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4种提取试剂对三七Y病毒RNA提取效果的比较被引量：2: 2014年; 为比较不同核酸提取试剂对三七Y病毒(Panax virus Y,Pn VY)RNA提取效果的差异,本文以感染病毒病的三七叶片为研究对象,选取了3种商业化的RNA提取试剂盒和优化的CTAB总核酸提取法对提取Pn VY RNA的质量、操作时间、使用成本、RT-PCR扩增效率及DNA去除效果等方面进行了比较。结果表明:北京全式金生物技术有限公司的Trans Zol Plant试剂提取的总RNA质量最高,RT-PCR扩增效率较高,DNA去除完全,但成本也最高;宝生物工程(大连)有限公司的RNAiso Plus Total RNA试剂提取的总RNA质量、RT-PCR扩增效率和使用成本居中,无DNA残留;北京百泰克生物技术有限公司的TRIpure试剂提取的总RNA质量、RT-PCR扩增效率最低,成本居中,也无DNA残留,但耗时最短;而CTAB法提取的总核酸质量居中,RT-PCR扩增效率最高,成本最低,能同时提取到RNA及DNA,但耗时最长。对于复合感染DNA和RNA两种核酸类型病毒的样品来讲,CTAB法为最佳选择;对仅由RNA病毒侵染的材料而言,综合考虑后,Ta KaRa的RNAiso Plus Total RNA提取试剂是较为理想的选择。; 李晓静刘芳李梅蓉李月月张水英李凡; 关键词：CTAB法

不同重金属处理对烟叶重金属残留及品质的影响研究: 刘芳; 关键词：烤烟重金属

烟草丛顶病毒云南不同分离物全基因组序列测定与分析: 2017年; 【目的】探明烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)云南不同分离物之间的遗传差异并完成系统进化分析。【方法】采用RT-PCR方法扩增获得云南不同地区10个TBTV分离物的全基因组序列。【结果】10个TBTV云南分离物的全基因组序列均为4 152 bp,基因组结构由4个开放阅读框(ORFs)构成,ORF2通过与ORF1发生-1位的移码(frameshift)表达融合蛋白,推测ORF1末端的GGAUUUU特征序列是确定ORF1与ORF2是否发生移码翻译的依据。各TBTV云南分离物全基因组序列的核苷酸序列同源性为84.9%~99.1%,其中来自德宏的分离物(TBTV-YDHo)变异最大。TBTV不同分离物间存在重组现象,且分离物之间亲缘关系与重组的发生有关,重组主要发生在变异较大的ORF1~ORF2区段。TBTV分离物的各区段中,ORF1和ORF1~ORF2变异最大,而ORF4和3'UTR较为保守。系统进化分析结果表明:TBTV作为幽影病毒属(Umbravirus)的成员之一,其与同属中的罂粟花叶病毒(Opium poppy mosaic virus,OPMV)亲缘关系最近,核苷酸序列同源性为61.1%~61.6%;与CMo V和CMo MV亲缘关系较远,同源性为54%~55.1%。除幽影病毒属外,TBTV与番茄丛矮病毒科(Tombusviridae)其他属的病毒核苷酸序列同源性为25.1%~49.8%;Tombusviridae中Umbravirus与香石竹环斑病毒属(Dianthovirus)的RNA2亲缘关系最远,与其他病毒属成员的亲缘关系都相对较近。【结论】TBTV云南各分离物之间存在一定的分子变异,有的存在重组现象;TBTV与OPMV亲缘关系最近。; 吕婧刘芳谭冠林魏薇尹朝先马龑陈小姣和理淮陈海如李凡

