卢文艺
- 作品数：17 被引量：64H指数：6
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- 铁过载对骨髓损伤小鼠造血功能的作用及机制研究被引量：5
- 2014年
- 目的 探讨铁过载对骨髓损伤小鼠造血功能的作用及可能机制.方法 将20只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、铁剂组、照射组、照射＋铁剂组,每组5只.通过给予小鼠4Gyγ射线照射及腹腔注射右旋糖酐铁建立骨髓损伤小鼠铁过载模型,观察各组小鼠铁负荷情况及骨髓单个核细胞（BMMNC）内可变铁池水平,检测各组小鼠外周血常规的改变;检测BMMNC数,红系、粒-单核系细胞比例及造血干/祖细胞功能改变;分析骨髓细胞,红系和粒-单核系细胞活性氧物质（ROS）水平.结果 ①骨髓活检及流式细胞术检测均显示发生铁过载.②与对照组相比,照射组小鼠血小板计数显著降低[（801.9±81.2）×10^9/L对（926.0±28.2）×10^9/L],BMMNC数及红系、粒-单核系细胞比例明显降低,骨髓造血集落形成单位（CFU）数和造血干细胞单克隆培养数明显减少（P值均＜0.05）.③与照射组相比,照射＋铁剂组小鼠血小板计数显著降低[（619.0±60.9）×10^9/L对（801.9±81.2）×10^9/L],红系、粒-单核系细胞比例明显降低,骨髓造血CFU数和造血干细胞单克隆形成数明显减少（P值均＜0.05）.④照射＋铁剂组BMMNC、红系和粒-单核系细胞ROS水平较照射组分别升高1.94、1.93和2.70倍（P值均＜ 0.05）.结论 4Gyγ射线照射可造成小鼠骨髓损伤,在骨髓损伤基础上发生铁过载会加重损伤造血干/祖细胞功能,进一步研究发现可能由铁过载引起BMMNC内ROS水平升高所致.
- 柴笑赵明峰李德冠张宇辰卢文艺曹小立孟娟霞游权孟爱民
- 关键词：铁超负荷造血干细胞骨髓损伤
- MDS铁过载小鼠模型建立及鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的:建立一种MDS铁过载小鼠模型,研究铁过载对MDS的影响。方法:通过逆转录病毒,将外源突变基因RUNX1-S291fs插入小鼠骨髓单个核细胞基因组,然后移植给经60Coγ射线照射的C57BL/6小鼠。8周后,腹腔注射铁剂,建立MDS铁过载小鼠模型。移植24周后,取小鼠外周血、骨髓、股骨、肝脏和脾脏进行鉴定:对外周血和骨髓细胞行瑞氏染色观察形态特征;对股骨、肝脏和脾脏组织行HE染色检测病理变化;对肝脏、脾脏和骨髓行普鲁士蓝染色观察铁沉积情况;应用流式细胞术检测小鼠骨髓细胞抗原表达情况;对骨髓单个核细胞和脾组织蛋白行免疫印迹实验,确认RUNX1-S291fs基因转入并表达蛋白。移植后对小鼠定期监测血常规指标和移植细胞嵌合率。结果:相比空白质粒对照小鼠,RUNX1-S291fs突变小鼠外周血白细胞计数、血红蛋白水平和血小板计数均降低;外周血和骨髓细胞显示病态造血;肝脏和脾脏明显增大;在股骨、肝脏和脾脏可见组织结构异常;骨髓细胞表面抗原表达异常;骨髓细胞和脾组织有RUNX1-S291fs蛋白表达。相比生理盐水对照小鼠,铁剂注射小鼠普鲁士蓝染色可见骨髓、肝脏和脾脏组织有明显铁沉积。结论:注射铁剂的RUNX1-S291fs突变组小鼠合并有MDS和铁过载的病理特征,成功构建了MDS铁过载小鼠模型,为研究铁过载对MDS的影响奠定了基础。
- 金鑫隋松男徐萍邢艺曹小立王露桥孟娟霞卢文艺崔蕊赵明峰
- 关键词：MDS骨髓移植
- 铁过载催化的氧化应激对骨髓间充质干细胞的影响及其作用机制被引量：6
- 2013年
