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半巢式甲基化特异性聚合酶链反应对肿瘤细胞株p15基因甲基化或缺失状态的检测被引量：11: 2007年; 本研究分析多种恶性肿瘤细胞株的p15基因甲基化或缺失状态,阐明p15基因甲基化或缺失在肿瘤发生发展中的作用。运用半巢式甲基化特异性聚合酶链反应(hemi-nested methylation specific polymerase chain reaction,hn-MSP)分析20种恶性肿瘤细胞株和正常人单个核细胞或细胞株的p15基因甲基化及缺失状态,并评价该方法的敏感性和特异性。结果表明:在所有的细胞中,Molt-4、Raji、KG1、CA46、SW480、NCE、SMMC-7221、NCI-H446细胞为部分甲基化,hn-MSP检测p15基因甲基化敏感性可达到1×10-5。正常人单个核细胞、HL-60、HeLa、HepG2、293、SGC7901、U266、CEM细胞则为p15非甲基化,而K562、NB4、GMC、Jurkat似乎显现p15基因缺失或突变。结论:p15基因甲基化或缺失在多种肿瘤,特别在恶性血液病中有较高的发生率,且对疾病的进展及预后有密切的关系,hn-MSP具有较高的敏感性和特异性,值得在临床推广应用。; 林福安叶宝国沈建箴周华蓉傅海英范丽萍; 关键词：P15INK4B 基因甲基化基因缺失

半巢式甲基化特异性PCR在急性淋巴细胞白血病患者p15基因甲基化检测中的应用被引量：1: 2012年; 目的探讨半巢式甲基化特异性PCR（hn—MSP）的特性并了解p15基因甲基化和缺失在急性淋巴细胞白血病（ALL）发病中可能起到的作用。方法运用hn—MSP方法和基因组硫化修饰PCR（BSP）后直接测序方法，分析在25例初诊或复发不同阶段ALL患者以及部分恶性血液病细胞株中p15基因的甲基化和缺失状态，以10名健康者或非恶性血液病患者为对照组。以Molt-4细胞株为阳性对照，以对照组单个核细胞为阴性对照，分析hn-MSP方法的敏感性和特异性。结果hn-MSP产物克隆测序结果与BSP结果一致，hn—MSP检测p15基因甲基化敏感性可达到1×10-5。25例ALL患者p15基因甲基化发生率为68．0％（17例）；25例ALL患者中3例p15基因外显子1缺失。对照组p15基因无甲基化或缺失。结论p15基因甲基化状态在ALL患者中有较高的检出率，hn—MSP对分析p15基因甲基化状态具有较高的特异性和敏感性。; 林福安叶宝国沈建箴林聪猛范丽萍周华蓉傅海英; 关键词：甲基化基因缺失 MOLT-4 细胞株

半巢式MSP在急性白血病患者p15基因甲基化检测中的应用: 2007年; 传统的观点认为，基因的缺失和突变是基因失活的主要方式，最近研究显示，基因异常甲基化所导致的基因沉默亦是基因失活的方式之一。在多种恶性血液病中，p15基因发生异常的主要途径是基因异常甲基化和缺失。目前国内文献上p15基因甲基化的检测方法主要集中在甲基化敏感限制性酶切和Herman等总结的甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法。我们通过优化MSP方法，设计了p15基因的半巢式-MSP（Hn-MSP）引物对85例急性白血病（AL）患者进行了p15甲基化状态的检测。; 林福安叶宝国沈建箴范丽萍周华蓉傅海英林聪猛喻爱芳; 关键词：P15基因甲基化急性白血病患者甲基化检测半巢式甲基化特异性聚合酶链反应

丙戊酸钠抑制人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及组蛋白乙酰化调控的研究被引量：6: 2010年; 本研究探讨丙戊酸钠(valproic acid sodium,VPA)对U266细胞增殖的抑制作用及对组蛋白乙酰化修饰调控的影响。采用CCK-8法检测VPA对U266细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测VPA作用前后U266细胞周期的变化,半定量RT-PCR检测VPA作用后U266细胞中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)mRNA的表达变化,Western blot方法检测VPA作用后HDAC1及组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平的变化。结果表明,VPA对U266细胞增殖的抑制作用呈时间-浓度依赖性;2.5mmol/L的VPA处理细胞48小时后,细胞周期检测显示G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降,细胞被阻滞在G0/G1期(p<0.05);RT-PCR证实VPA能够抑制HDAC1 mRNA的表达水平;Western blot方法证实不同浓度VPA作用细胞48小时后HDAC1蛋白水平降低,组蛋白H3、H4乙酰化表达水平提高。结论:VPA能够抑制U266细胞增殖,使细胞阻滞于G0/G1期,这可能与VPA抑制HDAC1表达,上调组蛋白H3、H4乙酰化水平有关。; 朱艺芳叶宝国沈建箴林聪猛林福安沈松菲徐成波; 关键词：丙戊酸钠多发性骨髓瘤 U266细胞组蛋白去乙酰化

