王春雨
- 作品数：11 被引量：16H指数：2
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- CD81介导丙型肝炎病毒入胞作用的研究
- 2006年
- 丙型肝炎病毒（HCV）感染呈全球分布，全世界约有1．7亿HCV感染者，占世界人口的3％，是人类免疫缺陷病毒-1感染者的5倍。约70％HCV感染者转化为慢性，并与肝硬化、肝衰竭和肝癌的发生密切相关。迄今为止，对于HCV的嗜肝性尚无合理解释，参与HCV识别、黏附及入胞的肝细胞表面分子还不完全清楚。CD81属于四次跨膜超家族成员，能够与HCV包膜糖蛋白E2结合，有学者认为其可能是HCV的特异性受体。为验证CD81介导HCV包膜蛋白及HCV颗粒入胞能力，我们构建含人CD81基因及HCV包膜蛋白E2661与人IgG1-hcγ1融合蛋白的真核表达载体并进行真核表达。将HCV包膜蛋白或HCV阳性血清与稳定表达CD81的细胞株共同孵育，检测细胞内HCV包膜蛋白及HCV的mRNA，观察了CD81介导HCV包膜蛋白及HCV颗粒入胞能力。
- 贾战生杜德伟刘秋平王春雨秦鸿雁魏欣赵甫涛李光玉韩骅
- 关键词：包膜糖蛋白
- 人工进化丙型肝炎病毒C和E1区噬菌体展示文库的构建及初步筛选
- 2006年
- 目的构建人工进化丙型肝炎病毒(HCV)C和E1区基因噬菌体展示文库,并进行初步筛选。方法应用DNA改组技术进行不同基因型的HCV C和E1区基因的人工进化,克隆于噬菌体载体,以辅助噬菌体M13K07援救后,构建噬菌体展示文库,应用HCV C和E1区单克隆抗体进行初步筛选。随机选取筛选后的20个噬菌体克隆,用高滴度HCV阳性血清通过双抗体夹心酶联免疫吸附法进行抗原抗体结合反应,以正常人血清作为对照。结果人工进化HCV C和E1区噬菌体展示文库库容达1．64×106,重组率为0．86。以C和E1区单克隆抗体淘筛4轮,噬菌体展示文库得到特异性富集。筛选获得12个阳性克隆。结论所构建的噬菌体展示文库的库容和多样性符合筛选的要求。筛选获得的阳性克隆具有较好的抗原抗体结合反应活性,表现出较好的亲和力。
- 赵甫涛贾战生李谨革王春雨魏欣李光玉白雪帆
- 关键词：细菌噬菌体肽库
- 胎儿骨髓间充质干细胞的体外培养及其生物学特性的研究被引量：1
- 2005年
- 目的:确定人胎儿骨髓间充质干细胞(Fetalmesenchymalstemcells,FMSCs)体外分离和培养的方法,观察其生物学特性,建立稳定的MSCs体外培养扩增体系。方法:通过密度梯度离心、贴壁筛选法分离培养人FMSCs,观察细胞的形态与超微结构,并研究其增殖及生长特征,应用流式细胞术测定细胞周期和CD14、CD29、CD34、CD44、CD45的表达。结果:在体外培养条件下人FMSCs贴壁生长,为成纤维细胞样,CD14/CD34/CD45阴性,CD29/CD44阳性,核浆比大,细胞周期检测G0/G1期约占95%,具有原始细胞的特征。结论:体外培养可获得较均一的FMSCs,形态单一、生长稳定、增殖性较强,可以用于细胞治疗的进一步研究。
- 魏欣刘秋平李羽张岩王春雨李光玉白雪帆贾战生
- 关键词：间充质干细胞流式细胞术细胞分离细胞培养
- 丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞生物学性状的影响被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞生物学性状的影响。方法:分别采用M atrigel人工重建基膜侵袭实验、MTT法细胞黏附实验、细胞移动实验,研究HCV RNA阳性患者血清感染体外培养的人胎盘滋养层细胞侵袭力以及与侵袭力相关的黏附、移动能力的改变;检测培养上清中人绒毛膜促性腺激素(HCG)浓度以评估感染对细胞激素合成、分泌功能的影响。结果:感染组细胞侵袭、黏附、移动以及激素合成分泌功能较对照组均有显著下降(P<0.05)。结论:HCV持续感染可抑制体外培养人胎盘合体滋养层细胞包括侵袭力和激素合成、分泌功能在内的多种生物学功能。
- 张亚飞聂青和邵彬赵甫涛王春雨李军徐辉
- 关键词：丙型肝炎病毒合体滋养层细胞生物学性状
- 胎儿骨髓间充质干细胞的培养及其向肝细胞样细胞的诱导分化
- 目的建立稳定的胎儿间充质干细胞(FMSCs)体外培养扩增体系,探索其在体外诱导为肝细胞样细胞的分化潜能。方法通过密度梯度离心、贴壁筛选法分离培养人FMSCs,应用流式细胞术检测其特异表面标志物的表达。加HGF、FGF-4...