- 目的探讨铁过载催化的活性氧(ROS)生成对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法体外培养MSCs,加入不同浓度(100、200、400μmol/L)的枸橼酸铁铵(FAC),培养12、24、48 h,建立铁过载模型,测定铁过载前后细胞内的不稳定铁池(LIP)和ROS水平,并采用群体倍增时间(DT)检测MSCs的细胞增殖能力,采用Annexin V-PI双标法检测细胞凋亡率,进行蛋白质印迹实验检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(P-p38MAPK)、p38MAPK、蛋白激酶B(AKT)及p53蛋白的表达情况。结果铁过载组MSCs的LIP水平明显高于对照组(平均荧光强度482.49±20.96比303.88±23.37,P<0.05);ROS的水平随FAC浓度增加而升高,在加入FAC浓度为400μmol/L时最高(P<0.05)。用400μmol/L的FAC分别处理12、24、48 h的MSCs DT分别为(1.47±0.11)、(1.80±0.13)、(2.04±0.14)d,均明显长于对照组的(1.20±0.05)d(P均<0.05)。铁过载组MSCs的凋亡率也明显高于对照组[(3.51±1.17)%比(0.66±0.62)%,P<0.05]。与对照组比较,铁过载组P-p38MAPK、p38MAPK、p53蛋白的表达增加,而AKT的表达无明显差异。结论铁过载可通过提高骨髓MSCs的ROS水平来抑制其增殖、诱导其凋亡,此过程可能与p38MAPK-p53信号通路的激活有关。
- 卢文艺赵明峰Sajin Rajbhandary赵楠谢芳肖霞穆娟李玉明
- 关键词：铁过载间充质干细胞活性氧P38丝裂原活化蛋白激酶P53
- 氧化应激对铁过载造血干祖细胞造血功能的影响被引量：12
- 2011年
- 目的 体外诱导脐血来源的造血干祖细胞铁过载,检测参与氧化应激的活性氧物质（ROS）的水平以及对造血干祖细胞造血功能的影响.方法 通过体外培养脐血单个核细胞（MNC）的过程中添加枸橼酸铁铵（FAC）,建立铁过载造血干祖细胞模型.实验分组：对照组、FAC组、FAC＋N-乙酰半胱氨酸（NAC）组、FAC＋谷胱甘肽（GSH）组.检测各组细胞内ROS水平,并用抗氧化剂处理,检验这一过程中ROS、细胞内可变铁池（LIP）、凋亡水平、造血集落形成和脐血各系造血细胞数目的变化.结果（1）在培养液中加入不同浓度FAC（50、100、200、400μmol/L）培养不同时间（6、12、24 h）,发现ROS水平随着FAC的浓度和培养时间变化,且在200μmol/L FAC的培养液中培养24h时ROS水平达到最高.（2）用抗氧化剂（NAC、GSH）联合FAC处理细胞发现,抗氧化剂处理组细胞内总的ROS以及髓系细胞和红系细胞内的ROS明显低于FAC组（均P＜0.05）.（3）在200 μmol/LFAC的浓度下,培养脐血MNC 24 h后细胞内总的LIP、髓系细胞和红系细胞内LIP水平均显著高于对照组（均P＜0.05）,但抗氧化剂NAC和GSH对铁过载细胞内LIP没有明显影响.（4）对脐血造血干祖细胞造血功能的检测发现：FAC组细胞凋亡比例[（20.90±3.45）％]明显高于对照组[（9.20±1.29）％]（P＜0.05）；造血集落形成单位（CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-mix）计数明显低于对照组（前3项两组间差异具有统计学意义,P ＜0.05）；CD34＋、CD33＋、GlyA＋细胞比例及细胞计数均显著低于对照组（均P＜0.05）；这些损伤都可以通过NAC或GSH处理部分恢复.结论 氧化应激在铁过载造血干祖细胞的损伤中扮演着重要角色,可以通过升高细胞内ROS水平抑制其造血功能,清除细胞内多余的ROS能减轻这些损伤.研究结果可为治疗铁过载患者因氧化应激诱导的造血功能低下提供新的靶点和研究思路.