特发性炎性肌病育龄女性患者的生育情况调查被引量：2: 2015年; 目的调查PM和DM等特发性炎性肌病（ⅡM）患者的生育情况,了解ⅡM疾病活动性和治疗对胎儿的影响,并探讨妊娠与ⅡM发病的相关性.方法制定调查项目,对北京协和医院2007-2013年间住院的ⅡM育龄女性（22～53岁）患者75例进行问卷调查,包括患者的生育情况、妊娠过程中和分娩后疾病的活动性、用药情况和胎儿的结局,采用x2检验比较不同ⅡM疾病活动性对妊娠患者和胎儿的影响,以及妊娠对ⅡM的影响.结果 75例患者（19例PM,56例DM）中62例共计妊娠144次,其中有18次妊娠在ⅡM发病后出现,还有2例ⅡM患者在妊娠过程中发病,2例在分娩或流产后1个月内发病.ⅡM发病后妊娠和ⅡM发病前妊娠的异常妊娠比例分别为38.9％（7/18）、10.7％（13/122）,二者差异有统计学意义（x2=10.21,P=0.001）.其中ⅡM发病后妊娠的18次,7次妊娠病情有活动,异常妊娠发生率71.4％（5/7）,包括2例自然流产、1例胎停育、2例早产;而病情相对稳定的11次妊娠,仅发生1例早产和1例胎儿停育,异常妊娠发生率为18.2％（2/11）,二者差异有统计学意义（x2=5.103,P=0.024）.2例ⅡM发病后妊娠的患者妊娠前病情稳定,妊娠过程中出现病情活动,其中1例患者妊娠2次都出现皮疹,1次胎儿停育,1次早产（孕33＋4周）,另1例患者在妊娠5个月时出现肌无力症状,胎儿发生早产（孕36＋3周）.1例于分娩后18d发病,婴儿正常,1例于人工流产后1个月内发病.ⅡM合并妊娠患者中,病情稳定者无治疗或口服小剂量激素维持,病情活动者则多口服大中剂量泼尼松（30～60 mg/d）治疗,或联用羟氯喹（0.2 g,每日2次）,有2例联用静脉用免疫球蛋白（IVIG）,患者病情均得到缓解.结论 ⅡM患者合并妊娠时容易导致自然流产、胎儿宫内停育、早产等,和ⅡM疾病活动性呈正相关.ⅡM活动期合并妊娠时,对患者和胎儿最有效和安全的治疗可能是IVIG,同时需联合中�; 林福安杨婧钟志强尤欣; 关键词：皮肌炎多发性肌炎特发性炎性肌病

巢式MSP法检测急性白血病患者p16基因甲基化状态被引量：14: 2007年; 为了研究p16基因甲基化和缺失与急性白血病发病的关系,探讨其在成人急性白血病发生发展中的生物学意义,应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nested methylation specific polymerase chain reaction,n-MSP)分析了82例各种亚型的急性白血病患者在初诊或复发不同阶段p16基因的甲基化和缺失状态,并且在基因组硫化修饰PCR后克隆测序验证结果的准确性。结果表明:82例急性白血病(AL)患者p16基因甲基化的出现率为39.0%,其中急性髓系白血病(AML)患者为41.4%,24例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者为33.3%;初治AL患者为36.6%,而复发患者则为54.5%。82例AL患者中有6例p16基因缺失,缺失率为7.3%,在AML、ALL患者中分别为1.7%和20.8%。16例健康自愿者或非恶性血液病患者p16基因则未发生甲基化或缺失。结论:在成人急性白血病的发生发展中,p16基因甲基化比p16基因纯合缺失更具有意义;p16基因表达异常与成人急性白血病的发生发展密切相关。; 范丽萍沈建箴叶宝国林福安傅海英周华蓉沈松菲喻爱芳; 关键词：P16基因基因甲基化急性白血病

