山形达也
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
- 供职机构：沈阳药科大学生命科学与生物制药学院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- GD1a对基质金属蛋白酶-9在不同细胞类型中表达的调控作用被引量：2
- 2009年
- 目的在不同的细胞类型中,检测神经节苷脂GD1a是否抑制基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。方法采用逆转录PCR法和酶谱法检测MMP-9及MMP-2的表达。结果在鼠黑色素瘤B16细胞中,神经节苷脂GD1a促进MMP-9的表达,而在小鼠肺癌Lewis细胞、人单核细胞THP-1及人子宫颈癌HeLa细胞中,神经节苷脂GD1a降低MMP-9的表达。在上述细胞中,神经节苷脂GD1a不影响基质金属蛋白酶MMP-2的表达;肿瘤坏死因子TNF-α在这几种细胞中均能促进MMP-9的表达,但对MMP-2无影响;在B16细胞中,GD1a通过胞窖膜介导信号传递,并且主要通过ERK促进MMP-9的表达,而在Lewis细胞中,GD1a不通过胞窖膜介导信号传递,但部分通过p38、ERK和JNK抑制MMP-9表达。结论在不同的细胞类型中,神经节苷脂GD1a能够激活不同的信号转导途径。
- 王晓东吴英良山形贞子山形达也
- 关键词：神经节苷脂基质金属蛋白酶-9B16细胞THP-1细胞HELA细胞
- 细胞质唾液酸酶(Neu2)通过Cdk2通路抑制FBJ-LL细胞生长被引量：2
- 2010年
- 目的研究细胞质唾液酸酶(neuraminidase 2,Neu2)调控FBJ-LL细胞生长的作用机制。方法利用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptional-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞内Neu2及周期蛋白依赖性激酶2(cyclin dependent kinase 2,Cdk2)的mRNA表达水平,采用酶活性检测法检测细胞内总唾液酸酶的活性,细胞活性法检测细胞的生长情况,碘化丙啶染色法辅助流式细胞仪分析处于不同细胞周期的DNA含量分布。结果Neu2 sense cDNA转染的FBJ-LL细胞中Neu2 mRNA的表达显著升高,其总唾液酸酶的活性也随之升高。FBJ病毒诱导的小鼠骨肉瘤(FBJ-LL)细胞中Neu2的过量表达可以抑制该细胞的生长,升高该细胞中处于细胞周期G1期细胞的相对数量,同时抑制了该细胞中的Cdk2的mRNA表达水平。结论Neu2通过抑制细胞周期分子Cdk2的表达来阻碍FBJ-LL细胞DNA合成,从而实现对FBJ-LL细胞的生长抑制。
- 陈阳吴英良山形贞子山形达也
- 关键词：细胞生长抑制
- 在无血清条件下TNFα通过Pkn1和MAPK-Erk通路对FBJ细胞生长的调控作用被引量：6
- 2009年
- 目的研究肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)在无血清条件下作为生长因子促进FBJ细胞生长的信号通路。方法用细胞活性检测法分析细胞的活性;分别用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptional-polymerase chain reaction,RT-PCR)法和免疫印迹法检测细胞中TNFα的表达以及胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,Erk)、p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的磷酸化水平。结果在无血清培养基培养条件下,经TNFα(10μg.L-1)处理的FBJ细胞明显对抗无血清条件下诱发的细胞死亡,TNFαsense cD-NA转染的FBJ-LL和FBJ-S1细胞均能提高其在正常培养基以及无血清培养基中的生长速度,TNFα是FBJ细胞中重要的生长因子之一;蛋白酶N1(protein kinase N1,Pkn1)siRNA可明显沉默目的基因Pkn1的表达,同时降低TNFα的含量;Pkn1沉默的细胞在无血清条件下的生长明显被抑制;TNFα处理的细胞能迅速刺激Erk的磷酸化,Erk沉默的FBJ-LL细胞的生长速度明显降低,TNFα通过Erk信号通路诱发细胞生长;TNFα亦能诱导另一有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-ac-tivated protein kinase,MAPK)家族p38的磷酸化;神经节苷脂GD1a可降低TNFα在FBJ细胞中的表达,TNFα诱发的无血清条件下的生长速度也被神经节苷脂GD1a抑制。结论在无血清条件下,TNFα通过Pkn1和MAPK-Erk通路调控小鼠骨肉瘤FBJ细胞的生长。