- 谢芳赵明峰朱海波卢文艺徐新女肖霞穆娟刘鹏江李玉明
- 关键词：氧化性应激铁超负荷造血干祖细胞造血功能
- MDS铁过载小鼠模型的建立及铁过载对小鼠生存的影响
- 金鑫隋松男邢艺徐萍曹小立王露桥孟娟霞卢文艺崔蕊赵明峰
- 小鼠铁过载模型的建立及其对骨髓造血功能的影响被引量：14
- 2013年
- 目的通过给小鼠腹腔注射右旋糖酐铁,建立小鼠铁过载模型并观察铁过载对小鼠骨髓造血功能的影响。方法使用随机区组法将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、低剂量铁剂组(质量浓度为12.5 mg/ml)、中剂量铁剂组(质量浓度为25 mg/ml)和高剂量铁剂组(质量浓度为50 mg/ml)。对照组小鼠腹腔注射生理盐水0.2 ml/次,低、中、高剂量铁剂组小鼠腹腔注射右旋糖酐铁0.2 ml/次,每3天注射1次,共注射6周。6周后观察小鼠状态及骨髓、肝脏、脾脏等脏器改变,分析骨髓单个核细胞(BMMNCs)可变铁池水平,并检测外周血象及BMMNCs数目和功能。结果小鼠肝脏、脾脏、骨髓均出现铁过载,骨髓铁过载主要存在于骨髓基质中,BMMNCs内可变铁池无改变;低、中、高剂量铁剂组小鼠骨髓细胞粒-单系集落形成单位数和对照组相比均显著下降(P<0.05);且中、高剂量铁剂组小鼠骨髓细胞红系集落形成单位数、混合系集落形成单位数和对照组相比也显著下降(P<0.05);BMMNCs计数无变化;低、中、高剂量铁剂组外周血白细胞、血小板、红细胞、血红蛋白和对照组相比,差异均无统计学意义,血小板数低剂量铁剂组(780.7±39.60)×109/L、中剂量铁剂组(676.2±21.43)×109/L、高剂量铁剂组(587.3±19.67)×109/L,和对照组(926.0±28.23)×109/L相比有轻度下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过腹腔注射右旋糖酐铁,成功建立了小鼠铁过载模型。进一步研究显示铁过载不但对肝脏、脾脏造成损害,而且可以损伤骨髓造血功能,但对正常骨髓功能的损伤未引起外周血象的改变。本模型为深入研究铁过载对骨髓造血功能的影响及作用机制提供了实验基础。
- 柴笑赵明峰李德冠孟娟霞卢文艺穆娟孟爱民
- 关键词：铁过载动物模型骨髓造血功能
- RSL3诱导急性白血病细胞株MOLM13及其耐药细胞株发生铁死亡的作用及相关机制研究被引量：6
- 2021年
- 目的:探讨铁死亡激活剂RSL3诱导急性白血病细胞株MOLM13及其耐药细胞株发生铁死亡的作用及相关机制。方法:急性白血病细胞株MOLM13与RSL3共同培养,应用CCK-8法检测细胞的增殖活性,应用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平的变化,应用RT-qPCR、Western blot技术检测细胞内谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达。构建MOLM13/IDA、MOLM13/Ara-C耐药细胞株,检测RSL3诱导耐药肿瘤细胞发生铁死亡的现象。收集急性单核细胞白血病患者骨髓样本,应用RT-qPCR、Western blot技术分别检测样本中铁死亡通路相关基因及蛋白的表达。结果:RSL3对MOLM13细胞增殖活性具有明显抑制作用,细胞内的ROS水平增高,铁死亡特异性抑制剂ferrostatin-1可以部分逆转这种现象,经RSL3作用后MOLM13细胞内GPX4基因及蛋白表达下降。RSL3对MOLM13/IDA、MOLM13/Ara-C细胞生长抑制作用较非耐药细胞增强,细胞内的ROS水平增高,ferrostatin-1可以部分逆转这种现象。MOLM13/IDA、MOLM13/Ara-C细胞内GPX4基因及蛋白表达较非耐药细胞增高。复发、难治性急性单核白血病患者骨髓样本中GPX4基因及蛋白表达相较于普通急性单核白血病患者骨髓样本表达增高。结论:RSL3通过抑制GPX4活性诱导非耐药细胞株MOLM13发生铁死亡。MOLM13/IDA、MOLM13/Ara-C较非耐药细胞对RSL3的抑制作用更加敏感,可能基于细胞内GPX4表达差异。复发、难治性急性单核细胞白血病中GPX4基因及蛋白表达高于普通急性单核细胞白血病。
- 程霖金鑫卢文艺孙瑞曹雅青魏运雄王露桥贺小圆袁婷孟娟霞赵明峰
- 关键词：急性白血病耐药细胞活性氧
- 内源性表达白细胞介素21的CIK细胞的抗白血病作用及其机制被引量：8
- 2013年
