周宗安
- 作品数：101 被引量：345H指数：10
- 供职机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省应用基础研究计划江苏省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 抗重组人巨细胞病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2001年
- 为了获得抗人巨细胞病毒 (HCMV)单克隆抗体 (McAb)。采用重组HCMV(rhCMV)gp5 2蛋白片段免疫Balb/c小鼠 ,将免疫鼠脾细胞与Sp2 /0细胞融合 ,经ELISA法筛选阳性克隆及测定效价 ,用免疫印迹法进行特异性鉴定。最终获得 4株 (3E9,5A6,4G12 ,2H2 )能稳定分泌高效价抗rhCMVMcAb的杂交瘤细胞。其培养上清的ELISA效价分别为 :1∶2 0 48,1∶10 2 4,1∶10 2 4,1∶5 12 ;腹水效价分别为 :1× 10 -7,1× 10 -7,1× 10 -6,2× 10 -6。它们分别识别gp5 2蛋白上的 2个不同的抗原表位 ,2H2 识别gp5 2蛋白上的一个表位 ,3E9,5A6和 4G12 识别另一个表位。
- 郑纪山周宗安邓小昭李越希何亮高健王永山李鹤龄
- 关键词：人巨细胞病毒单克隆抗体抗原表位
- 猪囊虫病基因工程疫苗的研制及应用被引量：13
- 2001年
- 从猪带绦虫六钩蚴 c DNA文库中筛选目的基因并进行克隆表达 ,重组抗原用血清学方法和猪体免疫试验进行鉴定 ,筛选保护性抗原基因。将具有免疫保护作用的重组抗原纯化 ,并与免疫刺激复合物佐剂结合 ,制成猪囊虫病基因工程疫苗。对工程菌的培养发酵、重组抗原的下游纯化及疫苗的配制、疫苗的中间试制进行了研究 ,确定了一套比较完善的生产工艺。应用昆明小鼠建立了猪囊虫病的实验动物模型 ,应用该模型进行上述疫苗的免疫预防试验 ,免疫 1次和 2次的免疫保护率分别为 96.9%和 98.4 %。本动物的免疫预防试验显示 ,疫苗安全性好 ,免疫保护率达 92 .2 % ,且免疫组发现的囊虫多数已死亡。在流行区进行了田间试验和区域试验。免疫猪未有不良反应 ,囊虫感染率分别由 2 0 %降为 1 .1 %和 5.4 %降为 0 .2 1 %。用该疫苗对人工感染的囊虫病猪进行免疫治疗 ,发现在感染早期的治疗效果较好。免疫动物的体液免疫和细胞免疫的检测结果显示 ,该疫苗刺激机体产生抗体的时间早、持续时间长、效价高 ;可显著提高淋巴细胞转化率及 E-RFC和 Ea-RFC细胞、ANAE+细胞和粗粒型 ANAE+细胞、抑制 /杀伤性 T细胞亚群的数量。以上结果表明 ,用大肠杆菌表达的重组抗原制备的猪囊虫病基因工程疫苗安全、高效 ,且成本低廉 ,可规模化生产 ,
- 唐雨德顾志香刘玉周宗安郁兴明陶开华翟春生
- 关键词：猪囊虫病基因工程疫苗免疫预防免疫治疗
- 用DIG－标记核酸探针鉴定传染性法氏囊病病毒被引量：4
- 1994年
- 用ＤＩＧ－标记ＩＢＤＶｃＤＮＡ探针进行斑点杂交试验鉴定传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）。实验结果证明，该探针能与试验的１０株ＩＢＤＶ的ＲＮＡ发生限性杂交反应，结果清晰稳定，无非特异性反应。本试验是一种新的敏感的ＩＢＤＶ鉴定方法。
- 王永山周宗安翟春生王元伦方元顾志香
- 关键词：IBD病毒CDNA探针
- 人胰岛素原类似物(BKRA)基因的合成与表达被引量：7
- 1998年
- 为了利用基因工程生产胰岛素，按照已知的人胰岛素Ａ、Ｂ链氨基酸序列和大肠杆菌偏爱的氨基酸密码子设计并合成了人胰岛素原类似物（ＢＫＲＡ）基因，其中以赖（Ｋ）－精（Ｒ）二肽编码区取代人胰岛素原Ｃ肽编码区．为了避免其编码蛋白在大肠杆菌中表达时被降解，通过人工接头将２个ＢＫＲＡ基因串联起来，接头部分氨基酸序列为Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ．将串联的ＢＫＲＡ基因克隆到表达载体ｐＥＴ－２８ａ（＋），实现了在大肠杆菌中的融合表达，表达产物以包含体形式存在，约占细菌总蛋白２４％．表达产物氨基末端具有六组氨酸肽段，以ＨｉＴｒａｐ凝胶进行亲和层析，一步纯化可达纯度９５％以上．放射免疫测定表明，纯化的融合蛋白具有胰岛素抗原活性．
- 房德兴王永山周宗安翟春生顾志香王元伦
- 关键词：基因合成纯化
- 抗胰岛素单克隆抗体的研究
- 1997年
- 用人工合成的人胰岛素原类似物基因大肠杆菌表达产物免疫 BALB/ c小鼠制备免疫脾细胞 ,与小鼠骨髓瘤 SP2 / 0细胞系融合 ,建立了 7株能分泌抗胰岛素单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞系。间接 EL ISA和免疫印迹试验结果表明 ,该单克隆抗体对人。
