葛世超
- 作品数：8 被引量：23H指数：4
- 供职机构：中国农业大学生物学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关DNA片段的亚克隆和测序分析被引量：4
- 2001年
- 将苜蓿中华根瘤菌 (Sinorhizobiummeliloti) 0 4 2B与耐盐有关的 4kbClaⅠDNA片段克隆在 pML1 2 2上 ,用HindⅢ酶切下其 2 4kbDNA片段 ,回收后与 pBBR1 MCS2连接 ,然后转化大肠杆菌 (Escherichiacoli)DH5α,筛选到转化子GS2。将残留在 pML1 2 2上 1 6kbClaⅠ HindⅢDNA片段连同质粒一起回收 ,让其自连 ,转化大肠杆菌S1 7- 1 ,得到转化子GS0。以GS0为供体 ,0 4 2B的盐敏感突变株GZ1 7为受体 ,进行二亲本杂交 ,没有得到接合子。以GS2为供体 ,GZ1 7为受体 ,在辅助质粒pRK2 0 1 3的协助下 ,进行三亲本杂交 ,筛选到接合子GG2 ,获得 2 4kbHindⅢ与耐盐有关的DNA片段。将此片段连接到测序载体 pGEM 7Zf(+)上进行测序。测序结果表明 ,该 2 4kbHindⅢDNA片段含有 3个开放阅读框 (ORF)。在此基础上再一次亚克隆 ,获得 1 9kb与耐盐有关的DNA片段。
- 葛世超樊振川陈雪松杨苏声
- 关键词：苜蓿中华根瘤菌耐盐亚克隆测序
- 费氏中华根瘤菌与耐盐有关的DNA片段的亚克隆和测序被引量：5
- 2000年
- 将费氏中华根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｆｒｅｄｉｉ） ＲＴ１９与耐盐有关的２３ｋｂ ＤＮＡ片段用ＢａｍＨＩ酶切成大小不同的长度，分别与质粒 ｐＭＬ１２２连接，然后转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）Ｓ１７－１，筛选出３个转化子。以这些转化子为供体，ＲＴ１９的盐敏感突变株ＲＣ３－３为受体，分别进行二亲本杂交，筛选到接合子ＢＲ２，得到４．４ｋｂ与耐盐有关的ＤＮＡ片段。根据其物理图谱，酶切成６个ＤＮＡ片段，并分别连接到质粒ｐＵＣ１８进行测序。测序分析表明，该４．４ｋｂＤＮＡ片段含有ｆｉｘＯ、ｆｉｘＮ基因和３个开放阅读框（ＯＲＦ）。
- 卞学琳葛世超杨苏声
- 关键词：费氏中华根瘤菌耐盐亚克隆测序豆科植物
- 苜蓿中华根瘤菌042B和费氏中华根瘤菌RT19与耐盐有关基因的克隆和表达
- 将苜蓿中华根瘤菌O42B与耐盐有关的4kbDNA片段用HindIII酶切,得到2.4kb和1.6kb的DNA片段.先回收并纯化2.4bkDNA片段,与pBBR1-MCS2连接,并转化大肠杆菌DH5α,得到转化子GS2.以...
- 葛世超
- 关键词：苜蓿中华根瘤菌费氏中华根瘤菌耐盐克隆测序植物转化
- 苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关基因rstA在大肠杆菌中的高效表达及其产物的纯化被引量：2
- 2005年
- 苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti) 0 4 2BM与耐盐有关的1 9kbDNA片段含有两个开放阅读框,采用PCR方法分别将它们扩增,连接到穿梭质粒上,并进行了耐盐功能检测,证明其中的ORF2具有耐盐性,定名为rstA基因。将它分别克隆到表达载体pThio HisA、B和C上,构建成重组质粒pGSA、pGSB和pGSC ,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)Top10后,经IPTG诱导,pGSA获得高效表达。表达蛋白占菌体总蛋白的36 % ,但大多数以包涵体形式存在。对表达产物依次进行ProBondTM树脂亲和纯化、饱和硫酸铵盐析,最后得到纯度为95 %的融合蛋白。SDS PAGE显示纯化的蛋白质为分子量4 3kD的单一蛋白带。
- 葛世超王磊李小红亓苏伟杨苏声
- 关键词：苜蓿中华根瘤菌耐盐纯化
- 根瘤菌与耐盐有关基因的克隆与表达
- ＜正＞ 苜蓿中华根瘤菌（Sinorhizobium meliloti）042B是分离自新疆的苜蓿根瘤,能在含有0.5mol/L NaCl的TY培养基上生长。通过构建042B的基因文库,然后采用互补法,从中筛选出4kb与耐...
- 杨苏声葛世超刘艳宁陈雪松卞学琳
- 关键词：苜蓿中华根瘤菌费氏中华根瘤菌耐盐测序
- 文献传递
- 费氏中华根瘤菌与耐盐有关基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：10
- 2001年
- 费氏中华根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｆｒｅｄｉｉ）ＲＴ１９与耐盐有关的４．４ｋｂ ＤＮＡ片段含有３个相间的开放阅读框，经亚克隆及功能检测，证实其中的ＯＲＦ２与耐盐有关。将ＯＲＦ２分别克隆到表达载体以ｐＴＨｉｏＨｉｓＡ、Ｂ和Ｃ上，得到３个重组质粒ｐＧＡ、ｐＧＢ和ｐＧＣ，转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＤＨ５α。经ＩＰＴＧ诱导后和作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，发现只有ｐＧＣ编码的融合蛋白获得了表达。其分子量为５３ｋＤａ，恰好是ｔｒｘＡ基因编码的硫氧还蛋白与推测的蛋白质分子量之和。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证实，表达的蛋白质是ｔｒｘＡ基因和目的基因编码的。
- 葛世超刘艳宁杨苏声
- 关键词：费氏中华根瘤菌耐盐克隆大肠杆菌
- 应用gfp对盐单胞菌C6可能转座酶A基因启动区的鉴定
- 樊振川王海洪葛世超杨苏声
- 盐单胞菌（Halomonas sp.)C6与耐盐有关的可能转座酶A基因长1707 bp，编码568个氨基酸。其上游1-171bp DNA区域内含有核糖体结合位点GAGG和类似于大肠杆菌（E.coli）proU、proP和...
- 关键词：
- 关键词：盐单胞菌耐盐基因抗性基因启动区