- 王丽王毅楠吴英良山形贞子山形达也
- 关键词：胞外信号调节激酶细胞死亡神经节苷脂
- 低转移性和高转移性的FBJ骨肉瘤细胞在脂筏上的区别
- 2007年
- 目的通过寻找低转移性和高转移性的FBJ骨肉瘤细胞在脂筏上的区别来研究神经节苷脂(GD1a)调控肿瘤转移能力的机制。方法提取细胞的脂筏成分,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和二维电泳来检测转移性不同的细胞在脂筏上的蛋白组成区别,并用免疫印迹法(Western blot)来分析转移性不同的细胞在脂筏上的磷酸化区别。结果通过以上方法,发现了转移性不同的细胞在脂筏上的蛋白组成上有所不同,且磷酸化呈现明显区别,这些变化可能与调控肿瘤细胞的转移有关。
- 胡丹山形贞子山形达也
- 关键词：脂筏二维电泳
- 间质作用因子1通过正调控窖蛋白1抑制FBJ-S1-H的迁移性
- 2011年
- 目的证明间质作用因子(stromal interaction molecule1,Stim1)在FBJ诱导的小鼠骨肉瘤细胞中的抑癌作用。方法在Stim1高表达的FBJ-S1-H细胞采用Stim1以siRNA干扰技术得到Stim1沉默的几株S1-H单克隆细胞株,通过细胞行为学方法和RT-PCR技术对其mRNA进行研究,通过明胶酶谱法对细胞基质金属酶活性进行研究。结果通过细胞行为学方法证明,Stim1的沉默提高了细胞的迁移性,通过对mRNA表达的研究发现,Stim1沉默引起了多种基因表达的变化,其中包括基质金属酶9(matrix mexalloprotelnase 9,MMP-9)的升高,窖蛋白(caveolinl,Cav1),甾醇调控因子Srebf1的降低等,提高单克隆细胞中的Cav1含量可以使细胞迁移性降低。结论实验结果证明在FBJ-S1-H细胞中,Stim1能够抑制细胞的移动性,沉默Stim1的表达能够提高细胞的迁移性。
- 黄澄澄姜嘉慧吴英良山形达也
- 关键词：基质金属蛋白酶-9
- SB203580通过激活ERK通路调控肿瘤转移抑制因子caveolin1的表达
- 哺乳类动物Caveolin家族是一组具有21-25KD大小的跨膜蛋白,包括caveolin-1,2,3三个成员。其中,cav2目前尚未发现有生理功能,而Cav1和Cav3则可通过抑制细胞内某些酶活性调控很多信号转导通路,...
- 阚启明山形达也
- 文献传递
- GM3通过MMP-9调节B16细胞的运动性被引量：1
- 2008年
- 目的通过不同的方法来研究GM3对MMP-9的调节作用。并进一步验证了GM3对细胞运动性的调节。方法分别用RT-PCR,Zymography,HPTLC,western blotting和transwell的方法来检测MMP-9的mRNA表达水平,MMP-9的活性,GM3,Akt的磷酸化以及细胞的运动性。结果通过几种不同的方法来研究是否GM3参与MMP-9的调空:a.通过转染半乳糖转移酶的顺反序列来调节GM3的表达,从而初步证明GM3可以调节MMP-9的表达;b.通过外加GM3可以清楚的观察到MMP-9的表达量升高;c.神经节苷脂抑制剂D-PDMP的加入更进一步的证明了MMP-9的表达始终与GM3的表达相关;另外,通过PI3K抑制剂的试验进一步证明了GM3通过PI3K来调节MMP-9的表达。在此基础上,更进一步的证明了神经节苷脂可以调节细胞的运动性。结论GM3可以通过PI3K/Akt信号传导途径来正调控MMP-9的表达,并且调节细胞的运动性。
- 王璞张景海山形贞子山形达也
- 窖蛋白1在无血清状态下诱导FBJ细胞死亡被引量：1
- 2008年
- 目的研究无血清状态下,FBJ-S1细胞较FBJ-LL细胞更易死亡的原因。方法用细胞活性检测法分析细胞的活性,分别用HPTLC法、逆转录PCR法和免疫印迹法检测细胞中GD1a和窖蛋白1(caveolin-1)的含量。结果研究表明,在无血清培养基培养条件下,富含神经节苷脂GM3和GD1a的低转移性的FBJ-S1小鼠骨肉瘤细胞趋向死亡,但对含有几乎相同量GM3而无GD1a表达的高转移性的FBJ-LL细胞的生长却未见明显影响。同时发现:a.FBJ-S1细胞富含窖蛋白1,而FBJ-LL细胞中窖蛋白1表达量则较低;b.利用小干扰基因沉默技术在FBJ-S1细胞中沉默窖蛋白1的表达,结果使细胞存活率升高;c.使用GD1a处理FBJ-LL细胞导致其趋向死亡,通过免疫印迹法检测窖蛋白1发现其蛋白表达量增加。结论在无血清培养条件下,窖蛋白1诱导FBJ细胞的死亡。
- 郑大勇王毅楠王丽吴英良山形贞子山形达也
- 关键词：神经节苷脂细胞死亡
