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雷氏普罗威登斯菌青霉素G酰化酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：4: 2002年; 利用PCR和分子克隆技术从雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)(ATCC29944)的基因组DNA中获得一个青霉素G酰化酶(penicillin G acylase,PGA)基因并将其装入表达质粒pET24a。携带有重组质粒pETPGA的Escherichia coli基因工程菌BL21(DE3)/pETPGA实现了PGA的高效表达。对发酵条件的研究表明基因工程菌在24℃、添加5g/L甘油条件下以1.0mmol/L IPTG诱导1.5h酶活力即达到993.4U/L,比野生菌酶活力(15U/L)提高了66倍。; 周政张爱晖周丽萍杨晟姜涌明袁中一; 关键词：青霉素G 酰化酶基因大肠杆菌克隆

青霉素G酰化酶通用表达载体的构建方法初探被引量：2: 2003年; 结合信号肽预测软件 (SignalP)对现有的青霉素G酰化酶 (PGA)的大肠杆菌枯草杆菌穿梭表达质粒pZ0 1进行信号肽的合理设计 ,在其C 端置换 2个氨基酸 ,即引入NotI酶切位点序列 ,从而构建成PGA的通用表达载体。将粪产碱杆菌 (Alcaligenesfaecalis)的PGA基因导入其中 ,构建成表达质粒pzfpganoti.,转入枯草杆菌进行表达 ,测活结果显示 ,表达产物具有生物活性 (酶的平均活力为 0 .18U ml发酵液 )。为进一步应用信号肽预测软件进行表达系统的研究、设计打下了基础。; 陈美娟周政袁中一; 关键词：信号肽青霉素G酰化酶粪产碱杆菌基因表达

巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的噬菌体展示被引量：1: 2002年; 将包含信号肽和琥珀终止密码子的完整巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶基因克隆到噬菌粒pSurfscript.通过引入的 11肽连接青霉素G酰化酶C端与噬菌体外壳蛋白g3p的N端 .以构建的噬菌粒pSurfpga转化具有琥珀突变的大肠杆菌XL1 blue ,以辅助噬菌体M13KO7超感染 ,进行青霉素G酰化酶的表达和在噬菌体表面的展示 .经NIPAB法测活 ,酶的平均活力为 2 .5× 10 -15U cfu .首次在噬菌体表面展示出有活力的巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶。; 周政陈美娟李家大杨晟刘曙照袁中一; 关键词：巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶噬菌体展示

青霉素G酰化酶在枯草芽孢杆菌中的分泌表达: ＜正＞青霉素G酰化酶（Penicillin G Acylase,E.C.3.5.1.11,简称PGA）是β内酰胺类抗生素工业中最为关键的酶。在偏碱性环境下,PGA催化青霉素G水解产生6-氨基青霉烷酸,催化头孢霉素G水解产...; 赵秋伟余志良周政袁中一; 文献传递

巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的定点突变及其动力学性质研究被引量：7: 2003年; 为了提高青霉素G酰化酶 (PGA)在酸性及有机溶剂中的稳定性 ,以大肠杆菌的晶体结构为模板 ,用软件PMODELING同源模建巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的三维结构并且选择PGA分子表面的合适碱性氨基酸突变为丙氨酸。通过三种不同的快速PCR介导定点突变的方法 ,将位于PGA的α亚基 2 1位、12 8位和β亚基 4 92位、5 12位的赖氨酸残基分别突变为丙氨酸 ,获得四个突变酶Kα0 2 1A、Kα12 8A、Kβ4 92A和Kβ5 12A。其中Kα12 8A和Kβ5 12A保持与野生型相近的酶活力 ,其动力学性质如最适温度、最适pH、Km及Kcat没有明显变化 ;突变酶Kα0 2 1A和Kβ4 92A则丧失了酶活力。上述结果表明 ,PGA分子表面非活性中心的赖氨酸→丙氨酸点突变使突变子的性状发生了分化 ,突变效应呈现出丰富的多样性。该有理设计不但可以提高酶的稳定性。; 周丽萍周政袁中一; 关键词：巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶定点突变动力学性质

不同表达元件对青霉素G酰化酶在枯草芽孢杆菌中分泌表达的影响: ＜正＞青霉素G酰化酶（Penicillin G Acylase,E.C.3.5.1.11,简称PGA）是β内酰胺类抗生素工业中最为关键的酶。在偏碱性环境下,PGA催化青霉素G水解产生6-氨基青霉烷酸,催化头孢霉素G水解产...; 赵秋伟余志良周政蔡瑞袁中一; 文献传递

蜘蛛神经肽类毒素基因的克隆和在Pichia Pastoris的表达: 虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(Huwentoxin-Ⅰ,HWTX-Ⅰ)是90年代初从中国珍稀毒蛛种虎纹捕鸟蛛(SelenocosmiaHuwena)毒腺中分离的一种新型肽类神经毒素,33个氨基酸,二维核磁共振方法解析HWTX-Ⅰ的...; 李敏周政何宁佳聂东宋徐辉明梁宋平; 文献传递

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周政