石琳
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人CD271基因的克隆及原核表达
- 2008年
- 目的克隆人CD271基因,并在大肠杆菌中表达。方法采用RT-PCR技术从人REH细胞系中扩增CD271基因,将其克隆入pET22b表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行纯化及Western blot鉴定。结果重组表达质粒pET22b/CD271经双酶切鉴定,可见1197bp的目的基因条带。表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约75000处可见表达条带。IPTG浓度为0.5mmol/L时,目的蛋白表达量最高。纯化后蛋白纯度为82.5%。Western blot检测表明纯化后的蛋白具有良好的反应原性。结论已成功克隆了人CD271基因,并在大肠杆菌中获得表达。
- 徐艳红石琳张涛冯春玲刘红芹屈浩黄丽华朱卫彬张宇光
- 关键词：克隆原核表达
- 以DNA免疫和细胞抗原加强制备抗DAF单克隆抗体及特性分析被引量：1
- 2007年
- 目的:联合应用DNA免疫和细胞抗原加强制备抗DAF单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:利用分子克隆的方法构建重组质粒pcDNA3.1/DAF。以其免疫BALB/c小鼠股四头肌3次,并在融合前用表达DAF分子的HPB-ALL细胞为抗原加强免疫1次,制备抗DAFmAb。以ELISA法测定mAb的Ig亚类。采用流式细胞术和Westernblot鉴定mAb的特异性和结合活性。以非免疫竞争法测定mAb的亲和常数。结果:成功地获得2株可识别DAF分子不同抗原表位的mAbB6E和2B6B,其Ig亚类均为IgG2a。mAb2B6E的亲和常数为1.81×10-7mol/L,与天然的细胞膜蛋白、变性的膜蛋白以及重组DAF蛋白都有良好的结合活性和特异性。结论:先以pcDNA3.1/DAF肌肉内免疫,再应用细胞抗原加强免疫的方法制备特异性的mAb,为在无法获得纯化蛋白质的情况下开拓了研制特异性抗体的新途径,也为日后改造抗DAFmAb进行靶向治疗研究打下了基础。
- 潘娜石琳黄丽华周立何大水张宇光
- 关键词：DAFDNA免疫单克隆抗体
- 定点突变的人胰岛素原基因及其腺病毒重组载体
- 本发明公开了一种定点突变的人胰岛素原基因及其腺病毒重组载体，(1)RT－PCR方法从正常流产胎儿胰腺组织获取野生型人胰岛素原cDNA；(2)重叠延伸PCR方法在人胰岛素原cDNA上制造两个突变位点，以使其可以被蛋白酶Fu...
- 韩忠朝石琳
- 文献传递
