白疫苗
- 一种新型优化的肺组织羟脯氨酸水平测定方法的建立被引量：7
- 2014年
- 目的建立大鼠肺组织羟脯氨酸（HYP）水平测定方法，以评价大鼠肺组织纤维化程度。方法比较不同酸水解时间、氧化时间、显色时间等对大鼠肺组织HYP水平测定结果的影响，据此建立大鼠肺组织HYP水平测定方法，并初步应用于博莱霉素诱导大鼠肺纤维化HYP水平的测定。结果通过优化得出HYP水平测定最佳条件为110℃7．50mol盐酸（HCL）水解16h，常温氧化10min，60℃显色25min。本方法灵敏度为0．067／μg／mL，回收率为88．85％～110．88％，平均CV为4．70％～6．60％。该法应用于博莱霉素诱导大鼠肺纤维化研究中，模型组HYP水平明显高于对照组。结论该法灵敏度与回收率均较高、重现性较好，可用作临床对肺纤维化程度判定的定量方法。
- 彭方毅周欢姜海蓉袁兵占崔玉花
- 关键词：羟脯氨酸
- LAPTM4B启动子荧光素酶报告基因重组体的构建被引量：1
- 2005年
- 目的:LAPTM4B基因是肝癌中高度表达的新基因。为下一步LAPTM4B启动子的活性分性,本文构建了LAPTM4B基因启动子调控的报告基因重组表达质粒。方法:以LAPTM4B基因组cDNA为模板扩增翻译起始位点上游DNA序列。PCR产物定向克隆到含荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中,并经限制性内切酶消化鉴定。结果:通过酶切鉴定和基因测序,证明成功地构建了三种不同长度的pGL3-LAPTM4B-Luc荧光素酶表达质粒,形成了系列的LAPTM4B启动子重组体。结论:充分利用生物信息学资源,利用已知基因的启动子序列,可快速,准确地克隆已知基因启动子序列并构建启动子载体。LAPTM4B启动子荧光素酶报告基因重组体的构建为LAPTM4B启动子的活性分析奠定了基础。
- 彭方毅张青云周柔丽邵根泽涂植光
- 关键词：LAPTM4B基因表达启动子
- LAPTM4B新基因在肿瘤细胞中的表达及其免疫学检测技术的建立被引量：2
- 2005年
- 目的利用制备的鼠抗人肝癌相关LAPTM4B蛋白的单克隆抗体,检测LAPTM4B蛋白在不同肿瘤细胞中的表达。方法重组质粒pGEX-KG-LAPTM4B-N1-99经酶切及测序鉴定正确后,1 mmol/L IPTG 37℃诱导获得融合蛋白。利用亲和层析方法纯化抗人LAPTM4B单抗,免疫印迹法进行单抗鉴定,免疫细胞化学染色法检测5种肿瘤细胞中LAPTM4B的表达。结果经western b lot分析抗LAPTM4B单抗可与LAPTM4B-N1-99编码的融合蛋白以及肿瘤细胞中的天然蛋白特异性结合。免疫细胞化学染色(IHC)检测到肝癌、肺癌等5种肿瘤细胞均表达LAPTM4B蛋白。IHC和免疫印迹分析证明了LAPTM4B蛋白在肿瘤细胞中的表达。结论该单抗能特异识别原核及真核细胞表达的LAPTM4B蛋白,为进一步探讨LAPTM4B蛋白的生物学效应提供了条件。
- 彭方毅张青云周柔丽涂植光王雅明徐建军
- 关键词：肝癌单克隆抗体
- 用于DNA杂交检测的丝网印刷型生物传感器的研究
- 2012年
- 将单链DNA(ssDNA)固定到丝网印刷碳电极上构成电化学DNA传感器,采用电化学指示剂,建立DNA杂交的检测方法。Co(phen)33+电化学指示剂通过钴盐与配体邻菲罗啉络合制备,采用等离子发射光谱法(ICP-AES)和核磁共振法(NMR)表征功能基团,采用循环伏安法(CV)分析指示剂的电化学特性,并以此为基础研究ssDNA在电极表面的固定及DNA杂交过程。本研究探讨了直接吸附、静电吸附与键合等3种ssDNA在电极表面的固定方法,结果表明,静电吸附法和键合法具有较高的ssDNA固定量,采用静电吸附法固定探针的电极杂交目标DNA后,Co(phen)33+易于嵌入双链DNA(dsDNA)中,CV峰电流(ip)信号随目标DNA浓度增加。本研究采用静电吸附ssDNA的电极检测DNA杂交,实验表明,当探针固定液中ssDNA浓度为5 mg/L时,目标DNA浓度在6.65×10-8～4.26×10-6mol/L范围内,Co(phen)33+在dsDNA修饰电极上ip值与DNA浓度呈良好的线性关系,R2为0.9819。本研究为建立新的微生物分子分型手段提供了初步依据。
- 陈盛珍蔡强彭方毅黄新新贾玉玲
- 关键词：DNA杂交电化学生物传感器
- LAPTM4B新基因在肿瘤细胞中的表达和检测及启动子区的克隆和活性分析
- 本文以LAPTM4B全长cDNA序列为模板，通过PCR扩增得到LAPTM4B N端胞质域中99个氨基酸的编码序列，并将其克隆到表达GST融合蛋白的pGEX-KG质粒中，构建了重组质粒pGEX-KG-N1-99，转化并诱导...
