晏菊芳 作品数:17 被引量:70 H指数:5 供职机构: 中国科学院成都生物研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 四川省学术和技术带头人培养资金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 理学 更多>>
一种三萜皂甙衍生物及其制备方法和用途 本发明属于有机化学技术领域,具体涉及一种三萜皂甙衍生物及其制备方法和用途。本发明三萜皂甙衍生物具有如下结构式:<Image file="D2009100601229A00011.GIF" he="239" imgCont... 晏菊芳 王明奎 李甫 张蔚瑜 陈欣文献传递 DNA疫苗的分子佐剂研究进展 被引量:7 2000年 DNA疫苗是一种能诱生机体产生高水平免疫应答的新型疫苗 ,近年来有关它的研究不断扩展和深入。由于它受到DNA疫苗以表达抗原蛋白的重组质粒DNA为免疫原的启发 ,为进一步优化DNA疫苗 ,人们开始研究一类新型的DNA疫苗分子佐剂 ,即可在体内表达各种免疫相关分子的重组质粒DNA和具免疫刺激效应的细菌源性CpGDNA。本文介绍了各种分子佐剂对DNA疫苗的调制效应及其在疫苗优化、免疫治疗和DNA疫苗作用机制探索中的意义 ,就影响分子佐剂对DNA疫苗调制的因素问题作了一些讨论。 晏菊芳 鲍朗关键词:DNA疫苗 分子佐剂 一种三萜皂甙衍生物及其制备方法和用途 本发明属于有机化学技术领域,具体涉及一种三萜皂甙衍生物及其制备方法和用途。本发明三萜皂甙衍生物具有如下结构式:<Image file="200910060122.9_AB_0.GIF" he="183" imgConte... 晏菊芳 王明奎 李甫 张蔚瑜 陈欣中国钩端螺旋体强毒株017膜蛋白基因的质粒载体构建及表达 被引量:5 1999年 目的构建表达我国钩体强毒赖型017株外膜蛋白的重组质粒。方法用PCR方法扩增并回收017株钩体外膜蛋白基因片段OmpL1,将其与质粒pBK-CMV重组,通过菌落颜色和酶谱分析筛选出重组质粒。然后从该重组质粒切下OmpL1基因片段,重新克隆至质粒pBV220中,酶谱分析和DNA杂交鉴定出正向重组质粒。将含有正向重组质粒的宿主菌诱导表达生长后,提取全菌总蛋白进行SDS-PAGE分析。结果筛选出4个与pBV220正向重组的质粒,其中一株带重组质粒pBLM1的菌株表达了一相对分子质量为33.5×103的新蛋白。结论重组质粒pBLM1的构建和表达成功说明扩增得的OmpL1基因具有完整的阅读框架,并使简便获得大量天然的017株钩体OmpL1蛋白成为可能。 晏菊芳 鲍朗 伍卫华 万波 李胜富关键词:钩端螺旋体属 重组质粒 人外周血单个核细胞CD14基因的扩增及序列测定 2000年 目的 介绍一种获取人 CD14基因的简易方法。方法 利用 CD14基因组成的特点 ,采用聚合酶链反应技术以人外周血单个核细胞基因组 DNA为模板扩增获取人 CD14基因。结果 从人外周血单个核细胞基因组 DNA中成功扩增出大小约 1.1kb的人 CD14基因 ,并且经基因序列测定表明 ,克隆的人CD14基因序列与文献报道完全相同。结论 以人外周血单个核细胞基因组 DNA为模板 ,扩增人 CD14基因的方法是一种获取 CD14基因简捷、有效的方法。 张万江 鲍朗 邱洪宇 晏菊芳 胡昌华 张会东关键词:单个核细胞 CD14基因 钩端螺旋体外膜抗原基因ompL1在卡介苗中的克隆和初步表达 1998年 目的将钩端螺旋体外膜基因ompL1克隆到大肠杆菌-卡介苗(E.coli-BCG)穿梭质粒载体pY6002中,将重组质粒导入BCG并对重组BCG的表达进行初步表达研究。方法采用PCR技术直接从致病性钩端螺旋体(钩体)赖型017株基因组中扩增钩体外膜蛋白基因ompL1,并克隆到E.coli-BCG穿梭质粒载体pY6002中,重组质粒经电转化导入BCG。