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张会东: 作品数：65 被引量：124H指数：6; 供职机构：四川大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金四川省学术和技术带头人培养资金国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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人外周血单个核细胞CD14基因的扩增及序列测定: 2000年; 目的　介绍一种获取人 CD14基因的简易方法。方法　利用 CD14基因组成的特点 ,采用聚合酶链反应技术以人外周血单个核细胞基因组 DNA为模板扩增获取人 CD14基因。结果　从人外周血单个核细胞基因组 DNA中成功扩增出大小约 1.1kb的人 CD14基因 ,并且经基因序列测定表明 ,克隆的人CD14基因序列与文献报道完全相同。结论　以人外周血单个核细胞基因组 DNA为模板 ,扩增人 CD14基因的方法是一种获取 CD14基因简捷、有效的方法。; 张万江鲍朗邱洪宇晏菊芳胡昌华张会东; 关键词：单个核细胞 CD14基因

结核分枝杆菌Rv2994基因重组穿梭质粒的构建与鉴定被引量：1: 2006年; 目的构建结核分枝杆菌假想药物外排泵蛋白编码基因Rv2994的重组穿梭质粒pMV-2994,并对其进行鉴定。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,应用PCR技术扩增Rv2994基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pGEX-1λT,获得重组表达质粒pGEX-2994,测序鉴定。酶切该基因片段,定向重组入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭载体pMV261,构建重组质粒pMV-2994,通过限制性内切酶酶切及PCR鉴定。结果从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出的Rv2994基因与GenBank公布的序列一致,经过酶切及PCR鉴定,表明Rv2994基因成功插入了pMV261穿梭载体。结论成功构建了重组穿梭质粒pMV-2994,为进一步研究Rv2994基因功能奠定了基础。; 赵明才鲍朗吴悦涵张会东; 关键词：结核分枝杆菌穿梭载体

IL-12基因不同亚基真核表达载体的构建及表达被引量：2: 2006年; 目的:克隆并构建含人白介素12(hIL-12)基因p35、p40不同亚基的真核表达载体,瞬时转染真核细胞并诱导IL-12的表达。方法:人单核细胞白血病细胞株(THP-1)和人白血病细胞株(HL-60),经DMSO、IFN-γ和LPS诱导后,用RT-PCR及SOEPCR扩增IL-12p40、p35及p40-p35融合基因;并构建pcDNA-p35、pcDNA-p40及pcDNA-IL-12真核表达载体。以3种重组质粒分别瞬时转染COS-7细胞后,通过RT-PCR及ELISA法检测目的基因的表达。结果:经诱导后,从HL-60细胞中扩增到IL-12p40和p35基因片段;但从THP-1细胞中只扩增到p35基因片段,未能扩增到p40基因片段;经酶切鉴定、PCR扩增及序列测定表明pcDNA-p35、pcDNA-p40及pcDNA-IL-12真核表达质粒构建成功;并在COS-7细胞中可检测到IL-12的表达。结论:含hIL-12基因不同亚基的真核表达质粒的成功构建,对进一步研究IL-12在免疫应答中的调节作用以及作为免疫佐剂改善BCG免疫保护效果的研究奠定了基础。; 郝牧鲍朗张会东高蕾李娅莎; 关键词：白细胞介素12 真核表达瞬时转染

赖型钩端螺旋体017株外膜蛋白LipL32基因重组质粒的构建及其细胞毒性的研究: 2008年; 目的构建赖型钩端螺旋体(钩体)017株外膜蛋白LipL32基因的重组质粒,并研究其细胞毒性。方法从钩体017株全基因组中用PCR方法扩增出目的基因,双酶切构建重组质粒,转化大肠杆菌,诱导表达LipL32蛋白,将表达的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,Western Blotting鉴定其免疫原性。将目的蛋白纯化、复性后作用于ECV304细胞,通过检测细胞的乳酸脱氢酶(LDH)、NO释放量研究其细胞毒性。结果扩增出816bp的LipL32基因,重组质粒经双酶切、PCR鉴定、测序均表明重组载体构建成功。经IPTG诱导表达的融合蛋白相对分子质量约52×103,主要以包涵体的形式表达,经免疫动物制备得到多克隆抗体,ELISA检测效价达1:32000,Western Blotting显示在目的蛋白位置处有特异性阳性条带。经过LipL32蛋白作用的ECV304细胞LDH、NO释放量和对照组比较有明显升高。结论成功构建LipL32基因重组质粒,该质粒能在大肠杆菌中表达,表达的目的蛋白对细胞有一定的毒性效应。; 黄毕鲍朗钟琪商正玲张会东王中平; 关键词：钩端螺旋体外膜蛋白 LIPL32 细胞毒性

