范忠玲
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：山东省科技攻关计划山东省自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 山羊IL-18成熟蛋白在昆虫细胞／杆状病毒中的表达及其活性分析被引量：1
- 2011年
- 目的:在昆虫细胞/杆状病毒中表达山羊白介素18(gIL-18)成熟蛋白,并对其生物学活性进行分析。方法:将编码山羊白介素18(gIL-18)成熟蛋白的基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac Dual上,构建重组质粒pFastBac Dual-gIL18,将该重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-gIL18,在Cellfectin作用下,将Bacmid-gIL18转染昆虫细胞sf9,收获感染后不同时间段的细胞,进行SDS-PAGE、Western blot检测和生物学活性分析。结果:重组蛋白获得正确表达具有良好的免疫原性;生物学活性分析表明,重组蛋白能够促进淋巴细胞增殖、诱导淋巴细胞分泌IFN-γ。结论:用昆虫细胞/杆状病毒系统成功表达了gIL-18成熟蛋白,且具有良好的免疫原性和生物学活性,从而为进一步研究gIL-18作为免疫调节剂和免疫佐剂在生产上的应用奠定了基础。
- 王婷婷王希辉范忠玲陈金龙曹丙蕾孔娜胡敬东赵宏坤
- 关键词：杆状病毒昆虫细胞生物学活性
- 鸡白细胞介素18成熟蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及其活性检测被引量：1
- 2011年
- 首先将鸡白细胞介素18成熟蛋白(mature chicken interleukin-18,mChIL-18)基因亚克隆至杆状病毒转移载体pFastBac HTb上,然后转化至含穿梭载体Bacmid的受体菌E.coli DH10BacTM中,构建重组Bacmid(rBacmid)。通过脂质体介导法将纯化的rBacmid转染sf9细胞,获得完整重组杆状病毒,将达到一定滴度的重组杆状病毒感染sf9,收获感染后不同时间段的培养上清和细胞,经SDS-PAGE分析、Western-blotting和间接免疫荧光(IFA)检测,结果表明,分子量约为23KDa的重组蛋白在昆虫细胞中获得了表达;鸡淋巴细胞转化试验和水疱性口炎病毒(VSV)抑制试验表明,表达产物具有良好的生物学活性。结论:在杆状病毒表达系统中成功表达了有活性的mChIL-18蛋白。
- 范忠玲王婷婷马凤龙胡敬东
- 关键词：昆虫细胞生物学活性
- 鸡白细胞介素18成熟蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及其活性检测
- 白细胞介素18（Interleukine-18，IL-18）是1995年由Okmura等从小鼠肝脏中克隆获得的一种细胞因子，主要由单核巨噬细胞系统的细胞分泌，具有强烈的IFN-γ诱生能力，对机体起着重要的免疫调节和保护作...
- 范忠玲
- 关键词：昆虫杆状病毒表达系统昆虫细胞
- O型FMDV VP1基因与山羊IL-18基因在昆虫细胞中的共表达与活性检测
- 2011年
- 以杆状病毒pFastBacTM Dual为载体,将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因和山羊白介素18(gIL-18)基因,分别插入到双表达载体的P10启动子和多角体蛋白启动子PH的下游,构建重组质粒pFastBacTMDual-gIL18-VP1,然后转化DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-gIL18-VP1,并利用昆虫细胞进行转染。间接免疫荧光试验(IFA)检测表明gIL-18基因和VP1基因同时在同一细胞中独立表达。将共表达产物进行生物学活性分析表明,重组蛋白能够诱导山羊脾淋巴细胞生成IFN-γ抑制水疱性口炎病毒(VSV)在牛肾细胞(MDBK)上生长。本试验用Bac-to-Bac系统成功构建了同时含有gIL-18基因和VP1基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中得到了高效表达,且具有良好的生物学活性,从而为下一步研究gIL-18在口蹄疫(FMD)中的免疫调节作用奠定了坚实的基础。
- 王婷婷范忠玲王希辉陈金龙曹丙蕾孔娜胡敬东赵宏坤
- 关键词：VP1基因共表达SF9细胞
- 鸡白介素18成熟蛋白突变体在毕赤酵母中的高效表达及其生物活性检测被引量：1
- 2010年
- 【目的】通过目的基因克隆,表达获得高产量具有生物活性的鸡白介素18成熟蛋白（maturechickeninterleukin-18,mChIL-18）。【方法】根据毕赤酵母密码子偏嗜性,通过引物设计来定点突变鸡白介素18基因,构建了重组质粒pPIC9K-mChIL-18。将线性化的重组阳性质粒电转到毕赤酵母GS115中,经筛选多拷贝阳性子后进行诱导表达。用MTT法和微量细胞病变抑制法检测其生物活性。【结果】筛选的多拷贝重组菌在诱导温度为28℃,培养液pH值为6.5,甲醇的诱导浓度为2%,诱导时间为120h时表达量最高,约为480mg/L。表达的mChIL-18蛋白能够刺激SPF鸡淋巴细胞大量增殖,用400μg/L的mChIL-18诱导淋巴细胞产生γ-干扰素（IFN-γ）,其生物活性最高可达1.7×104U/mL,且能有效抑制水泡性口炎病毒（VSV）在鸡胚成纤维细胞（CEF）上的生长。【结论】毕赤酵母能够高效表达具有生物活性的鸡白介素18,有望作为免疫佐剂运用到工业化生产和兽医临床中。
- 王希辉岳寿松胡敬东黄亦钧陈金龙王婷婷范忠玲赵宏坤
- 关键词：毕赤酵母突变体生物活性
