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HBV通过增强DNAJB4启动子活性调节其在HepG2．2．15细胞中的表达被引量：4: 2009年; 目的初步探讨HBV与DNAJB4基因的转录调节作用机制。方法用RT-PCR及Real—timePCR检测HepG2．2．15细胞和HepG2细胞中DNAJB4在mRNA水平上的表达差异。构建DNAJB4启动子虫荧光素酶报告质粒，分别与HBV、HBs、HBp、HBc、HBx表达质粒共转染HepG2细胞，比较虫荧光素酶活性。结果在mRNA水平上，DNAJB4在HepG2．2．15细胞中的表达量是其在HepG2细胞中表达量的2．59倍，且二者有显著性差异（P〈0．01）。DNAJB4启动子虫荧光素酶报告质粒与HBV表达质粒共转染组的相对荧光素酶活性是其对照组的2．28倍。转染HBs和HBc表达质粒组的相对荧光素酶活性分别是其对照组的2．11倍和1．77倍，而HBx、HBp表达质粒对荧光素酶活性没有影响。结论在HepG2．2．15细胞中，HBV能通过增强DNAJB4启动子活性增加DNAJB4转录水平的表达，其中HBs和HBc蛋白起主要作用。; 张小花万涛张磊田园园黄婷婷汤华; 关键词：乙型肝炎病毒 HEPG2.2.15细胞基因表达与调控

利用基因敲入技术在肝癌细胞系中稳定表达HBV的X抗原被引量：1: 2008年; 目的利用基因诱捕载体整合到人类肝癌细胞系SMMC7721细胞的染色体基因中,建立稳定表达HBx蛋白的细胞系。方法通过电击转染将基因诱捕载体pU17导入人类肝癌细胞系SMMC7721细胞,经G418筛选,报告基因X-gal染色,PCR,Western印迹等方法检测HBxDNA的存在和蛋白质的表达。结果得到永久性高表达诱捕载体报告基因X-gal的阳性克隆;用Cre-LoxP置换系统,将构建好的HBx全长片段与诱捕载体的报告基因部分交换,HBx全长片段完整地整合在SMMC7721细胞的染色体基因中,并能从该细胞系中检测到HBx抗原。结论本实验提供了一种新的稳定表达蛋白的方法。该细胞系为制备、纯化X抗原和研究X基因调控提供了实验材料。; 黄婷婷程丽英李毅蔡雪飞刘湘黄爱龙汤华; 关键词：基因整合

多聚嘧啶序列结合蛋白抑制HBV转录后调节元件的功能: 2009年; 目的探讨多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract binding protein,PTB)对乙型肝炎病毒转录后调节元件(HBV posttranscriptional regulatory element,HPRE)功能的影响。方法采用pDM138-HPRE CAT(chloramphenicol acetyltransferase)报告体系,通过质粒瞬时转染细胞的方式来探讨PTB对HPRE功能的影响。结果CAT活性检测表明:PTB的过表达使HPRE介导的CAT表达活性下降,并且呈剂量依赖性。当去除质粒上游剪接供体位点时,PTB仍然可以降低CAT的活性。结论PTB抑制HPRE的功能,并且这种抑制作用不依赖于上游剪接供体位点。; 程丽英万涛黄婷婷蔡雪飞张文露黄爱龙汤华; 关键词：乙型肝炎病毒瞬时转染

嘌呤霉素抗性基因捕获载体的构建及在细胞中的功能验证被引量：1: 2009年; 目的构建具有嘌呤霉素抗性基因捕获载体，扩大基因捕获载体的应用范围。方法用经改造的捕获载体（gene trapping vector）稳定转染HepG2．2．15肝癌细胞系，经嘌呤霉素筛选，制作单克隆细胞株。用PCR方法验证该载体的在细胞染色体中的整合，ELISA方法证明捕获载体捕获基因后的细胞的功能改变。结果嘌呤霉素抗性基因捕获载体整合在HepG2．2．15肝癌细胞的染色体上，并能影响细胞HBsAg和HBeAg的分泌。结论新构建的嘌呤霉素抗性基因捕获载体能在具有G418抗性的细胞中捕获有意义的目的基因。; 黄婷婷田园园张磊张小花万涛黄爱龙汤华

利用Knock in技术，在肝癌细胞系中稳定表达HBV的X抗原: 乙型肝炎病毒感染（Hepatitis B virus，HBV）呈全球范围广泛流行，在我国尤为严重。HBV感染可引起急性、慢性和重型肝炎，并与肝硬化、肝癌的发生密切相关，是严重危害人类健康的感染性疾病。很多流行病学与实验证...; 黄婷婷; 关键词：基因整合肝癌乙型肝炎病毒感染致癌机制; 文献传递

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黄婷婷