赖型钩端螺旋体Loa22重组质粒的蛋白表达和对巨噬细胞的毒性作用被引量：3: 2008年; 目的对赖型钩端螺旋体Loa22基因进行表达和功能研究。方法构建赖型钩端螺旋体Loa22成熟肽重组质粒,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Western Blotting检测目标蛋白表达情况。经亲和层析获得目标蛋白并作用于小鼠巨噬细胞ANA-1,检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、四氮唑复合物(XTT)吸光度值和细胞凋亡率以评价其细胞毒性。结果成功构建Loa22成熟肽原核表达质粒,通过鉴定并纯化得到Loa22成熟肽,该蛋白使培养ANA-1细胞上清液中LDH活力升高,XTT吸光度值下降,细胞凋亡率增加。结论Loa22对ANA-1具有明显的毒性效性,该基因可能是致病钩体的一个重要毒力相关基因。; 张英鲍朗朱海龙黄毕章乐张会东; 关键词：钩端螺旋体巨噬细胞细胞毒性

利用基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐药性的研究被引量：7: 2002年; 张万江鲍朗王晓樱于向华谢勇恩陈玮张会东; 关键词：基因芯片技术结核分枝杆菌耐药性

结核分枝杆菌cfp10-esat6融合基因重组穿梭质粒的构建及其在BCG中的融合与分泌表达研究被引量：4: 2006年; 通过SOE法(重叠延伸,Genesplicingbyoverlapextension),扩增cfp10-esat6融合基因,与穿梭整合质粒pMV361构建成重组质粒。另将BCGα抗原(α-Ag)信号肽序列与上述重组质粒构建成另一重组质粒。将两种重组质粒分别导入BCG菌构建融合型重组卡介苗和分泌型重组卡介苗,热诱导后分析其表达产物。本研究成功构建并表达了CFP10-ESAT6融合及分泌表达的重组BCG,为发展新型结核病疫苗打下了一定的基础。; 王晓樱鲍朗赵明才张会东龙洋; 关键词：结核分枝杆菌卡介苗

结核杆菌Ag85A DNA疫苗在小鼠体内的免疫效应比较被引量：1: 2004年; 目的　探索增强结核杆菌DNA疫苗有效性的新方法 ,为研制并开发新一代高效结核杆菌DNA疫苗奠定基础。方法　分别构建结核杆菌Ag85A抗原基因真核表达质粒及其与小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的真核嵌合表达质粒 ,体外转染COS7细胞检测两种重组质粒的表达活性后 ,将其分别用作DNA疫苗给BALB/c小鼠肌内注射 ,检测小鼠体内特异性体液免疫和细胞免疫应答相关指标 ,同时进行动物免疫保护性实验 ,比较分析两种DNA疫苗在小鼠体内的免疫效应。结果　结核杆菌Ag85A抗原蛋白基因与小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的嵌合DNA疫苗在小鼠体内的免疫原性明显强于Ag85A抗原基因非嵌合DNA疫苗 ,但两种DNA疫苗的免疫保护性无明显差异。结论　粒细胞巨噬细胞集落刺激因子与结核杆菌免疫保护性抗原基因嵌合DNA疫苗能显著增强结核病DNA疫苗的免疫原性。; 谢勇恩鲍朗赵明才张会东赵计林王晓樱; 关键词：DNA疫苗结核杆菌小鼠 AG85A 免疫效应粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

钩端螺旋体赖型017株外膜脂蛋白LipL41基因的克隆及原核表达被引量：2: 2001年; 目的　构建钩端螺旋体外膜脂蛋白 L ip L41基因的重组原核表达质粒 ,为进一步制备以 L ip L41为目的基因的亚单位疫苗提供实验依据。方法　根据钩端螺旋体 L.kirscneri RM5 2株外膜脂蛋白 L ip L41基因序列设计引物 ,以赖型钩端螺旋体 0 17株基因组 DNA为模板 ,进行 PCR扩增并 DNA测序 ,以质粒 p GEX1λT为载体 ,插入 L ip L41基因片段构建重组原核表达质粒 ,并检测 L ip L41的表达。结果　测序结果示所得片段为 L ip L41的编码序列 ,酶切及 PCR分析证实重组质粒构建成功 ,SDS- PAGE和 Western blotting分析重组质粒可高效表达蛋白质 L ip L41。结论　 L ip L41基因的重组原核表达质粒构建成功。; 李学敏鲍朗胡昌华谢勇恩晏菊芳张会东; 关键词：基因克隆基因表达膜脂蛋白

全冠修复对牙隐裂的治疗作用被引量：1: 2009年; 目的:研究牙隐裂的有效治疗方法。方法:91颗已确诊牙隐裂的牙根据全冠修复与否分成进行全冠修复和未进行全冠修复两组,随后进行一年的疗效追踪观察。结果:进行全冠修复完全成功55颗,占61.1%;改善7颗,占7.85%。未进行全冠修复的28颗全部失败,占31.1%,二者差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:全冠修复对保证牙隐裂治疗成功具有重要作用。; 魏静张会东; 关键词：牙隐裂全冠修复牙髓治疗

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