闫志风
- 作品数：58 被引量：139H指数：7
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技新星计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 胎胰源性Nestin阳性细胞向多巴胺能细胞元定向诱导分化的研究
- 2008年
- 目的:探讨胎儿胰岛源性Nestin(神经上皮干细胞蛋白)阳性干细胞分化为多巴胺能神经元的潜能。方法:用胶原酶消化法分离胎儿胰岛,贴壁培养后获得增殖力旺盛的细胞;用免疫组化法、免疫荧光法分别检测其增殖细胞核抗原(PCNA)及神经干细胞标志物Nestin的表达;用流式细胞术测定Nestin阳性细胞的比例;经N2培养液筛选后,分别用SHH(sonic hedgehog)蛋白、成纤维细胞生长因子(FGF)8、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和脑源性神经营养因子(BDNF)向多巴胺能神经元定向诱导,检测诱导细胞的多巴胺能神经元标志酪氨酸羟化酶(TH)和芳香左旋氨基酸脱羧酶(AADC)的表达情况。结果:免疫荧光显示,从胎儿胰岛分离的干细胞表达PCNA和Nestin;流式细胞术检测Nestin阳性率达13.74%;筛选后向神经细胞定向诱导分化,细胞表达TH和AADC。结论:从胎儿胰岛中可以分离出Nestin阳性的神经干细胞,该细胞具有向多巴胺能神经元定向分化的能力。
- 闫志风李亚里王晶彭红梅杨怡卓关铮
- 关键词：多巴胺能神经元
- 人Bcl2基因真核表达载体的构建及其抗凋亡功能研究被引量：2
- 2015年
- 目的:构建带myc标签的Bcl2真核表达载体,获得myc-Bcl2融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增Bcl2编码序列,将其插入p CMV-myc载体,Western印迹检测表达情况;将重组质粒与空载体分别转染乳腺癌MCF-7细胞,通过流式细胞仪检测p CMV-myc-Bcl2重组质粒对细胞凋亡的影响。结果:双酶切和测序结果表明p CMV-myc-Bcl2真核表达质粒构建成功;转染293T细胞后myc-Bcl2蛋白成功表达;流式细胞仪检测结果显示,myc-Bcl2明显抑制乳腺癌细胞系的凋亡。结论:构建了带myc标签的人Bcl2真核表达载体,为进一步研究Bcl2在细胞凋亡中的功能奠定了基础。
- 史平安徐小洁闫志风范忠义王涛冯滢滢梁迎春李玲郭靖叶棋浓吕朝晖
- 关键词：克隆细胞凋亡
- 1例腹膜后异位妊娠的临床诊治分析
- 2013年
- 异位妊娠是妇产科常见的急腹症,其中输卵管妊娠最常见,其次是宫颈妊娠、阔韧带妊娠、卵巢妊娠与腹腔妊娠等.腹膜后妊娠是腹腔妊娠的特殊类型,非常罕见[1-2].解放军总医院妇产科成功救治腹膜后异位妊娠患者1例,现报道如下.
