冯晓辉
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
- 供职机构：西南民族大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- rfaE基因在副猪嗜血杆菌LOS刺激猪肺泡巨噬细胞炎性因子mRNA转录中的作用被引量：5
- 2015年
- 为研究rfaE基因在副猪嗜血杆菌(HPS)脂寡糖(LOS)刺激猪肺泡巨噬细胞(PAMs)炎性因子(IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α)mRNA转录中的作用,提取HPS SC096株及其rfaE基因缺失株(ΔrfaE)和互补株(cΔrfaE)的LOS,分别用5和10μg HPS-LOS、ΔrfaE-LOS、cΔrfaE-LOS和E.coli-LPS刺激PAMs,分别在2、4、6、12和24h后收集细胞,提取RNA并反转录成cDNA,运用RT-PCR检测IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的转录水平。结果表明用5μg HPS-LOS刺激细胞时,2、4、6、12和24h后IL-1αmRNA的转录水平均升高,显著高于ΔrfaE-LOS刺激细胞后的IL-1αmRNA转录水平(P<0.05),12和24h后IL-1β、IL-6和IL-8mRNA的转录水平均升高,显著高于ΔrfaE-LOS刺激细胞后的mRNA转录水平(P<0.05),24h后TNF-αmRNA的转录水平升高,显著高于ΔrfaE-LOS刺激细胞后的mRNA转录水平(P<0.05);10μg HPS-LOS刺激细胞后IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的转录水平均升高,显著高于ΔrfaE-LOS刺激细胞后的mRNA转录水平(P<0.05)。同时cΔrfaE-LOS刺激PAMs后IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的转录水平能够恢复到HPSLPS水平。首次证实rfaE基因在HPS LOS刺激PAMs炎性因子mRNA转录水平中起着重要的作用。
- 曾泽岳华冯晓辉何欢张斌
- 关键词：副猪嗜血杆菌脂寡糖炎性因子
- 副猪嗜血杆菌rfaD基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2013年
- rfaD基因编码ADP-L-甘油-D-甘露庚糖-6-异构体酶,缺失该基因会导致LOS糖链缩短和疏水性增强,从而影响细菌的致病性。为进一步探索副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)ADP-L-甘油-D-甘露庚糖-6-异构体酶的功能,本研究对Hps SC096株rfaD基因进行克隆及原核表达。根据GenBank上登录的NC_011852序列,设计引物扩增rfaD基因,获得927bp目的片段,将其克隆至pMD19-T载体。经送样测序鉴定正确后,连接到pET-32a(+)上进行原核表达,并用IPTG诱导,将诱导产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析。SDS-PAGE结果显示,H.parasuis rfaD基因能在E.coli BL21(DE3)中表达,重组蛋白分子质量约为50ku,与预期分子质量大小一致。Western blotting分析结果表明,该蛋白质能与H.parasuis血清4型阳性高免血清产生特异性结合反应,具较好的反应原性。
- 任玉鹏冯晓辉余远迪岳华张斌
- 关键词：副猪嗜血杆菌原核表达
- 副猪嗜血杆菌RfaF基因的原核表达及抗原性分析
- 2013年
- 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)RfaF基因编码脂多糖庚糖基转移酶Ⅱ,参与了细菌的黏附入侵和抗血清中补体杀菌作用。为了进一步研究庚糖基转移酶Ⅱ的功能,用原核表达系统表达H.parasuis RfaF基因。用特异性引物扩增H.parasuis SC096株血清4型RfaF基因,得到一条1 053bp的片段,将其连接到pET-32a(+)载体上,构建重组表达质粒,并将其转化至DH5α感受态细胞中,经酶切、PCR和测序进行鉴定。测序正确后,提取重组质粒,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,并用IPTG进行诱导。将诱导产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,H.parasuis RfaF基因可以在E.coli中表达,重组蛋白分子质量约为55ku,与预期分子质量大小一致。Western blot分析表明,RfaF蛋白可以与H.parasuis血清4型阳性高免血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性。本研究结果为深入探讨RafF基因的功能奠定了基础。
- 冯晓辉余远迪任玉鹏岳华张斌
- 关键词：副猪嗜血杆菌原核表达抗原性
- 核不均一核糖核蛋白与病毒复制被引量：3
- 2015年
- 核不均一核糖核蛋白(hnRNPs)是一类高度保守的RNA结合蛋白,广泛存在于动物的各种组织和细胞中,其主要生理功能是参与细胞中mRNA前体的剪接、mRNA的转运、mRNA的稳定性以及转录的调控。近年来的研究发现,hnRNPs可以通过与病毒核酸、病毒蛋白质结合,调控宿主细胞凋亡等机制影响病毒的复制过程。作者对hnRNPs与病毒复制关系的研究进展做一综述,以期为病毒与机体互作的研究提供参考。
- 冯晓辉汤承朱鑫岳华
- 关键词：病毒
- H1N1猪流感病毒感染猪血管内皮细胞后内参基因的筛选被引量：3
- 2014年
- 旨在评价H1N1猪流感病毒感染猪血管内皮细胞(PUVEC)后,肽基脯氨酰异构酶A(Ppia)、β-肌动蛋白(Actb)、核糖体蛋白L4(Rpl4)、酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Gapdh)等5个内参基因的稳定性.采用Real-time RT-PCR方法测定H1N1 SIV感染PUVEC后3、6、9、12、15、18、24和30h时5个内参基因mRNA的表达水平,未感染PUVEC为对照,采用2-△Ct值对内参基因进行相对定量,应用Genorm软件对其稳定性进行评价.结果表明,5个内参基因的稳定性由高到低分别为Ppia和Rpl4、Ywhaz、Actb、Gapdh,其中Ppia和Rp14稳定性相同.据此可知,Ppia和Rpl4在所选的5个内参基因中是研究H1N1 SIV与机体互作理想的2个内参基因.
- 朱鑫吴巧冯晓辉汤承岳华
- 关键词：内参基因