球孢白僵菌Bb10716菌株对甘蔗上大螟三龄幼虫的致病性研究: 2014年; 大螟(Sesamia inferens Walker)是危害甘蔗的重要害虫,防治困难,为了寻找对该虫的生物防治措施,本研究采用浸渍法生物测定了球孢白僵菌Bb10716菌株在15~30℃下对该虫三龄幼虫的致病性。结果表明,在15,18,21,24,27,30℃下,接种Bb10716菌株1.21×103~1.21×108孢子/mL孢子悬浮液后第10天时大螟幼虫的校正死亡率分别为(10.00±2.32)%^(56.67±3.45)%,(16.67±2.76)%^(76.67±2.65)%,(23.33±2.58)%^(90.00±3.45)%,(33.33±2.25)%^(98.55±3.35)%,(36.67±3.65)%^(98.65±3.33)%,(46.67±3.25)%^(98.98±4.34)%。在15,18,21,24,27,30℃条件下,菌株Bb10716对大螟三龄幼虫的毒力回归方程分别是Y=2.68+0.33X(R2=0.92),Y=3.00+0.34X(R2=0.91),Y=3.14+0.38X(R2=0.89),Y=2.79+0.52X(R2=0.91),Y=2.917+0.55X(R2=0.91),Y=3.321+0.58X(R2=0.89);致死中浓度LC50分别是9.37×106,6.85×105,8.05×104,9.89×103,3.87×103,1.39×103孢子/mL。在15,18,21,24,27,30℃条件下用1.21×108孢子/mL孢子悬浮液接种后,对大螟三龄幼虫的致死中时LT50分别为(6.9±1.8),(5.6±0.5),(5.0±0.6),(4.9±0.3),(4.4±0.5),(4.2±0.4)d。综合测定结果,球孢白僵菌Bb10716菌株对甘蔗上大螟幼虫具有较强的致病性,可作为甘蔗上大螟幼虫生物制剂开发用菌株。; 刘芳郑亚强杜广祖陈斌李正跃肖关丽; 关键词：大螟球孢白僵菌生物测定

云南烟草丛顶病复合病原物的寄主范围被引量：2: 2015年; 云南烟草丛顶病是由烟草丛顶病毒(TBTV)、烟草扭脉病毒(TVDV)、烟草丛顶病毒类似卫星RNA(Sat-TBTV)以及烟草扭脉病毒相关RNA(TVDVaRNA)复合侵染引起的一种危险性烟草病害。利用带毒烟蚜(Myzus persicae)对12种植物进行蚜虫传毒接种试验,传毒时间为15 d。结果发现:接种的辣椒、酸浆等茄科植物表现褪绿、黄化和皱缩等症状,而黄瓜、菜豆等非茄科植物未表现明显症状。利用RT-PCR技术检测接种植物中云南烟草丛顶病病原物的种类,发现酸浆、假酸浆、曼陀罗、番茄、矮牵牛和辣椒6种茄科作物均能感染云南烟草丛顶病中的4种病原物,而黄瓜、西葫芦、昆诺藜、豇豆、菜豆和油菜等6种植物只能感染云南烟草丛顶病中的部分病原物。其中,烟草扭脉病毒(TVDV)的检出率最高,为83.3%,表明TVDV在病害的发生及流行中起了重要作用,通过蚜虫传毒方式可以将云南烟草丛顶病中的部分病原物分开,有利于研究不同病原物在症状的形成及流行中的作用,同时为其他多种病毒复合侵染引起植物病害的研究提供参考。; 马普权刘芳谭冠林田芝花李凡; 关键词：烟草丛顶病病原物寄主范围蚜虫

云南番木瓜环斑病毒部分ci基因的克隆及序列分析: 2013年; 对云南昆明、楚雄、保山、德宏、临沧、玉溪、红河等地番木瓜、南瓜和罗汉果上获得的番木瓜环斑病毒（Papayaringspotvirus，PRSV）不同分离物进行了部分ci基因的克隆和序列分析，获得的部分ci基因长666nt，编码221个氨基酸。关于13个PRSV云南分离物部分ci基因核苷酸序列的同源性为80％。98％，氨基酸同源性为92％-100％。选取本文具有代表性的9个PRSV分离物与国内外12个PRSV分离物相比，核苷酸序列的同源性为79％-93％，氨基酸序列同源性为92％-99％。运用MEGA软件绘制的基于部分ci基因核苷酸序列的系统进化树表明，这些PRSV病毒可以分为两个大组，本文获得的9个云南分离物中的8个分离物与印度分离物（India—W—EU475877）聚为第1组，第Ⅱ组成员比较复杂，包括大部分的亚洲分离物及全部美洲分离物。; 朱静谭冠林李晓静刘芳包改丽李凡; 关键词：番木瓜环斑病毒克隆

同步检测TBTV、TVDV、Sat-TBTV和TVDVaRNA的方法: 本发明涉及一种同步检测TBTV、TVDV、Sat-TBTV和TVDVaRNA的方法，属植物保护领域。通过分别设计合成TBTV、TVDV、Sat-TBTV和TVDVaRNA正反向引物，CTAB法提取染病植物组织或传毒介体昆...; 李凡刘芳陈海如谭冠林兰平秀王海宁李晓静朱静吴德喜蔡红; 文献传递