- 杨怡卓李亚里宋磊孟元光刘慧李立安闫志风
- 关键词：积血宫外孕妊娠病腹膜后腹腔妊娠
- 胎儿胰岛中干细胞的分离与鉴定
- 2008年
- 目的:已证实胰腺来源的干细胞或祖细胞在体内外均能分化为胰岛素分泌细胞,但成人胰腺来源的干细胞增殖潜能较差。实验旨在分离并鉴定胎儿胰岛样细胞团中的干细胞,为糖尿病细胞移植治疗寻找可用的种子细胞。方法:实验于2006-10/2007-07在解放军军事医学科学院输血研究所干细胞与再生医学研究室完成。①对象:所用胰腺标本取自流产胎儿,胎龄14～20周,由解放军总医院妇产科提供,胎儿组织的使用得到孕妇本人的知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法:无菌条件下取出胎儿胰腺,37℃下用0.5g/L的V型胶原酶进行消化,分离得到胎儿胰岛样细胞团,悬浮培养,加入含体积分数为0.1胎牛血清、1mmol/L丙酮酸钠、1mmol/L谷氨酰胺、71.5μmol/Lβ-巯基乙醇、100U/mL青霉素和100mg/L链霉素的RPMI1640培养基,每日转皿除去贴壁细胞,72h后挑选出悬浮生长的胰岛样细胞团予以贴壁培养,待长成上皮样单层细胞克隆时传代。③实验评估:将悬浮培养的胰岛样细胞团行双硫腙染色。另将少部分胰岛样细胞团及第4代细胞种植于24,96孔板中,采用免疫荧光染色检测细胞表面分子标志物增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、角蛋白19、波形蛋白、胰岛素、胰高血糖素、CD29的表达情况。MTT法分析第6代细胞的生长曲线。结果:①悬浮及贴壁培养的胰岛形态:刚分离出的胰岛呈簇状,边缘不规整,细胞排列较疏松。贴壁后胰岛样细胞团由簇状逐渐展开形成上皮样单层细胞克隆。传代后细胞形态发生改变,呈梭形或分支样,增殖较快。②悬浮培养的胰岛双硫腙染色检测:分离得到的胎儿胰岛样细胞团双硫腙染色呈阳性表达。③细胞表面标志免疫荧光染色检测:贴壁的第1代细胞大部分呈增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、波形蛋白阳性,极少数细胞呈胰岛素、
- 闫志风李亚里王晶彭红梅杨怡卓关铮
- 关键词：胰岛样细胞团干细胞胎儿胰腺糖尿病
- 人转录因子激活蛋白TFAP_2γ促进乳腺癌细胞生长
- 2017年
- 目的:构建带Flag标签的人转录因子激活蛋白2γ(TFAP_2γ)基因真核表达载体,获得Flag-TFAP_2γ蛋白,检测其对乳腺癌细胞生长的影响。方法:采用PCR技术从乳腺文库中扩增出人TFAP_2γ基因,并将其正确插入Flag载体;将重组质粒与空载体转染人乳腺癌细胞系ZR75-1和MCF-7细胞后,Western印迹检测表达情况,并进行生长曲线实验。结果:双酶切和测序鉴定表明,Flag-TFAP_2γ真核表达质粒构建成功,转染ZR75-1和MCF-7细胞后获得表达;生长曲线实验结果表明,TFAP_2γ可促进乳腺癌细胞的生长。结论:构建了带Flag标签的人TFAP_2γ基因真核表达载体,并能在乳腺癌细胞ZR75-1和MCF-7中表达,且能促进细胞的生长。本实验为进一步研究TFAP_2γ在乳腺癌中的功能奠定了基础。
- 尤文叶徐小洁梁迎春张立闫志风叶棋浓李瑛杨俊兰
- 关键词：克隆真核表达
- 异位妊娠的超声诊断进展
- 异位妊娠(ectopic pregnancy,EP)是指受精卵着床于正常子宫体腔以外的任何部位,EP占妇产科急腹症的48.5％,一旦发生破裂常引起腹腔内出血、失血性休克等严重并发症,若不及时诊断和积极抢救,可危及生命.近...
- 闫志风李亚里
- 关键词：异位妊娠超声诊断
- 人Tinagl1基因抑制宫颈癌细胞生长与迁移
- 2020年
- 目的构建带pXJ-40-Myc标签的人肾小管间质性肾炎抗原样蛋白1(Tinagl1)真核表达载体,表达pXJ-40-Myc-Tinagl1融合蛋白,检测其对人宫颈癌细胞生长的影响。方法以人卵巢文库为模板,采用PCR技术扩增Tinagl1编码区序列,双酶切后将其插入pXJ-40-Myc载体中,构建pXJ-40-Myc重组质粒;将重组质粒与空载体分别转染人宫颈癌HeLa细胞,Western印迹鉴定目的基因表达,CCK-8法、克隆形成实验测定其对宫颈癌HeLa细胞生长的影响,划痕实验检测Tinagl1对HeLa细胞运动迁移能力的影响。结果双酶切鉴定表明,pXJ-40-Myc-Tinagl1真核表达质粒构建成功;转染HeLa细胞后融合蛋白表达,生长曲线、克隆形成及划痕实验结果表明,Tinagl1可抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移。结论携带pXJ-40-Myc标签的人Tinagl1基因真核表达载体能在人宫颈癌HeLa细胞中表达,且能抑制该细胞的生长。该实验为进一步研究Tinagl1在肿瘤,尤其是妇科恶性肿瘤中的功能奠定了基础。