VPA和As2O3对Molt-4细胞的协同作用及可能机制被引量：2: 2008年; 本研究探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)单药或与亚砷酸(arsenie trioxide,As2O3)联用对人急性T细胞白血病细胞株Molt-4增殖活力的抑制、去甲基化作用及其可能机制。用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用,利用金氏公式观察两药联用体外抗癌的协同作用。采用半巢式甲基化特异PCR(hnMS-PCR)检测p15INK4B基因甲基化,RT-PCR方法检测p15基因、DNA甲基转移酶DNMT-1、DNMT3A、DNMT3B的表达。结果表明:VPA和As2O3均可明显抑制细胞增殖,二者联用在体外有相加作用(Q值均大于0.85),在5mmol/L VPA与10μmol/L As2O3联用时抑制率达(70.31±2.54)%。Molt-4细胞p15基因因高甲基化而失表达,经VPA和As2O3联合作用后p15基因甲基化程度明显下降,p15基因表达增强,两药联用时DNMT-1、DNMT-3A、DNMT3BmRNA的表达都有下降。结论:VPA可能通过抑制DNA甲基转移酶DNMT-1和(或)DNMT3B使p15INK4B基因去甲基化,使p15基因表达上调,恢复其活性。VPA和As2O3均可明显抑制Mol-4细胞增殖,两药合用有协同相加作用,可减少砷剂的副作用。; 叶宝国林福安沈建箴范丽萍林聪猛; 关键词：丙戊酸钠 AS2O3 MOLT-4细胞甲基转移酶 P15基因甲基化

表没食子儿茶素没食子酸诱导人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因去甲基化及转录被引量：4: 2008年; 本研究旨在探讨表没食子儿茶素没食子酯酸(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)诱导人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因去甲基化及转录激活的可能机制。以生长曲线、MTT法检测EGCG对CA46细胞生长和增殖的抑制作用;利用流式细胞仪DNA含量分析法探讨EGCG对CA46细胞周期的影响;采用巢式甲基特异性PCR法(nested-methylation specific PCR,n-MSP)及DNA克隆测序分析法检测EGCG作用前后CA46细胞p16基因甲基化状态;应用RT-PCR检测p16、DNA甲基转移酶(DNMT3A、DNMT3B)基因mRNA的表达。结果表明:与对照组相比,3组不同浓度EGCG均能明显抑制CA46细胞生长,G0/G1期细胞增加;不同浓度EGCG作用48小时后p16基因甲基化程度减弱;未处理组细胞p16基因呈微弱表达,未用药组、不同浓度EGCG(6、12、24)μg/ml处理组条带灰度值与β-actin1比值分别为(0.05±0.01)、(0.19±0.03)、(0.39±0.10)、(0.85±0.09),各处理组p16基因mRNA表达明显高于未用药组,其差异有显著意义(p<0.05);与对照组相比,EGCG作用48小时后CA46细胞甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达均下降。结论:EGCG可能通过抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B和(或)直接对p16基因去甲基化,使p16基因mRNA表达上调,恢复其活性,从而实现其对细胞周期的调控功能,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制CA46细胞的增殖。; 喻爱芳沈建箴陈志哲范丽萍林福安; 关键词：表没食子儿茶素淋巴瘤 CA46细胞

弥漫大B细胞淋巴瘤患者骨髓浸润的检查及疗效分析被引量：3: 2014年; 目的了解骨髓细胞涂片在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)骨髓浸润诊断中的作用和地位,以及化疗效果与骨髓浸润的关系。方法对60例初次确诊为DLBCL患者的骨髓细胞涂片进行分析,并对比骨髓组织活检、血象结果,并通过χ2检验单因素分析化疗效果与骨髓浸润的关系。结果 60例DLBCL患者中,4例骨髓取材欠佳,56例中有11例出现骨髓浸润,其中骨髓涂片检出7例,骨髓活检检出10例,6例涂片及活检均考虑淋巴瘤骨髓浸润,1例骨髓涂片检出,骨髓活检未检出,Kappa检验二者在诊断淋巴瘤骨髓浸润上有较好的一致性(Kappa=0.665,P=0.141),灵敏度为85.7%。11例骨髓浸润中仅2例出现白细胞减少或贫血。化疗效果与骨髓浸润相关(χ2=6.373,P<0.05)。结论化疗效果与骨髓浸润有关,淋巴瘤化疗前需重视骨髓浸润的检查和诊断。骨髓涂片细胞学检查和骨髓活检相辅相成,二者相互补充。; 周艳贞郑源海方小丽林福安; 关键词：骨髓活检骨髓浸润化疗效果

半巢氏甲基化特异性PCR在急性白血病患者p15基因甲基化检测中的应用及甲基化逆转的实验研究: 目的:旨在应用半巢氏甲基化特异性聚合酶链反应/(Hemi-nested methylation specific PCR ,Hn-MSP/)检测急性白血病患者p15基因甲基化状态,探讨p15基因甲基化或缺失与白血病发生、...; 林福安; 关键词：甲基化 P15基因 DNA甲基转移酶; 文献传递

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