钱晓萍
- 作品数：23 被引量：33H指数：3
- 供职机构：北京大学基础医学院免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤相关抗原CHP2促进HEK293细胞在裸鼠腹腔内的转移被引量：3
- 2009年
- 目的:研究肿瘤相关抗原CHP2对HEK293细胞在裸鼠腹腔内转移能力的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法:通过Boyden小室法检测CHP2转染细胞和对照细胞的体外转移能力。对BALB/c裸鼠进行腹腔接种,观察裸鼠体内的成瘤与组织浸润情况并进行HE染色。利用RT-PCR方法检测HEK293细胞中部分转移相关分子的基因表达水平。结果:CHP2增强HEK293细胞在体外穿过Matrigel胶的侵袭能力,同时显著加速HEK293细胞在裸鼠腹腔内的成瘤速度并促进肿瘤对腹腔主要脏器的浸润。CHP2上调转移相关分子骨桥蛋白(osteopon-tin,OPN)在HEK293细胞中的表达,但对基质金属蛋白酶MMP2的表达没有明显影响。结论:CHP2显著增强HEK293细胞在体外及裸鼠腹腔内的转移能力,OPN表达上调可能参与CHP2对HEK293细胞的转移促进作用。
- 钱晓萍孙秀媛李国栋张毓陈慰峰
- 关键词：肿瘤转移
- 人UNC5CL原核蛋白的表达及多克隆抗体的制备和鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的:构建UNC5CL基因的原核表达载体,纯化GST-UNC5CL融合蛋白,并以其为抗原免疫家兔,制备抗人UNC5CL多克隆抗体,并鉴定其反应性和特异性。方法:用PCR方法扩增UNC5CL基因(表达其280-518位氨基酸)片段并克隆至pGEX-4T-2原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21诱导融合蛋白GST-UNC5CL(aa 280-518)表达;所获得的可溶性蛋白经亲和层析纯化,免疫家兔制备抗血清,再采用ELISA、Western blot和免疫组化的方法检测抗体的效价及特异性。结果:测序证实原核重组质粒构建成功;经IPTG诱导,可表达Mr为52 000的GST-UNC5CL(aa280-518)的融合蛋白;谷胱甘肽亲和层析柱纯化的融合蛋白免疫家兔制备的抗血清经Western blot和免疫组化检测证实可识别目的蛋白。结论:制备了兔抗人UNC5CL的多克隆抗体,且抗体对内源性UNC5CL具有较好的反应性和特异性,为进一步研究UNC5CL的功能奠定了基础。
- 吕丹钱晓萍田晓军张毓张君
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体
- HLA-A2限制性NY-ESO-1b肽段诱导的CD8^+T细胞对稳定表达NY-ESO-1的HepG2肝癌细胞系的杀伤效应
- 2005年
- 目的分析体外诱导的NY-ESO-1特异性杀伤性T淋巴细胞对稳定表达NY-ESO-1蛋白的肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞系的杀伤效应,为进一步分析NY-ESO-1蛋白作为疫苗用于治疗HCC的可能性提供实验支持。方法从HLA-A2阳性的肝癌患者体内分离出外周血单个核细胞,用NY-ESO-1肽段体外诱导特异性杀伤性T淋巴细胞,并通过酶联免疫斑点法分析特异性杀伤性T淋巴细胞对稳定表达NY-ESO-1蛋白的HCC细胞系HepG2细胞的杀伤效应。结果转染了NY-ESO-1的HepG2细胞(HLA-A2+)可有效地被NY-ESO-1157-165抗原肽诱导的特异性CD8+T淋巴细胞所识别。效应细胞中大量GrB的释放表明其对稳定转染了NY-ESO-1基因的HepG2细胞有很强的杀伤作用。结论HepG2细胞中表达的NY-ESO-1蛋白可被此肝癌细胞有效地加工处理,而且HLA-A2限制性的抗原肽NY-ESO-1157-165也可被有效地提呈到细胞表面,从而被效应T细胞所识别。
- 乔欢钱晓萍张华刚田婵陈慰峰
- 关键词：酶联免疫吸附测定
- 鼠胸腺树状突细胞株表达的化学趋化因子的类型分析被引量：3
