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张志榜: 作品数：10 被引量：46H指数：4; 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

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猪流行性腹泻病毒N蛋白与Vero E6核仁蛋白Fibrillarin的亚细胞定位分析被引量：2: 2011年; 为鉴定猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N)与Vero E6细胞核仁fibrillarin蛋白的亚细胞定位的特征。本实验参照GenBank中人细胞fibrillarin基因(M59849.1)序列,设计并合成特异性引物,利用RT-PCR方法扩增了Vero E6细胞的fibrillarin基因,并将其克隆于真核表达载体pDsRed2-N1中,构建重组质粒pDsRed-Fib。将pDsRed-Fib与本实验室构建的含有PEDV N基因的重组质粒pAcGFP-N,共转染Vero E6细胞。Western blot结果表明fibrillarin及N融合蛋白在转染的Vero E6细胞中均获得表达;利用共聚焦显微镜观察显示在共转染VeroE6细胞中PEDV N蛋白与Vero E6细胞核仁中的fibrillarin发生共定位。该结果为进一步研究PEDV和核仁蛋白相互作用奠定基础。; 石达陈建飞时洪艳张志榜冯力; 关键词：猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白共定位

猪轮状病毒Rotavirus A pig/China/NMTL/2009/G9P[23]株的分离与鉴定被引量：8: 2011年; A群轮状病毒(GAR)是引起人类和多种动物腹泻的主要病原体,病原的分离与鉴定是轮状病毒(RV)流行病学、病原学等研究的基础。本研究采用接种MA104细胞的方法,从内蒙古某猪场患病猪腹泻粪便中分离一株病毒,经3次蚀斑克隆纯化后,采用电镜观察、PCR鉴定和序列测定进行分析,结果表明该分离株为猪轮状病毒(PoRV)。致病性试验表明该分离株能够引起仔猪急性腹泻,RT-PCR扩增其VP4、VP6和VP7的基因节段并进行序列测定,按照A群RV的最新分类方法,确定该分离株的VP6、VP7和VP4基因型分别为I5型、G9型和P[23]型。因此,将该分离株命名为Rotavirus A pig/China/NMTL/2009/Q9P[23]。; 时洪艳陈建飞王承宝张志榜石达冯力; 关键词：猪轮状病毒

猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白全长的原核表达及其反应原性分析被引量：8: 2011年; 根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)CH/S株M蛋白的基因组序列,设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出M基因,将其克隆至原核表达载体pMXB10,构建了重组质粒pMXB-M,经测序鉴定正确后转化感受态细胞BL21(DE3),并进行了IPTG诱导表达。结果显示,重组菌pMXB-M表达的融合蛋白MBP-M-CBD(rM)的分子质量约为95ku,在IPTG浓度为0.8mmol/L、诱导时间为6h时,重组菌的表达效果最好,重组蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。Western-blot结果显示,rM能与兔抗PEDV多克隆抗血清及PEDV M蛋白单克隆抗体发生特异的免疫印迹反应,表明原核表达的rM蛋白具有良好的反应原性,这为进一步开展PEDV M蛋白的研究奠定了基础。; 张志榜陈建飞时洪艳陈小金冯力; 关键词：猪流行性腹泻病毒 M蛋白原核表达免疫印迹

猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白全长的原核表达及其反应原性分析: 根据猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白的基因组序列，设计一对引物，采用RT-PCR方法扩增出M基因，将其克隆至原核表达载体pMXB10,构建了重组质粒pMXB-M，经测序鉴定正确后转化感受态细胞BL21(DE3)，并进行I...; 张志榜陈建飞时洪艳陈小金冯力; 关键词：猪流行性腹泻病毒跨膜蛋白原核表达免疫印迹; 文献传递