- 彭方毅
- 关键词：肝细胞癌启动子
- 肺弹性蛋白降解肽段人工抗原的合成与鉴定
- 2015年
- 目的制备和鉴定肺弹性蛋白降解肽段人工抗原,为进一步研制慢性阻塞性肺疾病(COPD)免疫检测试剂盒打下良好基础。方法以Sulfo-SMCC为偶联剂,钥孔血蓝蛋白(KLH)为载体蛋白制备免疫原;经紫外扫描和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)电泳鉴定偶联情况;以免疫原免疫Balb/c小鼠制备特异性抗体,间接竞争酶联免疫吸附实验(ELISA)法评价抗血清效价及特异性。结果紫外扫描和SDS-PAGE电泳确认了肺弹性蛋白降解肽段人工抗原合成成功,其蛋白浓度为1.181mg/mL,抗血清效价高于1∶64 000,IC50为13.7ng/mL,抗血清与无关肽段无交叉反应。结论本实验成功制备了肺弹性蛋白降解肽段人工抗原,其具有较好的免疫原性,为建立快速准确检测COPD免疫检测方法奠定基础。
- 彭方毅崔玉花马明炎李元宽邬红雨姜海蓉周欢
- 关键词：人工抗原抗体
- 喉癌中HPV不同亚型的检测及测序被引量：4
- 2009年
- 目的:检测人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)各型DNA在喉癌组织中的表达,探讨HPV在喉癌发生中的作用。方法:用PCR检测123例喉癌组织及123例喉粘膜上皮组织中HPV各型DNA。同时进行DNA测序,结果:在123例喉癌标本中,HPV-L1,-16E6/E7,-18E6/E7阳性率都明显高于其他各型。123例喉粘膜PCR结果表明:低危型HPV的阳性率与喉癌相近;高危型HPV的阳性率虽远远低于喉癌,但随着组织病变程度加重阳性率逐渐升高;HPV-L1的阳性率高于HPV-16E6、E7,随着组织病变程度加重,HPV-L1的检出率逐渐增高。结论:HPV-16感染会增强喉上皮病变的风险,而HPV-18有协同作用;L1片段适合用于检测HPV感染。
- 彭方毅姜海蓉刘芳杜志银林治华彭方亮赵卫兵
- 关键词：人乳头瘤病毒聚合酶链反应喉癌
- 感冒康注射液的制备及其质量控制被引量：2
- 2009年
- 采用超滤法制备感冒康注射液,通过对质量进行控制来探究超滤法制备注射液的可行性,并对其制剂的澄明度、有效成分含量测定、pH值、杂质检查、无菌检查、安全试验进行检查.结果表明,所有试验均符合中国药典(2005年版)规定,所建立的超滤法可用于感冒康注射液的制备,且方法简便、快速.
- 姜海蓉彭方毅邱荣蓉叶翠莲陈远翔陈盛珍彭方亮赵卫兵徐建建杨海艳
- 关键词：超滤法
- 一种多氯联苯单克隆抗体的制备方法
- 本发明公开了一种多氯联苯单克隆抗体的制备方法，首先采用多氯联苯半抗原化学合成完全抗原，然后将完全抗原作为免疫原，通过动物免疫方法制备得到多氯联苯单克隆抗体。其中半抗原合成完全抗原采用碳二亚胺法，动物免疫采用小剂量长周期免...
- 彭方毅姜海蓉
- 文献传递