- 2001年
- 目的 分析小鼠胸腺树突状细胞株 (MTDC)中化学趋化因子的类型。方法 以自行设计的引物 ,用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,从小鼠MTDC细胞株扩增SDF 1,IP 10 ,KC等几种化学趋化因子的cDNA片段 ,并对部份扩增产物进行核苷酸测序 ,或dotblotting杂交分析 ,以MTDC浓缩上清进行趋化实验。结果 自MTDC中扩增出了SDF 1、IP 10、KC、MCP 1和Lymphotactin等 5种化学趋化因子的cDNA片段 ,并对SDF 1、KC和Lymphotactin的PCR产物做了核苷酸测序鉴定证明 ,对MCP 1、IP 10和Lymphotactin亦进行dotblotting分析证实。MTDC浓缩上清对小鼠胸腺CD-4 CD-8细胞的趋化指数 (CI)为 3.0 4。结论 MTDC细胞株中存在着多种化学趋化因子。MTDC的浓缩培养上清对小鼠胸腺CD-4 、CD-8细胞具有中等强度的趋化活性 ,符合SDF 1的生物功能。
- 郭静竹龚顺友谢来平钱晓萍陈慰峰
- 关键词：胸腺树突状细胞趋化因子化学分析
- 多种类型趋化性细胞因子在小鼠胸腺基质细胞系中的表达被引量：2
- 2000年
- 目的分析趋化性细胞因子 SDF- 1α、 IP- 10、 KC、 MCP- 1和 RANTES在小鼠胸腺基质细胞系 MTEC1、 MTDC、 D2SC、 MTECB、 TEC 1C8、 TNC及原代培养胸腺基质细胞的半定量表达情况，并检测重组的趋化性细胞因子纯品 SDF- 1α、 IP- 10、 MCP- 1和 RANTES对小鼠胸腺细胞的趋化活性。方法以β- actin为内对照，用 RT- PCR方法，对上述 5种趋化性细胞因子进行 30个循环 PCR扩增，用凝胶成像系统观察扩增结果 ,并对各电泳带进行积分光密度扫描分析。用 Boyden小室法检测重组趋化性细胞因子 SDF- 1α、 IP- 10、 MCP- 1和 RANTES对全胸腺细胞的趋化活性，并计算其趋化指数。结果 SDF- 1α、 IP- 10、 KC、 MCP- 1和 RANTES在被检测胸腺基质细胞系的表达谱不同，表达强度亦有差异。 SDF- 1α和 MCP- 1在 D2SC和 TEC 1C8中未出现可见扩增条带；在 TEC 1C8中也未见 KC的扩增条带。重组趋化性细胞因子 SDF- 1α、 IP- 10、 MCP- 1和 RANTES对胸腺细胞的趋化指数分别为 3.7、 4.5、 6.2和 2.6。结论不同的胸腺基质细胞系，其趋化性细胞因子的表达谱和表达强度不同， 4种重组趋化性细胞因子对胸腺细胞表现出不同的趋化活性。
- 谢来平郭静竹钱晓萍陈慰峰
- 关键词：胸腺基质细胞系趋化性细胞因子趋化作用
- 小鼠CD3^+TCRαβ^+CD4^-CD8^-胸腺细胞特性分析
- 2002年
- 目的 分析CD3+ TCRαβ+ DN(doublenegative)胸腺细胞的特性 ,推断其在胸腺发育中表型和功能的成熟过程。方法 分离纯化小鼠胸腺DN细胞 ,用多重染色的方法分析CD3+ TCRαβ+ DN细胞的表型和TCR库 ,并与外周淋巴结的相应细胞进行对比。结果 DN胸腺细胞为异质性细胞 ,包括CD3-DN细胞和CD3+ DN细胞 ,而CD3+ DN细胞又分为CD3+ TCRαβ+ 和CD3+ TCRγδ+ 2个亚群。其中 ,CD3+ TCRαβ+ DN细胞体积较小 ,绝大部分细胞对可的松耐受 ,细胞中能与自身反应的Vβ3+ 和Vβ11+ 细胞比例极低 ,表型较为成熟 ,与髓质型SP(singlepositive)细胞相当。结论 CD3+ TCRαβ+ DN细胞不同于CD3-TCRαβ-DN细胞 ,是一个独特的细胞亚群 ,只有在经历表型和功能的进一步成熟后才能迁出胸腺 。
- 田甜高凌钱晓萍龚顺友陈慰峰
- 关键词：胸腺细胞细胞表型胸腺发育
- 抗mEET蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及mEET组织学分布的分析被引量：4
- 2006年
