丁嵩涛
- 作品数：15 被引量：87H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 人白介素24腺病毒载体构建及其生物学活性分析被引量：2
- 2008年
- 目的:克隆人白介素24基因,构建其腺病毒载体,获取病毒重组子,并研究其生物学活性。方法:用密执毒素(Mezerein)诱导HeLa细胞表达IL-24,通过RT-PCR获取IL-24 cDNA,将其亚克隆至pAdTrack-CMV载体,经PmeⅠ线性化后,与腺病毒的骨架载体pAdEasy-1在BJ5183菌中同源重组,HEK293细胞包装扩增,PCR、Western blot鉴定。AdIL-24处理宫颈癌CaSki细胞,通过MTT细胞存活实验检测其活性;Hoechst33342染色、流式细胞仪检测凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2、p53蛋白的表达。结果:获取人IL-24的cDNA,序列与GeneBank公布序列完全一致,成功构建腺病毒载体,AdIL-24对CaSki细胞具有抑制生长、促进凋亡的作用,并上调Bax、p53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。结论:成功构建人IL-24的重组腺病毒载体,其病毒重组子具有生物活性。
- 魏丽丽崔涛丁嵩涛易发平刘革力马永平宋方洲
- 关键词：腺病毒载体活性检测
- 人白介素24cDNA克隆、突变纠正和原核表达被引量：3
- 2007年
- 目的获取人白介素24(IL-24)cDNA,构建原核表达载体以表达含有谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白GST-IL-24。方法以人外周血单核细胞(PBMC)总RNA为模板,RT-PCR扩增IL-24 cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-4T-2,测序结果显示在IL-24 cDNA第223位G→A,370位T→C,从而导致其编码蛋白的氨基酸发生改变:A75T,H124Y,通过二次PCR将其纠正,重组载体pGEX-IL-24转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE,Western blot检测显示有融合蛋白GST-IL-24表达。结果通过RT-PCR及二次PCR得到人IL-24 cDNA,构建其原核表达载体,经IPTG诱导在相对分子量约为50 000处有融合蛋白表达。结论IL-24的重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)可以表达GST-IL-24融合蛋白。
- 魏丽丽李成华袁成福陈济丁嵩涛刘革力易发平宋方洲
- 关键词：白介素24二次PCR融合蛋白克隆原核表达
- 1,25-二羟基维生素D_3对乳腺癌MCF-7细胞CYP1B1表达的作用和COX-2/PGE2通路机制被引量：2
- 2012年
- 目的分析COX-2、p-ERα、CYP1B1在人乳腺癌组织和ERα阳性表达人乳腺癌细胞系MCF-7中的表达规律,探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在人乳腺癌细胞MCF-7中通过COX-2/PGE2通路对CYP1B1表达和细胞增殖、细胞周期转化的影响及作用机制。方法用免疫组织化学法检测42例人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1的表达,并分析其相关性;MTT法检测1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖的影响,并确定后续实验药物浓度;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测MCF-7细胞COX-2 mRNA水平;ELISA法检测细胞培养上清液中PGE2水平;蛋白质印迹法检测MCF-7细胞COX-2、p-ERK、p-ERα、CYP1B1蛋白水平;免疫细胞荧光检测COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白在MCF-7中的原位表达。结果在人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白呈阳性表达,两两之间均呈正相关性(P<0.05)。1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖具有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。应用100 nmol/L 1,25(OH)2D372 h后,MCF-7细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);细胞COX-2 mRNA表达减少(P<0.05);细胞培养上清中PGE2水平降低(P<0.01);COX-2、p-ERK、p-ERα及CYP1B1蛋白表达均减少(P<0.05)。结论在乳腺癌中,COX-2/PGE2通路对CYP1B1的表达具有正向调控作用。1,25(OH)2D3可通过抑制COX-2/PGE2通路减少CYP1B1的表达,对乳腺癌细胞MCF-7的增殖产生抑制作用。
- 袁磊邓华瑜姜蓉丁嵩涛
- 关键词：环氧化酶21,25-二羟基维生素D3
- 人hIL-24△103重组腺病毒载体的构建及对A549细胞生长及凋亡的影响
- 目的:构建携带人hIL-24Δ103基因的重组腺病毒载体,并检测其对A549细胞生长及凋亡的影响,为进一步研究白介素24细胞内信号通路奠定了基础。
方法:本课题采用PCR技术以重组质粒Pgex-IL-24为模...
