袁艳鹏
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
- 供职机构：首都医科大学宣武医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 帕金森病患者外周血白细胞中时钟基因Bmal1和Bma12的表达
- 研究帕金森病患者时钟基因的表达,探讨帕金森病的分子时钟机制。实验对象为17例帕金森病（PD）患者（9例男性,8例女性）和16例正常人对照（9例男性,7例女性）,分别在21:00、00:00、06:00和09:00四个时间...
- 张燕莉林庆玲蔡彦宁袁艳鹏左晓虹陈彪
- 关键词：BMAL1昼夜节律白细胞帕金森病
- 文献传递
- 小鼠外周组织时钟基因启动子区甲基化分析被引量：2
- 2012年
- 目的应用一种简单快速经济的方法检测8个主要时钟基因PER1、PER2、CRY1、CRY2、CLOCK、NPAS2、BMAL1和BMAL2启动子区甲基化状态,检测小鼠外周组织肝、心、肾、胸腺、睾丸时钟基因启动子区甲基化状态。方法用偏重亚硫酸氢钠和对苯二酚对基因组DNA进行修饰。修饰后的DNA为模板,两套不同的引物对:甲基化特异性引物对和非甲基化特异性引物对扩增小鼠肝、心、肾、胸腺、睾丸组织时钟基因启动子区。PCR产物进行电泳和测序。结果扩增产物与预期片段大小相符合。PCR产物经过直接测序进一步证实小鼠外周组织时钟基因启动子区均为非甲基化状态。结论建立了一种检测小鼠时钟基因启动子区甲基化的新方法,借此证明成年小鼠5个外周组织8个时钟基因启动子区均呈非甲基化状态。
- 林庆玲蔡彦宁袁艳鹏左晓虹
- 关键词：时钟基因启动子甲基化特异性PCR
- 基于等位基因特异性引物延伸的高分辨率熔解曲线基因分型方法的建立被引量：1
- 2010年
- 目的建立基于等位基因特异引物延伸的高分辨率熔解曲线法(allele-specific-extension high resolution melting curve analysis,ASE-HRM)。方法 ASE-HRM法是在普通高分辨率熔解曲线法(high resolution melting curve analysis,HRM)的PCR反应体系中加入一条等位基因特异性延伸引物(allele-specific-extension,ASE),该引物末端终止于单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,匹配一种等位基因。增加热循环次数,使等位基因特异性引物得以延伸。选取rs1869458位点,用ASE-HRM法和直接测序法对194个人源基因组DNA样品进行基因分型。结果通过分析熔解曲线扩增峰,可区分杂合型和纯合型SNP;通过分析有无引物延伸峰,可区分2种纯合型;同时证明长度为11到13个碱基的ASE引物能得到较好的分型结果;使用锁定核酸(locked nucleic acid,LNA)修饰扩增引物可增加扩增产物和延伸产物的解链温度(melting temperature,Tm)差距,简化基因分型。2种方法对所选DNA样品基因分型所得结果完全吻合。结论 ASE-HRM是一种简单、廉价、闭管并能用于检测所有类型SNP的基因分型法。
- 袁艳鹏林庆玲左晓虹蔡彦宁
- 关键词：单核苷酸多态性高分辨率熔解曲线
- 昼夜节律紊乱与心脑血管疾病被引量：5
- 2010年
- 昼夜节律参与调节多种生理、心理和行为变化,是生命活动的本质特性之一。昼夜节律的产生和维持依赖于多种时钟基因。研究表明,昼夜节律紊乱与心脑血管疾病的发生、发展存在密切的联系,表现在:(1)时钟基因广泛表达于心脑血管系统,并发挥重要的调节功能;(2)心率、血压、血儿茶酚胺水平等心脑血管系统核心指标均表现出昼夜节律变化;(3)心脑血管疾病的发病频率随时间昼夜波动;(4)肥胖、糖尿病、代谢综合征等心脑血管疾病相关病症与时钟基因多态性密切相关;(5)时钟基因对于血管内皮的再生和功能至关重要。该文结合最新研究进展阐述昼夜节律紊乱与心脑血管疾病的相关性,并探讨其可能的机制。
- 袁艳鹏柴玉鑫蔡彦宁
- 关键词：昼夜节律时钟基因心脑血管疾病
- 帕金森病患者外周血白细胞中时钟基因Bmal1和Bmal2的表达被引量：2
- 2011年
- 目的研究帕金森病患者时钟基因的表达，探讨帕金森病的分子时钟机制。方法实验对象为17例帕金森病（PD）患者（9例男性，8例女性）和16例正常人对照（9例男性，7例女性），分别在夜间21：00、00：00、06：00和09：00四个时间点取血样，用实时定量RT—PCR检测时钟基因Bmal1和Bmal2的mRNA表达水平。结果PD患者中，Bmal1在21：00、00：00、06：00的表达水平与正常对照差异具有显著性：21：00[（22．17±4．09），（51．14±8．31），P=0．003]；00：00[（30．30±5．45），（100．00±24．71），P=0．008]；06：00[（19．02±3．33），（65．61±14．11），P=0．002]。Bmal2在21：00、00：00的表达水平与正常对照差异有显著性：21：00[（48．09±7．40），（84．96±9．34），P=0．005]；00：00[（65．85±7．88），（100．00±11．78），P=0．025]。结论PD患者的周围分子时钟发生了改变。PD患者时钟基因Bmal1和Bmal2在外周血的相对表达水平明显减低，为疾病监控和研究疾病对药物的反应性提供分子基础。
- 林庆玲蔡彦宁袁艳鹏左晓虹陈彪
- 关键词：BMAL1昼夜节律白细胞帕金森病
- 临床级脐带间充质细胞制备及鉴定方法研究
- 目的：在GLP 实验室中制备并鉴定临床级脐带间充质细胞(Umbilical Cord-Mesenchymal Stromal Cells,UC-MSC)。方法：新鲜获取的脐带去除血管并进行充分清洗,获得的华通胶(Whar...
