- Stathmin基因毕赤酵母表达体系的构建及鉴定
- 2016年
- 目的构建Stathmin基因毕赤酵母表达体系,并对表达产物进行纯化和鉴定,为Stathmin相互作用蛋白的进一步研究提供实验基础。方法通过PCR方法从SKBR3乳腺癌细胞中扩增出人Stathmin基因片段,克隆入毕赤酵母表达载体pPIC3.5K,构建重组载体pPIC3.5K-Stathmin,转化GS115工程菌,经含基因素(G418)的酵母膏胨葡萄糖琼脂(YPD)培养基筛选出阳性克隆。用0.5%甲醇诱导表达,并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western Blotting鉴定表达产物。结果 DNA测序结果表明,所获基因片段与Stathmin基因序列一致。在含有G418 600μg/mL的YPD培养基上筛选出的pPIC3.5K-Stathmin转化子,经PCR鉴定为阳性克隆。SDS-PAGE可见约37×103处有目的条带表达,经Western Blotting鉴定,此条带为Stathmin蛋白。结论成功构建了Stathmin酵母表达载体,并在毕赤酵母中表达成功,为Stathmin相互作用蛋白研究以及生物治疗药物的制备奠定了基础。
- 杨铭林芳和婷董轲张惠中
- 关键词：基因
- MALDI-TOF-MS技术在酵母样真菌鉴定中的临床应用评价被引量：9
- 2016年
- 目的评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time Of FlightMass Spectrometry,MALDI-TOF-MS）技术对酵母样真菌鉴定的临床应用价值。方法将2015年6月-2016年6月临床检出的142株酵母样真菌标本同时采用MALDI-TOF-MS技术和传统真菌培养方法进行鉴定,记录结果并对结果进行对比分析。结果两种方法对于常见的白念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌和新生隐球菌的鉴定率很高（100%）,符合率较高（100%）;对于少见的葡萄牙念珠菌、解脂念珠菌、产朊念珠菌,两种方法的符合率较低,分别为25.00%、00.00%、00.00%。结论 MALDI-TOF-MS技术对酵母样真菌的鉴定率较高,操作简便快速,是传统真菌培养鉴定的有力补充,可将其推广应用于酵母样真菌的早期快速鉴定。
- 张霄霄汪定成戈伟邵海莲程芝苏博台锦阁杨铭张倩陈静文张惠中
- 关键词：酵母样真菌
- 食管癌患者术后切口脓液中检出溶血二氧化碳嗜纤维杆菌一例
- 2013年
- 二氧化碳嗜纤维菌属是细小梭状的革兰阴性杆菌，其与牙周疾病密切相关，也可引起其他系统感染。由该菌引起感染的病例报道国内少见，国外报道也不多。我们从唐都医院1例食管癌患者术后切口脓液中分离出1株溶血二氧化碳嗜纤维杆菌。
- 戈伟范珊红汪定成邵海连杨铭
- 关键词：革兰阴性杆菌脓液
- 全自动血培养仪器布鲁菌报阳时间及特点
- <正>目的通过探讨布鲁菌实验室培养特性,分析在BACTECTM91 20全自动血培养仪中,布鲁菌报警阳性时间,提高对布鲁菌的认识。方法对2008年10月—2011年1月某院分离的76株布鲁菌报警阳性时间进行统计分析,并将...
- 杨铭汪定成邵海连戈伟张惠中
- 文献传递
- Stathmin基因磷酸化位点突变真核表达载体构建
- 2016年
- 目的构建Stathmin基因磷酸化位点突变载体,为Stathmin磷酸化功能的进一步研究提供实验基础。方法通过设计磷酸化位点突变引物,运用聚合酶链反应分别将人Stathmin基因片段中4个丝氨酸磷酸化位点Ser16、Ser25、Ser38、Ser63突变为不能进行磷酸化的丙氨酸,插入真核表达载体pc DNA3.1,分别构建重组载体pc DNA3.1/Stathmin Ser16/A、pc DNA3.1/Stathmin Ser25/A、pc DNA3.1/Stathmin Ser38/A、pc DNA3.1/Stathmin Ser63/A,并进行基因测序鉴定。结果基因测序鉴定重组载体结果表明,分别将Stathmin基因中Ser16、Ser25、Ser38、Ser63突变为丙氨酸。结论成功构建了Stathmin磷酸化位点突变载体,为进一步研究Stathmin磷酸化的作用机制和功能奠定了基础。
- 杨铭林芳和婷王琳汪定成董轲张惠中
- 关键词：STATHMIN磷酸化点突变
- 增强型Trop2-CD40L病毒样颗粒疫苗的制备、纯化及活性研究被引量：1
- 2016年