- 丁嵩涛
- 关键词：人白介素24腺病毒载体细胞增殖
- 文献传递
- 利用球孢链霉菌发酵液消化双歧杆菌细胞壁提取质粒的研究被引量：2
- 2008年
- 目的寻找一种经济适用的提取双歧杆菌质粒的方法。方法利用球孢链霉菌发酵产生的变溶菌素来消化双歧杆菌细胞壁,提取质粒,并与商业化溶菌酶法比较。结果球孢链霉菌发酵液与溶菌酶均成功提取到质粒。结论利用球孢链霉菌发酵液提取质粒经济简便。
- 罗耀玲黄雪萍武向梅丁嵩涛马永平宋方洲
- 关键词：双歧杆菌质粒
- 栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用被引量：66
- 2009年
- 目的研究栀子苷对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(Hy-drogen peroxide,H2O2)建立体外培养的HUVEC细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为正常对照组、H2O2氧化损伤组、H2O2加栀子苷低、中、高剂量组,其中后3组给予栀子苷预培养24h后加入400μmol.L-1H2O2,然后继续培养12h。MTT法检测细胞存活率;检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平和培养液中一氧化氮(NO)水平;检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变。结果栀子苷能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,提高细胞内SOD、GSH-Px、NOS活性,使培养液中NO含量增加,降低细胞内ROS水平,减少H2O2诱导的细胞凋亡率,恢复血管内皮细胞增殖。结论栀子苷具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻血管内皮细胞的氧化损伤。
- 丁嵩涛刘洪涛李文明李秀英于超
- 关键词：栀子苷氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞细胞凋亡
- 学生自选课题型基础医学创新实验的组织过程探讨被引量：2
- 2010年
- 学生自选课题型创新实验是指学生根据实验中心确定的选题领域,自由选择实验研究课题,在教师的指导下,学生通过查阅文献、选择实验方法、拟定技术路线,在开放实验室中完成实验工作、分析处理数据、撰写论文或总结报告。学生自选课题型创新实验是培养学生创新精神和创新能力的较好途经。本科生创新性实验需要实验中心进行规范化的组织和管理,以确保创新性实验的效果。
- 彭惠民胡先明丁嵩涛
- 关键词：创新性实验实验教学改革
- 一种柔性葡萄糖传感器及其检测葡萄糖方法
- 本发明涉及材料领域，具体公开了一种柔性葡萄糖传感器及其检测葡萄糖方法。本发明通过在碳布(CC)柔性电极上电沉积金微米花(GMFs)，使其成为中性pH环境中检测葡萄糖浓度的合适基底；利用强酸处理CC，增加其含氧官能团数量，...
- 臧广超张玉婵彭倩瑜宇文天翊王诗君丁嵩涛
- 文献传递
- 柳氮磺胺吡啶对胶原诱导关节炎Th17/Treg细胞的影响被引量：2
- 2016年
- 目的:评价柳氮磺胺吡啶对胶原诱导性小鼠关节炎的治疗作用,并探讨其对Th17/Treg细胞的调控作用.方法:构建胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型,II型胶原免疫小鼠,21d后将关节炎小鼠分为对照组和柳氮磺胺吡啶组,记录关节炎临床评分,观察病理切片,比较关节炎发病严重程度;流式细胞术检测脾脏淋巴细胞Th17及Treg细胞的比例.结果:柳氮磺胺吡啶能显著降低CIA小鼠关节炎的临床评分(p<0.05),脾脏Th17细胞水平(p<0.05)在一定程度上促进Treg细胞的表达.结论:柳氮磺胺吡啶调控Th17细胞与Treg细胞平衡,可能是其治疗类风湿关节炎的作用机制之一.
- 汤军丁嵩涛刘莉秦启忠彭惠民刘含登
- 关键词：柳氮磺胺吡啶TH17细胞调节性T细胞胶原诱导性关节炎
- 人hIL-24Δ103重组腺病毒感染诱导A549细胞凋亡被引量：2
- 2008年
- 白细胞介素24(interleukin24,IL-24)是近年来新发现的1个IL-10家族细胞因子,具有明显的抗肿瘤活性.为了研究开发高活性、低分子量的IL-24,并探讨其用于肿瘤靶向治疗的可能性,本研究在前期基础上,进一步构建并制备了缺失N端103个氨基酸残基的IL-24(hIL-24Δ103)重组腺病毒,并观察了其对A549细胞生长增殖和凋亡的影响.首先,采用PCR技术扩增IL-24第104位至第206位氨基酸区域的编码序列,制备hIL-24Δ103重组腺病毒.用Ad-hIL-24Δ103重组腺病毒感染肺癌A549细胞.MTT分析结果表明,Ad-hIL-24Δ103感染显著抑制了A549细胞的生长.Hoechst 33258染色和流式细胞仪分析结果表明,Ad-hIL-24Δ103感染导致细胞凋亡.Western印迹分析结果表明,Ad-hIL-24Δ103感染导致了PKR和eIF-2α蛋白的表达上调与磷酸化激活,提示PKR和eIF-2α参与了hIL-24Δ103导致的细胞生长抑制和细胞凋亡过程的调节.
- 丁嵩涛卜友泉魏丽丽张琴罗耀玲易发平宋方洲
- 关键词：人白介素24腺病毒细胞增殖细胞凋亡