- 袁艳鹏王淑艳唐玺和刘仲凤张愚陈志国
- 关键词：胶原酶无血清培养基
- 一种诱导神经干细胞的方法及其应用
- 本发明公开了一种诱导神经干细胞的方法及组合物，利用所述方法和组合物可将外周血单个核细胞诱导形成神经干细胞。所述神经干细胞能表达神经干细胞相关基因，能分化出神经元，星形胶质细胞及少突胶质细胞。上述神经干细胞体外诱导分化形成...
- 陈志国袁艳鹏唐玺和张愚
- 文献传递
- 临床级脐带间充质细胞制备及鉴定
- 目的：在GLP实验室中制备脐带间充质细胞(Umbilical Cord-Mesenchymal Stromal Cells,UC-MSC),进行体外扩增及质检,获取临床级可移植的脐带间充质细胞。方法：新鲜获取的脐带去除血...
- 袁艳鹏王淑艳唐玺和刘仲凤张愚陈志国
- 关键词：无血清培养基分化能力
- 临床级脐带间充质细胞制备及鉴定方法研究被引量：1
- 2017年
- 目的在GLP实验室中制备并鉴定临床级脐带间充质细胞(UC-MSC)。方法新鲜获取的脐带去除血管并进行充分清洗,获得的华通胶(Wharton’s jelly)机械分离后分别进行直接贴壁法和不同的酶消化法,比较获取UC-MSC的数量差别;用不同的无血清培养基进行培养比较细胞形态是否良好,得到最佳形态的UC-MSC。体外培养第3代后进行UCMSC质检,包括细胞活性,生长曲线,无菌检测,人类相关病毒、支原体、内毒素检测,染色体核型分析,FACS免疫表型检测及分化能力检测。不同消化方法获取细胞数之间比较采用两样本配对t检验。结果胶原酶Ⅱ消化获得的UC-MSC数(5.3×10~6±0.58个/ml)与胶原酶Ⅰ+0.25﹪胰酶消化法(2.53×10~5±0.03个/ml)及直接贴壁法(2.6×10~5±0.05个/ml)之间差异有统计学意义(P<0.05),与胶原酶Ⅰ消化法获取细胞数(5.1×10~6±0.57个/ml)之间差异无统计学意义(P=0.07),但培养视野最干净;Mesen Cult-ACF Medium培养获得的UC-MSC形态最佳;UC-MSC质检细胞活性冻存前达99.8﹪,冻存复苏后达99﹪;无细菌、支原体、乙肝病毒、丙肝病毒、梅毒螺旋体、艾滋病毒、肺炎支原体、EB病毒、巨细胞病毒污染;内毒素检测结果均<1 EU;CD73/CD90/CD10~5阳性率达98﹪,CD34/CD45/HLA-DR呈阴性,阳性率<2﹪;染色体核型分析无突变或缺失;UC-MSC具有成脂、成骨或成软骨方向分化的能力。结论通过优化分离和培养条件,采用无血清及无动物来源的培养系统,在GLP实验室内可获得临床级UC-MSC。
- 袁艳鹏王淑艳唐玺和刘仲凤张愚陈志国
- 关键词：脐带间质细胞胶原酶类细胞分化
- 反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达被引量：1
- 2011年
- 目的建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nestedreverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系。方法选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,per2,cry1和cry2,以及看家基因β-actin,分别设计和优化巢式引物对。以基因质粒为模板,检测巢式多重PCR体系的灵敏度。体外转录得到各个基因的RNA模板,并检测反转录巢式多重PCR体系的灵敏度。使用手动微操作器,显微镜下负压获取悬浮单个NIH/3T3细胞,使用反转录巢式多重PCR体系检测其中目的时钟基因。应用实时定量PCR检测整体水平时钟基因表达情况,与单细胞水平进行比较。结果巢式多重PCR检测体系可以检测出单拷贝质粒DNA。反转录巢式多重PCR能够检测出4拷贝RNA模板。利用上述体系发现,NIH/3T3单细胞中时钟基因环路表达存在很大差异,同时发现群体水平per1和per2表达的高峰和低谷间差异有统计学意义,而单细胞水平per1表达则差异无统计学意义。结论建立了高度灵敏的用于检测时钟基因表达的反转录巢式多重PCR体系,揭示了单细胞水平时钟基因表达的异质性,也验证了整体水平与单细胞水平时钟基因表达的差异。
- 袁艳鹏关云谦林庆玲薛金花蔡彦宁
- 关键词：时钟基因单细胞NIH/3T3