斑点杂交筛选重组BCG,再通过免疫印迹对其表达进行初步研究。结果在所得6个重组BCG中,有3个表达了ompL1基因产物,其中一个表达较强。结论本研究为发展新一代高效广谱的钩体基因工程疫苗打下了基础。 万波 鲍朗 徐恒 徐恒 晏菊芳关键词:钩端螺旋体 卡介苗 聚合酶链反应 月季花中黄酮成分的ESI-MSn分析 薛莹 张沛 青琳森 晏菊芳 廖循 丁立生文献传递 钩端螺旋体赖型017株外膜脂蛋白LipL41基因的克隆及原核表达 被引量:2 2001年 目的 构建钩端螺旋体外膜脂蛋白 L ip L41基因的重组原核表达质粒 ,为进一步制备以 L ip L41为目的基因的亚单位疫苗提供实验依据。方法 根据钩端螺旋体 L.kirscneri RM5 2株外膜脂蛋白 L ip L41基因序列设计引物 ,以赖型钩端螺旋体 0 17株基因组 DNA为模板 ,进行 PCR扩增并 DNA测序 ,以质粒 p GEX1λT为载体 ,插入 L ip L41基因片段构建重组原核表达质粒 ,并检测 L ip L41的表达。结果 测序结果示所得片段为 L ip L41的编码序列 ,酶切及 PCR分析证实重组质粒构建成功 ,SDS- PAGE和 Western blotting分析重组质粒可高效表达蛋白质 L ip L41。结论 L ip L41基因的重组原核表达质粒构建成功 。 李学敏 鲍朗 胡昌华 谢勇恩 晏菊芳 张会东关键词:基因克隆 基因表达 膜脂蛋白 赖型钩端螺旋体外膜蛋白基因结构比较性研究 被引量:5 2000年 用 PCR方法扩增不同毒力赖型钩体 Omp L1基因片段 ,进行序列测定 ,用相关软件比较分析核苷酸序列、蛋白质二级结构以及限制性内切酶谱 .不同毒力赖型钩体均能扩增出960 bp的片段 ,非致病 Patoc株未能扩出相应片段 ,中国赖型参考株 Omp L1序列 ( Gene BankNo.AF2 50 31 8)与流感伤寒型相应序列比较有 98个核苷酸差异 ,同源性为 89.8% ,二级结构预测和氨基酸疏水图显示变异主要发生在跨膜蛋白的膜外区 ,其膜上成分并未明显变化 ;赖型强弱毒力株之间 Omp L1序列仅 8个核苷酸差异 ,6个氨基酸变异 ,且集中在 C末端 2 92 -30 5位氨基酸之间 ;限制性内切酶谱分析显示赖型 Omp L1基因位点发生特异变化 .结果提示 ,外膜蛋白 Omp L1基因是钩体保守性较强的致病标记 ;赖型钩体减毒致弱可能与 Omp 胡昌华 鲍朗 晏菊芳 李学敏 张万江 张会东关键词:赖型钩端螺旋体 外膜蛋白 蛋白质二级结构 利用抑制消减杂交技术研究钩端螺旋体致病相关基因 被引量:16 2001年 目的 利用抑制消减杂交技术 (SSH) ,比较致病与非致病钩端螺旋体 (简称钩体 )之间基因组差异 ,筛选致病钩体特有的基因片段。方法 以赖型 0 1 7株为tester,非致病性patocⅠ株为driv er,选择合适的四碱基内切酶将基因组酶切 ,连接特殊设计的adaptor进行消减杂交和PCR ,得到消减混合物 ,与T/A克隆载体连接 ,转化JM1 0 9建立差异消减文库 ,经PCR和Southernblot筛选鉴定阳性克隆 ,进而对部分片段进行测序和同源分析。结果 AluⅠ适于将钩体酶切成用于SSH技术的小片段 ;经SSH筛选鉴定得到 3 0个片段大小为 2 0 0~ 1 3 0 0bp的阳性克隆 ,部分已测序的片段中 1个与硫胺素合成蛋白高度同源 ,4个与GenBank无明显同源性 ,可能为赖型致病钩体所特有而非致病钩体缺失的基因片段 ,已被GenBank收录 ,收录号分别为AF3 0 0 873~ 3 0 0 877。结论 SSH是一种有效、灵敏、高特异的比较分析基因组差异的方法 ,对钩端螺旋体致病基因的筛选、基因组分化、分子遗传研究等具有重要意义。 鲍朗 胡昌华 李学敏 晏菊芳 张万江 张会东关键词:钩端螺旋体 抑制消减杂交