- 唐枝高晓超马路园朱祥初众张德宇徐小洁闫志风阳志军
- 关键词：宫颈肿瘤HELA细胞克隆形成细胞增殖
- “翻转课堂”在妇产科住院医师规范化培训中的实践摸索被引量：10
- 2021年
- 目的在住院医师规范化培训中推广“翻转课堂”理念,总结妇产科专业基地的实践经验,提高培训效果。方法选取解放军总医院第一医学中心妇产科专业基地2016、2017级住院医师共20人,均观察2年,2016级学员观察时间为2016年9月至2018年8月,2017级学员观察时间为2017年9月至2019年8月。每位住院医师按照抽签顺序依次进行“学员to学员”授课。上述培训模式的住院医师属于教学改革组,另有2018级的14名住院医师(观察时间为2018年9月至2020年8月)作为传统教学组进行对照。由带教老师分别为住院医师评分,以评价学员各方面能力的提升程度,并通过问卷调查形式收集并归纳住院医师对该教学形式的反馈意见。结果教学改革组培训后自学、专业知识掌握程度、临床思维、语言表达方面的评分高于培训前(P<0.05),但培训前后学员的科研能力比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组学员在规范化培训开始前综合能力比较,差异无统计学意义(P>0.05),通过规范化培训,两组学员的综合能力均明显高于培训前(P<0.05),且教学改革组高于传统教学组,差异有统计学意义(P<0.05);相对于传统教学组,教学改革组的学员对“学员to学员”这一授课形式的教学认同感较高,65%学员认为语言表达能力和查阅专业相关资料的能力得到明显提高。结论在妇产科规范化培训教学中应用“翻转课堂”教学模式满足了住院医师个性化学习和自主学习的需求,促进了学习动机与态度的转变,为妇产科专业基地的教学改革带来新的途径。
- 高原杨雯闫志风卢彦平孟元光
- 关键词：住院医师规范化培训妇产科教学教学改革
- 人胚胎干细胞体外培养、传代及冻存、复苏研究
- 2008年
- 目的建立人胚胎干细胞体外培养模式,并对其进行冻存及复苏。方法将人胚胎干细胞置于小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养,细胞接近融合状态时进行传代,程序降温法冻存,速溶方法复苏,确定解冻后细胞复苏率、克隆生长与分化情况,并对其生物学特性进行鉴定。结果人胚胎干细胞稳定增殖了5个月,传至20代;细胞在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上呈集落生长,核大,核仁明显。程序降温法冻存后复苏,细胞复苏率达到78.3%;解冻后第12代细胞仍具有稳定的46,XX核型;TRA-1-81阳性,表达Nanog基因,流式细胞术检测SSEA-4阳性表达率为89.38%。结论成功建立了人胚胎干细胞体外培养模式,为研究人胚胎干细胞及相关疾病的防治提供细胞模型和细胞来源。
- 王晶李亚里闫志风彭红梅杨怡卓
- 关键词：人胚胎干细胞体外培养
- 人自噬相关蛋白ATG5的原核表达及纯化
- 2016年
- 目的:原核表达纯化带His标签的自噬相关蛋白ATG5。方法:利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人ATG5基因的编码序列,插入载体p ET-28a(+)中得到重组质粒,经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定后转化大肠杆菌Ros-sate进行小量诱导,挑选出可以诱导His-ATG5蛋白的菌液进行融合蛋白的纯化,通过Western印迹和SDS-PAGE检测融合蛋白的纯化效果。结果:用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到约828 bp的目的片段,插入载体p ET-28a(+)构建出His-ATG5重组质粒并经酶切及测序验证;转化大肠杆菌Rossate后进行小量诱导表达并纯化蛋白,SDS-PAGE检测显示获得相对分子质量约为38×103的融合蛋白。结论:原核表达并纯化获得His-ATG5融合蛋白,为后续研究ATG5在自噬中的作用机制奠定了实验基础。
- 晋帅洪甜闫志风马永富禇健易绍琼徐小洁叶棋浓刘阳
- 关键词：原核表达纯化自噬
