张仁刚
- 作品数：33 被引量：65H指数：5
- 供职机构：川北医学院基础医学院免疫学与分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省教育厅科学研究项目四川省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 杜氏利什曼原虫表达位点相关基因样蛋白的分子克隆及表达定位被引量：1
- 2014年
- 目的克隆杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)无鞭毛体特异表达新基因,观察其编码蛋白的亚细胞定位。方法制备杜氏利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体m RNA,以消减抑制杂交技术筛选无鞭毛体新的表达序列标签,扩增含有新表达序列标签的基因全长c DNA,Northen杂交和RT-PCR检测新基因在前鞭毛体和无鞭毛体中的表达,共表达方法观察杜氏利什曼原虫内新基因编码蛋白的亚细胞定位。结果构建了杜氏利什曼原虫无鞭毛体表达序列标签消减文库,克隆到一个新基因,命名为表达位点相关基因样蛋白(ESAGLP)基因,其c DNA全长为2 258 bp,编码620 aa。ESAGLP基因仅在无鞭毛体内表达,其编码蛋白定位于线粒体。结论 ESAGLP鉴定为杜氏利什曼原虫无鞭毛体新基因,其编码蛋白定位于无鞭毛体的线粒体。
- 刘鹏张仁刚张洁敬保迁
- 关键词：杜氏利什曼原虫
- 原核表达载体pKpL5的构建及应用研究
- 2008年
- 目的构建基因工程生产用高效原核融合表达质粒载体。方法在原核表达质粒pKpL4起始密码下游嵌入人工合成的六聚组氨酸编码区、16s RNA3端互补区、凝血酶识别位点编码区接头,构建成原核表达质粒pKpL5,并将人生存素单体、双体及利什曼原虫LACK抗原基因编码区分别克隆入pQE32、pKpL4和pKpL5进行表达,SDS-PAGE电泳分析各目的蛋白的表达量。结果人生存素单体、双体及利什曼原虫LACK抗原基因读码框在pQE32和pKpL4质粒载体内均不表达,而在pKpL5内,其目的蛋白表达量分别占细菌总蛋白量的5.1%,19%和35%。结论pKpL5可用作通用原核高效表达质粒载体表达各种目的基因。
- 张仁刚敬保迁张洁
- 关键词：原核表达质粒
- RNAi抑制胰腺癌细胞survivin表达的实验研究
- 2008年
- 目的用RNA i方法抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达。方法用免疫细胞化学技术和RT-PCR检测胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达,构建针对survivin基因的siRNA表达载体并进行酶切和测序鉴定,用脂质体转染胰腺癌细胞PANC-1,RT-PCR初步分析siRNA表达载体对survivin表达的抑制作用。结果survivin在胰腺癌细胞PANC-1中有较高表达,siRNA表达载体可以有效的抑制survivin的表达,抑制率达60%。结论用RNAi表达载体可以有效抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达。
- 杨健张仁刚陈大斌任碧轩敬保迁
- 关键词：RNAI胰腺癌SURVIVIN
- 广州管圆线虫感染人体致脑损伤的机制分析
- 2013年
- 广州管圆线虫病是重要的人兽共患病。广州管圆线虫三期幼虫侵犯人体神经系统,损伤神经细胞,引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎或脑膜脑炎。本文主要讨论从人体感染广州管圆线虫后,虫体抗原激活小胶质细胞释放大量NO以及IL-4、IL-5、TNF-a、IFN-γ等炎性因子,分析这些炎性因子致神经细胞损伤的发病机制,从而寻找预防和治疗广州管圆线虫病的有效措施。
- 周燕蓉张仁刚吴忠道
- 关键词：广州管圆线虫病神经系统发病机制小胶质细胞
- 杜氏利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体的比较蛋白质组学分析被引量：8
- 2009年
- 目的应用蛋白质组学技术分析杜氏利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体蛋白质表达状况。方法分别提取和纯化杜氏利什曼原虫四川SC6株前鞭毛体与纯培养无鞭毛体的总蛋白,分别经pH3～10的预制胶条进行双向电泳分离,凝胶用考马斯亮蓝染色,凝胶图像以PDQuest1.0软件分析,并对主要差异表达蛋白点用电喷雾质谱法进行鉴定。结果等量的前鞭毛体与纯培养的无鞭毛体总蛋白经双向电泳分离后均可获近700个蛋白点,其中超过90%的蛋白点的分布和相对强度基本一致。与前鞭毛体比较,6个蛋白点在无鞭毛体蛋白中明显高表达,3个蛋白点低表达。6个明显高表达的蛋白点中有5个为已知功能蛋白,分别为Reiske铁硫蛋白前体、α微管蛋白、过氧化物酶1、二氢硫辛酰胺乙酰转移酶前体和甘露糖-1-磷酸瓜氨酸转移酶;3个低表达的蛋白点中有2个为已知功能蛋白,分别为热休克蛋白70和β微管蛋白。这些差异调节表达蛋白与碳水化合物/能量代谢,应激反应,细胞膜和细胞骨架形成相关。结论前鞭毛体与无鞭毛体蛋白质的表达存在差异。