露水草种子发芽过程中主要生理生化特征的研究被引量：5: 2014年; 露水草(Cyanotis arachnoidea)是目前植物甾酮含量最为丰富的草本植物。为了弄清露水草种子萌发过程中生理生化特征的变化动态,测定了露水草种子萌发过程中过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)、可溶性糖、游离氨基酸和脯氨酸、总蛋白含量。结果表明:露水草种子的萌发过程中,种子内部发生着活跃和复杂的代谢活动及其生理生化变化,随着种子的萌发,种子中可溶性糖和丙二醛含量呈先增加后下降趋势;脯氨酸和游离氨基酸含量总体呈上升趋势,而可溶性蛋白含量总体呈下降趋势;过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性整体都表现出上升趋势。本研究将为探讨露水草种子萌发过程中代谢生理及露水草栽培提供理论依据。; 刘芳张立敏肖关丽李正跃陈斌杜艳娇; 关键词：露水草种子萌发生理指标

从烟草丛顶病病原复合物中分离烟草扭脉病毒的方法被引量：2: 2014年; 烟草丛顶病是由烟草丛顶病毒（TBTV）、烟草丛顶病毒类似卫星RNA（Sat-TBTV）、烟草扭脉病毒（TVDV）和烟草扭脉病毒相关RNA（TVDVaRNA）复合侵染引起的一类特殊病害,目前尚不清楚这些病原物各自在病害症状形成和病害传播中的作用。本文根据蚜虫传播烟草丛顶病复合病原物传毒特性的差异,探索了3种分离TVDV的生物学方法。方法A为将获得了烟草丛顶病复合病原物的蚜虫饥饿24h后,以单虫单苗的方式接到健康烟株上传毒,24h后灭虫。方法B为将无毒蚜虫饥饿2-4h后转接到感病烟株上饲毒48h,再以单虫单苗的方式接到健康烟株上传毒,24h后灭虫。方法C为将无毒蚜虫于感病烟株上饲毒48h后,以单虫单苗的方式接到健康烟株上传毒24h,此后每隔24h将蚜虫移到另一健康烟株上传毒,直到蚜虫死亡。其中方法 A和B均可将TVDV从烟草丛顶病病原复合体中分开,方法A操作简单、分离周期短且TVDV的分离效率高。单独TVDV侵染的烟株无明显的丛顶症状,叶片靠近主脉的地方会出现皱缩,生长后期叶片变得细长且顶端会发生扭曲。本试验可为研究TVDV与其他病原物、寄主植物和传播介体的相互作用提供很好的试验材料,也可为蚜虫传播的复合侵染病毒的生物学分离提供参考。; 刘芳马琨玲兰平秀缪玉东李晓静李凡; 关键词：烟草丛顶病蚜虫

2012年-2022年TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在云南主要烟区的发生与分布: 2024年; 烟草丛顶病(tobacco bushy top disease,TBTD)是一种由烟草丛顶病毒(tobacco bushy top virus,TBTV)及其卫星RNA(tobacco bushy top virus satellite RNA,TBTVsatRNA)和烟草扭脉病毒(tobacco vein distorting virus,TVDV)及其伴随RNA(tobacco vein distorting virus associated RNA,TVDVaRNA)共同侵染引起的危险性病害,曾在云南很多烟区造成严重损失。本研究对烟草丛顶病及其相关病原物在云南烟草上的发生情况进行了多年的调查研究,力图对烟草丛顶病及其相关病原物的发生与分布进行追踪和分析。结果表明,2012年-2022年,烟草丛顶病在云南各大烟区仅零星发生,2019年以来已很难发现。烟草丛顶病的相关病原物主要在曾经暴发流行过病害的楚雄、保山和大理发现,且TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在烟草上并不总是同时被检出,其中引起烟草丛顶病典型症状的TBTV+TVDV+TBTVsatRNA+TVDVaRNA检出率在5%以下,TVDV的检出率最高,达30.44%,TBTVsatRNA的检出率最低,为7.68%。TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA不能同时感染同一烟株可能是当前烟草丛顶病很少发生的主要原因。; 杨亚辉杨洁罗恒明刘芳吕婧陈平陈海如陈小姣李凡

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刘芳

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