杨健
- 作品数：86 被引量：150H指数：6
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- 相关领域：医药卫生文化科学生物学农业科学更多>>
- 致病性大肠埃希菌EspA抗血清制备及其对细菌粘附的影响
- 2016年
- 目的制备致病性大肠埃希菌(EPEC)分泌蛋白A(EspA)抗血清,并检测其对EPEC粘附的中和作用。方法以EPEC标准株E2348/69为模板,采用PCR方法获得EspA基因,将目的基因连接载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a-EspA,转入表达菌株BL21后用IPTG诱导表达并采用Ni-柱亲和层析法纯化EspA;以纯化EspA辅以佐剂免疫家兔,多次免疫获得抗血清,采用中和试验检测抗血清中和EPEC粘附Hep-2细胞的能力。结果成功构建EspA原核表达质粒,表达蛋白分子质量单位为37ku,与预期值相符。用纯化的表达蛋白EspA免疫家兔,对流免疫电泳检测抗血清的效价为1∶2,但稀释度≤1∶16时仍能效抑制EPEC粘附Hep-2细胞。结论 EspA抗血清具有抑制EPEC粘附Hep-2细胞作用,有望为疫苗研发的候选抗原。
- 郭永明黄荣王朝莉杨晓红杨健
- 关键词：致病性大肠埃希菌抗血清粘附
- 效应分子Map、EspF在致病性大肠杆菌致细胞线粒体功能障碍中的作用
- 2009年
- 用自杀质粒、基因等位交换方法构建致病性大肠杆菌(EPEC)效应分子Map或EspF缺失删除株Δmap、ΔespF和ΔmapespF,并用PCR和蛋白印迹技术(Western blot)对删除株进行鉴定;用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测删除株感染HeLa细胞后细胞MMP改变。试验结果表明,Δmap、ΔespF和ΔmapespF等删除株成功构建,效应分子Map和EspF可以单独或协同引起细胞线粒体功能障碍。
- 杨健朱红任碧轩
- 关键词：线粒体膜电位线粒体功能障碍
- EPEC粘附相关蛋白融合表达载体的构建及表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建与EPEC粘附相关蛋白IntiminC300、EspA、BfpA融合表达载体,并进行表达。方法用PCR方法从EPEC染色体中调取intiminC300、espA、bfpA基因,用基因重组的方法把3个基因片段用2个(Gly4Ser)3连接肽串联克隆到载体pQE30的多克隆区,转化宿主菌M15,用IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western blot检测表达的融合蛋白。结果酶切和测序表明成功构建了融合表达载体,SDS-PAGE检测表达蛋白的分子质量单位分别为36、43和76kd,与理论值相符,Western blot显示表达的融合蛋白均能被抗His标签抗体识别。结论本研究成功构建了EPEC粘附相关融合蛋白表达载体,并表达目的蛋白,为进一步研究融合蛋白的免疫原性奠定了基础。
- 杨健王朝莉彭丽娟杨晓红
- 关键词：EPEC粘附融合蛋白
- 形成性评价在医学微生物学教学中的应用研究
- 2014年
- 形成性评价是对学生学习情况进行动态评价和及时反馈,将'PBL-案例'教学法运用于医学微生物学的教学活动中,尝试引入新的考核内容,形成具有学科特色的评价体系,利于提高学生学习兴趣、发掘学生潜力,有效提高教学质量,更易于被学生接受。
- 彭丽娟杜经纬常晋霞朱红李雪璐杨健胡为民
- 关键词：PBL教学法医学微生物学
- S1P1受体细胞模型的构建及其功能特性的初步研究被引量：1
- 2008年
- 目的构建1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)的细胞模型,初步探讨其介导的功能特性。方法用PolyFect,将包含全长人S1P1编码区与EGFP融合基因的载体HA-S1P1-Myc-EGFP-N1转入CHO细胞,经G418筛选,获得S1P1-EGFP-CHO稳定细胞株。以空载体pEGFP-N1转染的CHO稳定细胞株作为阴性对照,镜下观察细胞的形态。100nM FTY720处理S1P1-EGFP-CHO细胞5、24小时后用荧光显微镜观察S1P1在细胞上的表达。结果成功构建S1P1-EGFP-CHO细胞模型,表达S1P1的细胞变圆,FTY720导致该细胞模型的S1P1长时间内化。结论S1P1-EGFP-CHO细胞可作为S1P1功能特性研究的细胞模型,S1P1能使细胞变圆,FTY720能导致S1P1长时间内化。
- 胡为民唐恩洁杨健敬保迁任碧轩
- 关键词：FTY720内化CHO细胞
- 模拟实验在病原生物学与免疫学实验教学中的应用被引量：3
- 2018年
- 病原生物学实验对象多为病原生物体,免疫学实验所用试剂多为诊断性抗体。因此传统真实的实验,例如:结核分枝杆菌镜检、钩虫卵镜检、免疫学玻片凝集实验与斑点ELISA实验等具有潜在生物安全和实验成本高昂的特点,在本实验室难以大规模开展。而模拟实验是本实验室在实验成本增加与生物安全压力下,开展地一类选用替代标本或试剂模拟真实实验过程与结果的实验。此类模拟实验在本实验室开展的过程中能够有效避免生物安全与实验成本高昂的问题,实验过程与结果相对真实有效。因此,在对医学生实践能力培养与课程知识体系的构建上,此类模拟实验具有重要意义。
- 刘鹏王燕袁磊杨继文朱兴春杨健
- 关键词：病原生物学免疫学实验教学耻垢分枝杆菌