- 敬保迁邓世山张仁刚张洁
- 关键词：杜氏利什曼原虫前鞭毛体无鞭毛体比较蛋白质组学
- 仪陇县肠道线虫感染流行病学调查
- 1994年
- 本文采用方口园底盒饱和盐水漂浮法检查仪陇将军乡村民肠道线虫卵。显示该地人群钩虫、蛔虫和鞭虫感染率分别为６３．６％、６５．３％和６４．７％。通过虫卵培养及感染相关因素分析，表明该地是以美洲钩虫感染占优势的混合感染地区，钩虫感染率随年龄增长而增高，感染高峰在５─６月，与种植蔬菜、红苕等农作物有密切关系。
- 张仁刚陶斯象龙显沛欧维提唐菊芳
- 关键词：肠道线虫钩虫蛔虫鞭虫流行病学
- 噻嘧啶和丙硫咪唑及驱虫乐单剂顿服法治疗肠道线虫感染的效果
- 1993年
- 本文采用噻嘧啶和丙硫咪唑及驱虫乐单剂顿服法治疗肠道线虫感染,钩虫卵阴转率分别为64.3％、66.5％和72％,虫卵减少率为85.66％、82.36％和87.68％;蛔虫卵阴转率依次为100％、99.01％和100％;鞭虫卵阴转率分别为23.97％、30.87％,和31.29％。
- 张仁刚陶斯象赵成学
- 关键词：钩虫鞭虫
- 重组人生存素单体分子与双体分子的原核表达研究
- 2008年
- 目的重组并高效表达人生存素单体分子和双体分子。方法PCR扩增人生存素基因,将其单一读码框和双读码框重组到原核表达质粒载体pKpL5的表达框内,限制性内切酶分析后,于42℃诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达结果。结果经限制性核酸内切酶分析,表达重组人生存素单体分子质粒pKpL5-sSURVIVIN和表达人生存素同源双体分子质粒pKpL5-dSURVIVIN均正确构建,可高效表达分子量约18.5KDa的人生存素单体分子与分子量约35KDa的同源双体分子,所表达的目的蛋白可被抗人生存素的多克隆抗体特异性识别。结论该研究成功高效表达人生存素单体分子与同源双体分子,为进一步研究其生物活性与免疫原性奠定了物质基础。
- 杨健张仁刚敬保迁
- 关键词：生存素原核表达
- 不同种株利什曼原虫前鞭毛体体外向无鞭毛体转化的研究被引量：2
- 2009年
- 目的观察不同种株利什曼原虫前鞭毛体在不同体外培养条件下向无鞭毛体的转化。方法将6个对数生长期的不同种株利什曼原虫前鞭毛体接种于含M199和RPMI1640复合培养液的24孔板内,在不同温度、pH值、血清、CO2下培养,第3天和第6天分类计数不同形态的原虫。结果当培养温度为26℃,而其他培养条件发生变化时,利什曼原虫的增殖速度发生变化,大多数原虫保持前鞭毛体典型性形态,运动活跃。当培养温度上升至37℃,不论其他培养条件如何变化,原虫均沉积于培养孔底,停止增殖,运动减缓,显著地向中间体和无鞭毛体转化,酸性pH值和5%CO2可促进前鞭毛体转化为无鞭毛体,新生小牛血清可延长无鞭毛体的成活。但相同的培养条件下,杜氏利什曼原虫转化效率低于其他种株利什曼原虫。结论温度是影响利什曼原虫前鞭毛体转化为无鞭毛体的基本因素,酸性pH值与CO2可协同温度促进转化,不同种株利什曼原虫的遗传异质性可影响转化效率。
- 张仁刚敬保迁张洁杨健
- 关键词：利什曼原虫无鞭毛体体外培养
- 不同种株利什曼原虫抗原的多样性研究被引量：2
- 2013年
- 目的观察不同种株利什曼原虫抗原的异质性。方法培养杜氏利什曼原虫、热带利什曼原虫及婴儿利什曼原虫前鞭毛体及体外转化无鞭毛体,提取总蛋白,经SDS-PAGE电泳后,分别以抗杜氏利什曼原虫及热带利什曼原虫前鞭毛体血清进行Western blot,分析抗原的多样性。结果经SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色,杜氏利什曼原虫、热带利什曼原虫及婴儿利什曼原虫前鞭毛体及体外转化无鞭毛体总蛋白呈现出分子质量单位为12～150ku的相似蛋白带型;Western blot显示,抗杜氏利什曼原虫前鞭毛体多克隆血清识别的抗原组分与抗热带利什曼原虫前鞭毛体多克隆血清识别的抗原相似;3种利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体存在48、65及35ku共同抗原,杜氏利什原虫和婴儿利什曼原虫的无鞭毛体存在38ku期特异抗原,热带利什曼原虫的前鞭毛体和无鞭毛体存在45、24ku种特异抗原。结论杜氏利什曼原虫、热带利什曼原虫及婴儿利什曼原虫间存在抗原多样性,为认识利什曼病感染免疫提供了新的视角。
- 王健张仁刚张洁敬保迁
- 关键词：利什曼原虫感染免疫