- 目的 获得嵌合免疫增强佐剂CD40配体（CD40L）的Trop2-CD40L病毒样颗粒（VLPs）疫苗,为后续探究VLPs在肿瘤治疗中的免疫原性及免疫保护作用奠定基础。方法 通过重叠延伸PCR方法扩增以Trop2为靶点、嵌合免疫佐剂CD40L的Trop2-CD40L融合基因,构建杆状病毒表达载体pFastbacTM /Trop2-CD40L,并转化大肠埃希菌E.coli DH10bac,提取杆粒并经PCR鉴定成功命名为Trop2-CD40L Bacmid,后者转染Tn5昆虫细胞获得重组病毒Trop2-CD40L rBV,与Gag rBV共感染昆虫细胞制备重组病毒样颗粒,透析浓缩后蔗糖密度梯度离心纯化,Western Blot鉴定VLPs目的蛋白表达、电镜观察所制备VLPs形态,Cytokine ELISA方法检测Trop2-CD40L VLPs体外生物学活性。结果 成功扩增了Trop2-CD40L融合基因,通过杆状病毒表达系统、借助SIV Gag衣壳蛋白装配特点成功制备了增强型Trop2-CD40L 病毒样颗粒,与Trop2 VLPs比较具有更好的生物学活性,差异具有统计学意义（t=7.266,,P〈0.05）。结论 制备出具有一定生物学活性的增强型Trop2-CD40L病毒样颗粒,证实了CD40L作为免疫佐剂使用有免疫增强效应。
- 王琳王希杨铭李岩董轲张惠中
- 关键词：CD40L
- 抗菌药物对肠球菌属细菌体外抗菌活性被引量：4
- 2015年
- 目的了解抗菌药物对某院临床分离肠球菌属细菌的体外抗菌活性。方法对2013年6月—2014年7月该院临床各科室送检标本分离的188株肠球菌属细菌进行细菌鉴定及药物敏感试验。结果 188株肠球菌属细菌其中屎肠球菌119株、粪肠球菌60株、鸟肠球菌9株,主要分布在尿和血标本,分别占34.57%和19.15%。未检出对达托霉素及利奈唑胺耐药的肠球菌属细菌;屎肠球菌对万古霉素的耐药率为1.68%,对青霉素、氨苄西林、高浓度庆大霉素、红霉素、左氧氟沙星的耐药率均>70%;除四环素外,粪肠球对其他抗菌药物的耐药率均低于屎肠球菌,粪肠球对青霉素、氨苄西林耐药率较低,分别为16.67%,13.33%。结论达托霉素对该院肠球菌属细菌具有良好的抗菌效果。
- 戈伟张霄霄汪定成邵海连李颖杨铭程芝苏博范明乐范珊红
- 关键词：肠球菌属达托霉素抗菌药物
- 多重耐药鲍曼不动杆菌体外抗菌活性分析
- 目的 了解多重耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性.方法 对某院201 3年1-5月临床各科室送检标本分离的224株多重耐药鲍曼不动杆菌进行鉴定及药物敏感试验.结果 224株多重耐药鲍曼不动杆菌主要分布在呼吸内科(21.43％...
- 邵海连汪定成郭静戈伟杨铭程芝苏博范明乐张霄霄张惠中
- Stathmin表达水平与乳腺癌细胞侵袭能力相关性研究被引量：1
- 2016年
- 目的：探讨乳腺癌细胞 MDA-MB-231和 MCF-7中 Stathmin基因表达水平与细胞生长、黏附、侵袭等生物学行为之间的关系，为进一步研究乳腺癌转移机制奠定实验基础。方法应用 RT-PCR和 Western Blot方法检测 MDA-MB-231和 MCF-7细胞中 Stathmin基因的表达水平，同时利用细胞增殖试验、细胞黏附试验和细胞侵袭试验检测 MDA-MB-231和MCF-7细胞的生长、黏附、侵袭能力，分析Stathmin表达与细胞的生长、黏附、侵袭能力之间的关系。结果 RT-PCR和Western Blot检测结果显示，Stathmin基因在 MDA-MB-231和 MCF-7细胞中表达均高于正常对照细胞（F＝10.173，P＜0.05），且 MDA-MB-231细胞中的表达水平明显高于 MCF-7细胞中的表达水平（t＝4.562，P＜0.05）。而 MDA-MB-231细胞在生长、黏附和侵袭能力方面均强于 MCF-7细胞（P＜0.05）。结论 Stathmin表达水平高的乳腺癌细胞相应的生长、黏附、侵袭能力较强，Stathmin表达水平与细胞侵袭能力密切相关。
- 杨铭林芳和婷王琳董轲张惠中
- 关键词：STATHMIN乳腺癌侵袭性
- 多重耐药鲍曼不动杆菌体外抗菌活性分析被引量：27
- 2014年
- 目的了解抗菌药物对多重耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性。方法对某院2013年1—5月临床各科室送检标本分离的224株多重耐药鲍曼不动杆菌进行鉴定及药敏试验。结果 224株多重耐药鲍曼不动杆菌主要分布在呼吸内科(21.43%),其次是脑外科(16.07%)、脑外重症监护室(ICU,12.50%)和神经内科(12.50%)等。标本来源以痰液(57.14%)为主,其次是气管插管(16.52%)和引流液(9.82%)等。多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素敏感,对米诺环素耐药率为7.14%,对其余8种抗菌药物的耐药率均≥75%,其中头孢替坦耐药率高达98.21%。结论替加环素对该院多重耐药鲍曼不动杆菌具有良好的抗菌效果。
- 邵海连汪定成郭静戈伟杨铭程芝苏博范明乐张霄霄张惠中
- 关键词：多重耐药鲍曼不动杆菌抗菌药物医院感染