猪流行性腹泻病毒M蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：10: 2011年; 为制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗M蛋白单克隆抗体(MAb),本研究以截短表达的His-M重组蛋白免疫BALB/c小鼠;以截短表达的GST-M重组蛋白作为包被抗原,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,得到一株稳定分泌抗M蛋白MAb。MAb亚类鉴定为IgG2b型,轻链为κ链,杂交瘤细胞培养上清和诱导的小鼠腹水抗体效价分别为1∶3000和1∶2×105。Westernblot试验表明该MAb能够识别重组及天然的PEDVM蛋白。间接免疫荧光试验表明该MAb能够与PEDV感染的VeroE6细胞产生特异性免疫荧光。; 张志榜陈建飞时洪艳杨斌石达陈小金冯力; 关键词：猪流行性腹泻病毒 M蛋白单克隆抗体

猪流行性腹泻病毒膜蛋白和核蛋白抗原表位的鉴定: 猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemicdiarrhea virus，PEDV)引起的猪的肠道传染病，其主要特征是严重的肠炎、呕吐、...; 张志榜; 关键词：猪流行性腹泻病毒 M蛋白 N蛋白抗原表位

猪轮状病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：16: 2010年; 根据GenBank中登录的A群猪轮状病毒(PoRV)代表株OSU毒株序列,针对VP7基因设计了1对特异性引物,将150bp目的片段与pMD18-T载体连接构建标准品,建立了检测A群PoRV的SYBR GreenⅠreal-timePCR方法,并对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了评价。结果显示,该方法在1.3×108copies/μL～1.3×102copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.999;最低检测限为1.3×101copies/μL;用该方法检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪病毒性腹泻病毒均为阴性;批内及批间变异系数均低于2%。表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好。用该方法抽检58份疑似病例的腹泻病料,结果检出53份阳性,同时用普通RT-PCR和快速检测试剂盒对这些病料进行检测,结果分别检出42份和32份阳性。用这3种方法对11例已知阳性的临床粪便样品进行检测,结果建立的检测方法与其他两种方法的符合率为100%。用该方法检测PoRV细胞培养物中的病毒载量为1.0×105copies/μL。结果表明,建立的检测方法为PoRV的早期诊断、分子流行病学调查以及疫苗质量的监测等提供了新的快速检测技术。; 陈小金陈建飞时洪艳张志榜冯力; 关键词：猪轮状病毒 SYBR 实时荧光定量PCR

猪流行性腹泻病毒蛋白对Vero E6核蛋白B23.1的影响被引量：1: 2012年; 为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)核蛋白N对Vero E6细胞核仁蛋白B23.1的影响,将本实验室构建的DsRed-N1/B23.1重组质粒转染Vero E6细胞,转染6h后接种PEDV,分别在转染后12、18h和24h三个时间点,进行病毒感染细胞的间接免疫试验,同时设未感染对照组,而后利用激光共聚焦显微镜分析感染和转染细胞中B23.1蛋白的变化。结果表明,PEDV N蛋白与Vero E6核蛋白B23.1有共定位特征,在PEDV感染Vero E6细胞12h后,B23.1蛋白开始发生变化,随着时间的延长逐渐碎裂、分散。这个结果提示,病毒可能通过破坏核仁的结构和核仁蛋白的功能,进而为病毒的复制提供便利。; 石达吕茂杰陈建飞时红艳张志榜冯力; 关键词：猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白

猪流行性腹泻病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定: 为了制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白单克隆抗体(MAb)，本研究以截短表达的His-M重组蛋白免疫BABL/c小鼠：以截短表达的GST-M重组蛋白作为包被抗原，采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞，通过间接E...; 张志榜陈建飞时洪艳杨斌石达陈小金冯力; 关键词：猪流行性腹泻病毒跨膜蛋白原核表达单克隆抗体; 文献传递

猪流行性腹泻病毒的分子流行病学研究: 自2006年初起,猪流行性腹泻病毒(PEDV)开始在免疫猪群中再度出现。开放阅读框3(ORF3)是PEDV基因组中的唯一辅助基因。12株PEDV野毒株和一株疫苗株的全长ORF3基因被测序。PEDV野毒株(除CH/GSJI...; 陈建飞王承宝时洪艳陈小金张志榜冯力; 关键词：猪流行性腹泻病毒系统发育关系 ORF3基因新基因型套式RT-PCR; 文献传递

张志榜

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