王虹军
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 一种能抑制结核杆菌生长的化合物及其应用
- 本发明属医药技术领域，具体为一种能抵制结核杆菌生长的化合物及其应用。该化合物为5－[3－(3，5－二甲基－1－氢－吡唑)－2－羟基－丙氧基]－2－甲基－1－(p－苯甲基)吲哚－3－羧酸，在对结核杆菌生长的体外抑制试验中，...
- 王洪海王菲菲沈洪波黄强胡海荣徐胜凤王虹军
- 文献传递
- 结核分枝杆菌H37Rv色氨酸合成酶α亚基编码基因的克隆、表达及酶学性质分析被引量：1
- 2008年
- 目的克隆表达色氨酸合成酶α亚基编码基因并对其进行功能分析。方法以结核分枝杆菌(简称结核杆菌)H37Rv基因组为模板,扩增trpA基因,构建pET30a-trpA重组质粒;转化重组质粒到大肠埃希菌DH5α并在BL21(DE3)诱导表达,纯化可溶性的结核杆菌重组色氨酸合成酶α亚基(His-rMtTrpA)。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和质谱分析测定相对分子质量(Mr)后,用圆二色光谱(CD)分析和同源模建方法检测二级和三级结构。研究不同浓度His-rMtTrpA对β亚基酶活反应的影响。结果成功克隆了813bp的目的基因trpA,并获得了高纯度的His-rMtTrpA蛋白。重组蛋白Mr为33.151×103(含载体蛋白)。25℃时His-rMtTrpA的二级结构包括31.8%α螺旋、31.8%β折叠、8.4%β转角和27.9%无规则卷曲,它的三维模型显示为(β/α)8桶状结构。酶学性质研究表明,在His-rMtTrpA与MtTrpB的摩尔比为2.2时,色氨酸合成酶α亚基可以最大限度促进β亚基酶活反应。结论成功得到高纯度的重组目的蛋白His-rMtTrpA,其功能分析为针对色氨酸合成酶的药物筛选设计提供理论基础。
- 赵静静徐胜凤王虹军沈洪波王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌Α亚基同源模建
- 结核分枝杆菌H37Rv组氨醇脱氢酶基因的克隆、表达及酶学性质分析被引量：2
- 2007年
- 以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增hisD基因,构建pET-28a-HDH重组质粒;转化重组质粒到E.coli BL21(DE3)并诱导表达,纯化可溶性的结核分枝杆菌L-组氨醇脱氢酶(HDH),并对其性质进行研究,结果表明:重组结核分枝杆菌L-组氨醇脱氢酶能以L-组氨醇和NAD+为底物催化L-组氨醇生成L-组氨酸;该酶的最适pH值为8.3,最适温度为45℃,比活力为1.788 U/mg;Mn2+,Ca2+,Zn2+,Co2+等对酶促反应有激活作用;底物NAD+和L-组氨醇的米氏常数分别为0.9765 mmol/L和2.755μmol/L;25℃时重组蛋白的二级结构中有20.5%的α-螺旋,40.9%β-折叠,4.2%β-转角,34.3%无规卷曲.
- 刘瑞卿金瑞良王虹军徐胜凤曹健淳于利娟许云敏王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌NADH
- 结核分枝杆菌H37Rv高丝氨酸激酶基因的克隆、表达及酶学性质分析被引量：1
- 2008年
- 采用PCR方法克隆到结核分枝杆菌H37Rv的高丝氨酸激酶基因thrB,将其连接到pET-28a(+)表达载体中,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中经丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到高效表达.用Ni.NTA His.Bind亲和层析柱对表达的活性重组蛋白进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究.结果表明:重组结核分枝杆菌高丝氨酸激酶能以L-高丝氨酸和ATP为底物催化L-高丝氨酸生成O-磷酰-L-高丝氨酸,该酶的比活力为2.946 U/mg,对底物L-高丝氨酸和ATP的米氏常数分别为2.303 1 mmol/L和2.342 9 mmol/L.
- 王虹军刘瑞卿金瑞良曹健徐胜凤王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌ATPNADH
