闫凤青
- 作品数：6 被引量：75H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 纤维连接蛋白促进人神经球内干细胞的迁移被引量：1
- 2005年
- 目的研究细胞外基质成份纤维连接蛋白(Fn)对人神经干细胞迁移的作用。方法用Fn包被培养孔,于细胞球转种后的24h、48h、72h、96h、120h、144h、168h和240h各时间点动态观察神经球细胞的迁移变化,测量细胞迁移的最远距离,计算迁移速率,用荧光免疫技术检测迁移细胞的特异性表型标志,计算一定视野内nestin+细胞所占的百分比,同时,平行观察含胎牛血清(FBS)培养诱导的迁移。设立多聚赖氨酸(Ply)包被组以及空白组作为实验对照。结果Ply包被组以及空白组均无细胞迁移发生,FBS组和Fn组的细胞球有细胞从球体向外迁移,二者迁移速率均在前48h达最高峰,但迁移方式不同。Fn组迁移的细胞分化不明显,细胞分裂相多见,nestin+细胞占(30.60±8.06)%,而FBS组迁移出来的细胞成进行性分化梯度,偶见有nestin+细胞,外周边缘区域GFAP+星形胶质细胞是其主要细胞群。结论Fn在体外可促进人胎脑神经干细胞的迁移。
- 尹国才栾佐闫凤青钱阳明屈素青胡晓红
- 关键词：干细胞纤维连接蛋白迁移
- 新生鼠缺氧缺血性脑损伤后经脑室人神经干细胞移植的实验研究被引量：62
- 2005年
- 目的研究新生鼠缺氧缺血性脑损伤后经脑室移植人胚胎脑神经干细胞后,植入细胞的存活、迁移及分化情况。方法孕12周人胚胎神经干细胞在含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子和白血病细胞抑制因子的N2培养基(D/F12+N2+B27)中培养11天。生后7天的新生SD大鼠32只建立缺氧缺血性脑病模型,3天后将培养的人神经干细胞制成悬液(1.0×105/μl),采用立体定向移植至实验动物损伤侧脑室。移植后1、2、4周及3个月(每时间点各8只)取脑组织行HE染色和免疫组织化学分析。结果移植后1周大量抗人细胞核蛋白抗体阳性的植入细胞从脑室沿胼胝体向外迁移并到达损伤区,以损伤侧皮层、海马多见,在不同区域可见与宿主细胞类似的分化的植入细胞:移行至皮层的植入细胞85%分化为抗人细胞核蛋白神经丝蛋白或抗人核蛋白神经元管蛋白抗体双阳性的皮层细胞,而位于移行区域的植入细胞60%表达为抗人核蛋白胶质纤维酸性蛋白抗体双阳性的星形胶质细胞,其余细胞仍在迁移中未分化。移植后2周更多的移植细胞到达损伤区,移植后4周及3个月植入细胞数较前明显减少。结论人胚胎神经干细胞经脑室移植至缺氧缺血性脑损伤的鼠脑后能存活、迁移,并依迁移区域的不同分化为神经元和星形胶质细胞。
- 屈素清栾佐尹国才郭万里胡晓红吴南海闫凤青钱阳明
- 关键词：干细胞移植脑室脑损伤后侧脑室新生鼠
- LIF对人胎脑神经干细胞体外增殖和分化的影响被引量：11
- 2005年
- 目的:观察白血病抑制因子(LIF)对体外培养的人胎脑神经干细胞增殖和分化的影响。方法:用添加表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)的N2培养基培养人神经干细胞(hNSC)。实验分添加LIF(LIF+)组和无LIF(LIF-)组,接种12天后计数细胞集落(球)的形成率。传代培养观察120天,定期进行活细胞计数,绘制生长速率曲线。取第6代细胞球进行分化诱导,免疫荧光技术鉴别神经细胞的特异性抗原标志,并计算各细胞类型间的比例。结果:两组集落形成百分比分别为:LIF+为0.50%-0.91%;LIF-为0.49%-0.94%。两组间的差异并无显著意义(P>0.05)。在相同培养条件下,各例胎脑来源的NSC扩增速率的相差并无显著性意义(P>0.05),但LIF对NSC扩增有重要作用,刺激细胞扩增了约4000-8400倍,无分化发生;LIF-组仅为43-97倍,培养两个月后可观察到分化现象。在培养过程中观察到:LIF的作用主要表现在细胞接种传代约50-60天以后。用免疫细胞化学荧光进行分化细胞类型鉴定,计数神经元和星形胶细胞数,并计算其中神经元所占的百分比。LIF+培养为12%-83%,明显高于LIF-组的8%-23%(P<0.005),来源于海马的NSC分化为神经元的比例要高于来源于纹状体的NSC。结论:LIF能阻抑人胎脑NSC的分化,促进其体外长期增殖,其效应主要表现在接种传代培养的50-60天以后。LIF还影响NSC的分化,可显著提高分化细胞中神经元的百分比,海马源性hNSC对LIF更为敏感。
- 尹国才栾佐闫凤青屈素青郭万里
- 关键词：白血病抑制因子增殖分化
- 人胎脑神经球及其构成细胞的成熟表型标志被引量：5
- 2005年
- 目的观察体外培养人胎脑神经干细胞球的形成,并鉴别球内是否有成熟的神经细胞存在,证实神经球的异质性。方法用添加表皮生长因子(EGF,20ng/mL)和成纤维细胞生长因子2(FGF2,10ng/mL)的无血清N2培养基,从人胎脑培养获得神经干细胞球,在倒置显微镜下观察其形成过程,用间接免疫荧光技术检测神经球的细胞表型标志神经丝(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖脑苷脂(GalC)和巢蛋白(nestin)的表达,并计算出阳性细胞球的百分比。结果前6d,培养中形成大量的细胞集落,检测的细胞标志中,只有nestin+,其余标志均为阴性。培养至12d左右,细胞球的数量减少约1/3,球体的形态和大小也不相同。培养30d的神经球中,69.2%神经球为NF+,81.8%为GFAP+,100%为nestin+,未观察到GalC+。结论神经球有个成熟过程,神经球之间具有异质性,球内的细胞构成也具有异质性。
- 尹国才栾佐屈素青闫凤青
- 关键词：神经球人胎脑