- 贾战生魏欣王春雨刘秋平李光玉李羽白雪帆
- 文献传递
- 人-山羊异种核移植胚胎发育的初步研究被引量：2
- 2006年
- 以体外分离培养的人胚胎成纤维细胞为核供体,经血清饥饿培养后,通过显微操作技术移入山羊去核卵母细胞中,采用化学方法激活重组胚.通过体外培养观察,2-细胞胚胎发育率可达51.33%,4-细胞发育率为31.42%,但发育至桑椹胚阶段的胚胎数目大大减少,仅为9.73%.虽然目前尚未能获得异种核移植囊胚,但实验结果说明山羊成熟卵母细胞可以支持人体细胞核完成重编程,人-山羊异种体细胞核移植重组胚可在体外完成其早期发育.
- 王春雨刘凤军武浩魏欣赵甫涛贾战生
- 关键词：异种核移植山羊卵母细胞
- 胎儿骨髓间充质干细胞的培养及其向肝细胞样细胞的诱导分化
- 目的建立稳定的胎儿间充质干细胞（FMSCs）体外培养扩增体系,探索其在体外诱导为肝细胞样细胞的分化潜能。方法通过密度梯度离心、贴壁筛选法分离培养人FMSCs,应用流式细胞术检测其特异表面标志物的表达。加HGF、FGF-4...
- 魏欣贾战生王春雨刘秋平李光玉李羽白雪帆
- 关键词：间充质干细胞细胞培养诱导分化
- 丙型肝炎病毒C区的DNA改组被引量：2
- 2006年
- 目的:利用DNA改组技术进行不同基因型别丙型肝炎病毒(HCV)基因组C区的人工进化。方法:首先利用PCR扩增了三段具有较高序列同源性的460 bp基因片段,然后将其等量混合,在Mg2+存在的条件下,用脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ)切割成50 bp左右的小片段。这些小片段在不外加引物的条件下,利用PCR反应进行重聚,再将重聚物经过一轮正常的PCR扩增。结果:获得了与原片段大小相当的基因片段。结论:这一技术为进一步筛选高活性的HCV C区基因打下基础,有利于从一组序列同源性程度较高的基因库构建随机嵌合基因,并为改组其他基因家族提供了借鉴。
- 赵甫涛贾战生李谨革王春雨魏欣白雪帆
- 关键词：肝炎病毒丙型DNA改组定向进化
- 核移植胚胎干细胞的研究及其应用前景被引量：6
- 2005年
- 随着核移植技术和干细胞技术的逐渐成熟,目前已获得牛、小鼠核移植胚胎干细胞,以及人-兔异种间核移植胚胎干细胞,这些细胞在体外可分化成多种细胞形态. 已经进行的实验性动物克隆性治疗,显示了诱人的潜力,但人核移植胚胎干细胞研究还面临着许多问题,如建系效率低、卵母细胞来源有限以及伦理学和安全性问题等. 长远地看,随着克隆效率的提高,在道德与法律之间达成共识,核移植胚胎干细胞必将造福人类.
- 王春雨贾战生韩骅
- 关键词：治疗性克隆核移植
- 人工进化丙型肝炎病毒C和E区噬菌体展示文库的构建及初步筛选
- 目的:构建人工进化丙型肝炎病毒(HCV)C和E区基因噬菌体展示文库,并进行初步筛选研究。方法: 首先,利用DNA改组进行不同基因型的HCV C和E区的人工进化,然后将其克隆于噬菌体载体pCANTAB5S, 再以辅助噬菌体...
- 赵甫涛贾战生李谨革王春雨魏欣李光玉白雪帆
- 文献传递