- 王永山房德兴周宗安翟春生顾志香
- 关键词：胰岛素单克隆抗体
- 传染性法氏囊病病毒的生态学与流行病学研究被引量：39
- 1998年
- 血清学调查结果表明，麻雀、鸭、鹅等均可自然感染传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），其血清阳性率分别为７．４％（４／５４），９５．５％（３６３／３８０）和９．４％（１１／１１７）。从鸭和麻雀分离到的ＩＢＤＶ可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞，并产生ＣＰＥ，对ＳＰＦ鸡有致病性。病毒核酸和结构蛋白的电泳分析结果表明，鸡源、鸭源和麻雀源ＩＢＤＶ均有２条核酸带，５条蛋白带，毒株间的病毒核酸及结构蛋白电泳迁移率无显著差异，但其结构蛋白的相对含量不尽一致。经鉴定，鸡源、鸭源和麻雀源ＩＢＤＶ均属血清Ⅰ型，为同源病毒。本研究结果提示，鸡并非是ＩＢＤＶ的唯一自然动物宿主，非鸡禽鸟类宿主的存在可引起ＩＢＤ的传播和续源流行，也为ＩＢＤＶ的变异提供了特殊的生态条件，成为诱导ＩＢＤＶ变异的另一重要因素。
- 周宗安王永山邓小昭刁振宇高建施正良罗函禄方元
- 关键词：传染性法氏囊病病毒生态学流行病学
- 囊虫病循环抗原酶联免疫试剂检测盒的研制被引量：13
- 1999年
- 以部分纯化囊虫抗原免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠，取其脾细胞与 Ｓ Ｐ２／０ 细胞融合制备抗囊虫循环抗原（ Ｃ Ａ） Ｍｃ Ａｂ ，共获得 ８ 株分泌抗囊虫 Ｃ Ａ Ｍ ｃ Ａｂ 细胞株。经鉴定，筛选出组合后能获得最佳检测效果的 Ｃ Ａ Ｍ ｃ Ａｂ细胞株 Ｍ ｃ Ａｂ １ Ｃ７（包被）和 Ｈ Ｒ Ｐ１ Ｂ５ 作为检测用的 Ｍ ｃ Ａｂ，用其建立了检测囊虫 Ｃ Ａ 的双抗体夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法，并研制了囊虫病 Ｃ Ａ 检测试剂盒。试剂盒用于检测囊虫病 Ｃ Ａ，敏感、特异、快速、简便，囊虫病血清 Ｃ Ａ的检出率为 ９１．４３％ ，脑脊液 Ｃ Ａ 的检出率为 ９４．４４％ 。
- 刘玉唐雨德顾志香周宗安王永山于明明郁兴民翟春生
- 关键词：囊虫病循环抗原酶联免疫吸附试验
- 全文增补中
- 应用免疫酶染色法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究被引量：2
- 1995年
- 用免疫酶染色法检测Ｖｅｒｏ细胞培养物、陈旧石蜡切片和人工感染试验鸡组织中的ＡＶＡＶ，并比较了ＡＶＡＶ强毒和弱毒株在组织中的分布情况。结果发现，试验鸡于感染ＡＶＡＶ弱毒株后１～５天、感染ＡＶＡＶ强毒株后１～９天出现病毒血症；跗关节、跖趾关节、趾关节、趾屈肌健、脾脏、肝脏等组织中病毒的检出率最高，存在时间也最长；在感染后３～２０天于感染鸡法氏囊、感染后３～１１天于感染鸡胸腺中检出了强毒株，在这两组织中未检出ＡＶＡＶ弱毒株。感染８小时后的Ｖｅｒｏ细胞培养物和陈旧石蜡切片均被检出ＡＶＡＶ。
- 唐雨德周宗安翟春生王元伦顾志香
- 关键词：免疫酶染色法鸡病病毒性关节炎病毒
- 传染性法氏囊病病毒VP2基因高变区序列分析被引量：7
- 2000年
- 根据传染性法氏囊病病毒 (IBDV)VP2基因cDNA序列 ,在VP2基因高变区设计一对引物 ,用RT_PCR方法扩增IBDV分离株JS3和JS4。将扩增片段克隆后以双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。JS3和JS4的同源性最高达 98% ,与已发表的vvIBDV、IBDV变异株、IBDV经典株及IBDV弱毒株核苷酸序列的同源性在 92 %～ 98%之间。根据IBDV的大ORF推导出该片段编码蛋白的氨基酸序列 ,JS3和JS4的同源性最高达 97% ,与上述其它病毒的同源性在 91 %～ 97%之间 ;七肽区的氨基酸序列 ,在强毒株完全相同 ,而在弱毒株有一个丝氨酸突变成了其它氨基酸。
- 王永山周宗安高健刁振宇邓小昭赵新泰李锦军罗函禄
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2基因高变区同源性分析
- 用反向亲和层析法纯化猪瘟病毒抗原被引量：3
- 1992年
- 用兔抗牛睾丸细胞培养物的IgG琼脂糖4B偶联制备亲和层析柱,以反向亲和层析法纯化SFV—C抗原,即通过亲和层析免疫吸附除去PEG沉淀法部分纯化抗原中的残留牛睾丸细胞培养物成分。结果表明.通过3次反向亲和层析柱的纯化抗原.其总蛋白去除率达76.9％;应用纯化前后抗原检测猪瘟免疫血清.纯化抗原可以除去猪瘟免疫血清中的非相关抗体反应,确保猪瘟免疫抗体检测的特异性.
- 刘劲松房德兴王元伦顾志香周宗安
- 关键词：猪瘟病毒抗原