- 目的研究内源表达白细胞介素2l（IL-21）对外周血来源的细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）抗自血病的作用及其作用机制。方法采集分离健康人外周血单个核细胞，加用细胞因子诱导培养CIK细胞，构建表达IL-21基因的慢病毒载体，感染CIK细胞并鉴定后，四甲基偶氮唑盐（Mqq＂）法检测CIK细胞的增殖能力及杀伤白血病细胞系K562细胞作用；半定量反转录（RT）-PCR法检测CIK细胞干扰素1（IFN-y）、肿瘤坏死因子0（TNF．OL）、TNF．B、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、Fas配体（FasL）和NKG2D分子（NKG2D）的mRNA表达；流式直接免疫标记法检测CIK细胞免疫表型、细胞表面IL-21受体（IL．21R）、FasL及细胞内穿孔素、颗粒酶B的表达；酶联免疫法检测培养上清中IFN-^v和TNF-OL的表达。结果经酶切与测序鉴定，IL-21慢病毒载体构建正确，共转染CIK细胞中有目的基因IL-21的表达。（1）与空载体组相比，内源表达IL-21组总的细胞增殖之间差异无统计学意义（P=0．856），内源表达IL-21组CIK细胞阳性细胞数高于空载体组（24．60％±2．10％比16．95％±4．70％，P=0．042）。（2）内源表达IL．21组CIK细胞对K562细胞的杀伤率高于空载体组（58．4％±8．3％比23．3％±2．8％，P=0．009），作用第5天时，杀伤作用仍能维持在61．2％±6．2％（P：0．003），相比外源性IL-21作用的CIK细胞的杀伤率（44．6％±8．3％比22．8％±2．8％，P=0．034）更强，而且作用时间更长久。（3）内源表达IL-21组CIK细胞表面IL-21R的表达比空载体组增加约2倍。（4）与空载体组比较，内源表达IL-21组CIK细胞IFN--,／和TNF-仪mRNA的表达升高约1．5倍，穿孔素、颗粒酶B、FasLmRNA的表达量升高近2倍，颗粒酶A、TNF-B和NKG2DmRNA的表达与空载体组差异无统计学意义。（5）对mRNA表达差异有统计学意义的指标进-步行蛋白质表达的检测发现
- 赵楠赵明峰Sajin Rajbhandary卢文艺朱海波马立游权肖霞邓琦李玉明
- 关键词：白血病细胞因子诱导杀伤细胞白细胞介素21抗白血病作用
- 氧化应激对骨髓间充质干细胞的影响被引量：6
- 2012年
- 骨髓间充质干细胞(MSCs)是一种成体干细胞,它具有多向分化的能力及免疫调节特性,对维持正常的造血功能及应用于干细胞治疗方面意义重大。氧化应激是指因活性氧增多而引起的机体氧化还原水平失调的状态。氧化应激是影响骨髓MSCs生存的重要因素之一,它可通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、p53等途径诱导MSCs的衰老及凋亡,通过脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子-1(APE/REF-1)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)途径抑制MSCs的增殖及分化;抗氧化应激预处理可增强MSCs的功能。研究氧化应激对MSCs的影响、相关信号转导通路以及如何增强骨髓MSCs的抗氧化应激能力,对更好地治疗造血系统疾病及利用MSCs的再生修复功能进行细胞治疗具有重要意义。
- 卢文艺赵明峰
- 关键词：氧化应激间充质干细胞骨髓信号传导
- 铁过载对脐带血来源的造血干祖细胞及造血支持细胞的作用观察被引量：2
- 2013年
- 目的探讨铁过载对脐带血(UCB)来源的造血干祖细胞及造血支持细胞,尤其是间充质干细胞(MSCs)的损伤作用。方法体外培养脐带血单个核细胞(UCB-MNCs)和脐带血间充质干细胞(UCB-MSCs),向培养液中添加200μmol/L的枸橼酸铁胺(FAC)24 h建立铁过载模型。分为MNCs-CTL组、MNCs-FAC组、MSCs-CTL组、MSCs-FAC组,每组设3个复孔,实验重复3次。检测细胞内活性氧物质(ROS)水平变化、细胞增殖、分化、凋亡以及造血支持作用。结果对UCB-MNCs进行铁过载,MNCs-FAC组造血集落形成单位(CFU-E、CFU-GM、BFU-E、CFU-mix)计数显著低于MNCs-CTL组(P<0.05),MNCs-FAC组造血干细胞(CD3+4)、髓系造血细胞(CD3+3)、红系造血细胞(GlyA+)比例及计数均显著低于MNCs-CTL组(P均<0.05);MNCs-FAC组的凋亡率高于MNCs-CTL组(P<0.05)。MSCs-FAC组的群体倍增时间明显长于MSCs-CTL组,且其凋亡率亦高于MSCs-CTL组(P<0.05)。结论铁过载可抑制造血干祖细胞的增殖、分化,诱导其凋亡,也可抑制MSCs的增殖能力,诱导其凋亡,降低其造血支持能力,且此过程中ROS升高。
- 肖霞赵明峰卢文艺柴笑穆娟邓琦李青李玉明
- 关键词：脐带血造血干祖细胞铁过载活性氧