- 目的 制备抗小鼠雌激素增强的转录子（mouse estrogen-enhanced transcript，mEET）的单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb），探讨mEET蛋白在小鼠各组织器官中的定位与分布，为进一步了解和研究mEET功能奠定基础。方法 以纯化的原核表达mEET蛋白免疫的SD大鼠脾细胞与Sp2／0融合，经HAT筛选获得稳定分泌抗mEET蛋白的McAb的杂交瘤。采用McAb通过免疫组织化学及间接免疫荧光染色分析mEET在胸腺上皮细胞系MTEC1及各组织器官中的定位与分布。结果 获得4株能高效分泌特异性McAb的抗mEET的杂交瘤细胞系DA10、DB4、4A5和4D8，Ig亚类均为IgM，其腹水效价为1：10^7～1：10^8。Western blot结果表明该抗体能特异性识别原核表达的mEET蛋白，免疫荧光及免疫组化显示mEET蛋白在胞浆点状弥散分布，部分细胞可见核内分布。免疫组化提示该蛋白在全身多个器官有表达，尤其在骨髓中的巨核细胞胞浆中高表达。结论 成功获得抗mEET的特异性的单克隆抗体，为进一步研究mEET的功能及在胸腺发育中的作用创造了条件。
- 邵启祥金容钱晓萍张君张毓陈慰峰
- 关键词：单克隆抗体
- 抗鼠T细胞受体抗体抑制胸腺细胞的迁出
- 2003年
- 目的 通过检测抗仓鼠T细胞受体抗体对胸腺T细胞输出的影响,进一步研究胸腺是提供外周免疫细胞输出的有关机理。方法 体内注射抗TCR抗体48 h后FACS分析新迁出细胞在胸腺、淋巴结的表达。结果 小鼠成熟髓质区高表达T细胞受体的单阳性细胞数目成倍增加,同时皮质区低表达T细胞受体的不成熟双阳性细胞数目减少。成熟的单阳性胸腺细胞高表达归巢受体L-Selectin,表型分析(TCRαβ、CD69、HAS、Vβ7-integrin、Qa-2)显示增加的这群细胞为胸腺的新迁出细胞,此群成熟细胞的高表达,表明胸腺的细胞迁出受到了抑制。胸腺内注射异硫氰酸荧光素16 h后,抗TCR抗体注射小鼠外周淋巴结及脾脏CD4^+、CD8^+新迁出细胞数量减少。结论 抗TCR抗体能抑制胸腺T细胞向外周迁移。
- 李红梅田甜钱晓萍贺学英孔宪涛陈慰峰
- 关键词：L-SELECTIN
- 小鼠胸腺基质细胞系MTDC的鉴定及细胞因子对其表面分子表达的作用
- 2002年
- 目的 鉴定小鼠胸腺基质细胞系MTDC ,为进一步功能研究奠定基础。方法 利用多种鉴定小鼠胸腺树突状细胞的单克隆抗体对我室建立的一株缺乏上皮细胞典型特点的胸腺基质细胞系MTDC进行了鉴定 ;并用多种细胞因子组合对MTDC及其MTDC(10 )克隆进行诱导。结果 CD4 0、B7.1、MHCclassⅠ在MTDC的表达阳性率分别为 70 %、10 %、10 % ;MTDC不表达CD11c、MHCclassⅡ及Ly5 .2 ,低表达CD8α ;DEC 2 0 5这一重要的树突状细胞的表面分子在MTDC及其 14个亚克隆中有不同程度的表达 ,阳性率分布于 5 %～ 5 8%。MTDC(10 )克隆细胞在GM CSF、IL 4、IFN γ ,anti CD4 0McAb联合作用下 ,可上调表达MHCclassⅠ、MHCclassⅡ及B7.1,阳性率分别为 96 .3%、4 2 .1%、5 2 .6 % ,高于MTDC被诱导后表达阳性率 ;并且发现去除 4种因子中任何一种因子 ,均不能上调B7.1的表达 ,且IFN γ在MHCⅡ类分子上调表达中起关键作用。结论 MTDC缺乏典型树突状细胞的表面标志及上皮细胞特点 。
- 贺学英钱晓萍高凌吴励陈慰峰
- 关键词：胸腺基质细胞细胞表面分子细胞因子
- 小鼠趋化性细胞因子MIP-2对胸腺细胞亚群的趋化作用分析
- 2001年
- 经 ＲＴ－ＰＣＲ证实，趋化性细胞因子 ＭＩＰ－２（巨噬细胞炎症蛋白 ２）不仅表达于小鼠腹腔巨噬细胞，亦表达于新鲜培养的小鼠胸腺基质细胞，且小鼠 ＤＮ，ＤＰ，ＣＤ４ＳＰ和ＣＤＳＳＰ ４个胸腺细胞亚群也不同程度表达其特异受体ＣＸＣＲ２．通过Ｂｏｙｄｅｎ小室趋化实验证实，重组小鼠ＭＩＰ－２对胸腺细胞４个主要亚群有不同强度的趋化作用，主要趋化ＤＰ和ＳＰ胸腺细胞正群，从而报道了ＭＩＰ－２参与诱导胸腺细胞发育过程中的定向迁移．
- 龚顺友高凌钱晓萍田甜陈慰峰
- 关键词：胸腺细胞趋化作用趋化性细胞因子细胞发育小鼠