- 重组杜氏利什曼原虫Pxn1、TryP、假定蛋白CAJ07026和GDPMP蛋白刺激BALB/c小鼠的免疫应答状态被引量：3
- 2017年
- 目的观察重组杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)过氧化物还原酶1(peroxidoxin-1,Pxn1)、锥虫氧化还原过氧化物酶(tryparedoxin peroxidase,Try P)、假定蛋白CAJ07026(hypothetical protein CAJ07026.1,Hyp07026)和甘露糖-1-磷酸胍氨酸转移酶(GDP-mannose pyrophosphorylase,GDPMP)蛋白刺激BALB/c小鼠免疫应答状况。方法逆转录PCR(RT-PCR)分别扩增杜氏利什曼原虫Pxn1、Try P、Hyp07026和GDPMP编码基因,克隆入质粒p QE30,构建重组质粒p QE30-Pxn1、p QE30-Try P、p QE30-Hyp07026和p QE30-GDPMP,转化至大肠埃希菌,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。采用NTA-Ni盐凝胶层析柱,自然条件方式纯化重组蛋白rPxn1和rTry P,变性条件方式纯化重组蛋白rHyp07026和rGDPMP。25只BALB/c小鼠随机均分成5组,即rPxn1、rTry P、rHyp07026、rGDPMP免疫组及PBS对照组,免疫组小鼠分别以相应重组蛋白进行免疫,第1周免疫组小鼠皮下注射100μg相应的重组蛋白,隔周以50μg相应的重组蛋白加强免疫3次,对照组小鼠注射等量PBS。第3次加强免疫后1周,将各组小鼠脱颈处死,制备单个脾细胞,提取抗原刺激后小鼠脾细胞总RNA,用q RT-PCR微阵列检测抗原刺激后小鼠脾细胞内反映免疫应答的细胞因子转录水平表达谱。结果Pxn1、Try P、Hyp07026和GDPMP编码基因经PCR扩增,其产物大小分别为570、610、1 040和1 200 bp;经测序证实,与Gen Bank中的相关序列一致。重组质粒p QE30-Pxn1、p QE30-Try P、p QE30-Hyp07026和p QE30-GDPMP经IPTG诱导后均可在大肠埃希菌内高效表达,rGDPMP、rPXNT1、rTXNT和rHyp07026蛋白相对分子质量(Mr)分别为45 000、22 000、23 000和38 000。rGDPMP、rPXNT1、rTXNT和rHyp07026免疫小鼠的脾细胞内84个细胞因子基因的m RNA表达中,与PBS对照小鼠脾细胞比较,高水平表达的IL-1f6分别是对照组的96.22、271.54、108.51和250.15倍,IL-17f分别是对照组的105.54、35.71、53.38和53.57倍,IL-10分别是对照组的21.68、27.51、24.45�
- 敬保迁谢勇恩胡为民杨健王朝莉冯莉
- 关键词：杜氏利什曼原虫
- 基因组免疫系统被引量：6
- 2005年
- 随着对RNAi现象及其功能的深入研究 ,揭示dsRNA/siRNA具靶向降解特异性mRNA、抑制相应基因表达作用 ,有抵抗病毒和转座子入侵基因组的重要功能 ,故被称为“基因组免疫系统”。本文综述了该系统的发现、功能、作用机制和应用前景。
- 唐恩洁杨健朱道银
- 关键词：基因组免疫系统RNAISIRNADSRNA
- 慢病毒介导的RNA干扰对乙型脑炎病毒感染的抑制作用
- 2022年
- 目的:研究由慢病毒介导的RNA干扰对乙型脑炎病毒(JEV)感染细胞与小鼠的抑制作用。方法:以JEV的C、NS3、NS4A和NS5基因为靶点,设计特异性siRNA序列,并构建重组传导慢病毒。对慢病毒预处理的BHK21细胞接种JEV,并通过相对定量PCR、病毒蚀斑和间接免疫荧光实验检测慢病毒对JEV的抑制作用。对慢病毒预处理的7日龄乳鼠脑内接种JEV,5 d后测定其脑组织中的病毒滴度;选取3周龄小鼠做攻毒保护实验。结果:在细胞中,4种重组慢病毒均使JEV的RNA载量与病毒滴度降低(P<0.05),其中LV-C组的RNA载量降低了89.7%,病毒滴度下降约1200倍。4组乳鼠的脑组织中,JEV病毒滴度均降低(P<0.05),其中LV-C组病毒滴度下降约1700倍;4种重组慢病毒对3周龄小鼠的攻毒保护率为50%~70%。结论:由慢病毒介导的靶向JEV的C、NS3、NS4A与NS5基因的RNAi对JEV感染细胞与小鼠具有抑制作用,且有一定持续性,其中靶向C基因的RNAi的抗病毒效果最强。
- 冯晓娟郑倩冯亚岚黄荣杨健袁磊
- 关键词：乙型脑炎病毒慢病毒RNA干扰抗病毒
- COL9A2基因野生型与G143C、G884A突变型质粒构建及鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的:构建IX型胶原α2(collagen type IX alpha 2 chain,COL9A2)基因野生型与G143C、G884A突变型质粒,为进一步研究COL9A2基因功能奠定基础。方法:应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、酶切、连接等技术,将COL9A2基因野生型、携带突变位点G143C与G884A的基因分别插入p UC57空质粒中,基因测序技术进行鉴定。结果:经酶切和基因测序证实COL9A2基因野生型与G143C、G884A突变型分别插入p UC57质粒中。结论:成功构建了p UC57-COL9A2基因野生型、p UC57-p. Gly48Ala和p UC57-p. Gly295Asp突变型质粒。
- 陈蓉罗家明张微胡为民杨健朱红
- 关键词：野生型突变型
