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杨月峰

作品数：27 被引量：29H指数：3
供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 22篇期刊文章
  • 4篇会议论文
  • 1篇学位论文

领域

  • 24篇医药卫生
  • 4篇生物学

主题

  • 17篇细胞
  • 12篇腺病
  • 12篇腺病毒
  • 10篇基因
  • 6篇前列腺
  • 6篇重组腺病毒
  • 6篇腺癌
  • 6篇腺病毒科
  • 5篇前列腺癌
  • 4篇凋亡
  • 4篇增殖
  • 4篇肿瘤
  • 3篇蛋白
  • 3篇细胞增殖
  • 3篇淋巴
  • 3篇免疫
  • 3篇基因治疗
  • 3篇病毒载体
  • 2篇信号
  • 2篇血细胞

机构

  • 27篇军事医学科学...
  • 3篇安徽医科大学
  • 3篇中国人民解放...
  • 2篇兰州军区疾病...
  • 2篇沈阳市第四人...
  • 1篇第四军医大学
  • 1篇空军总医院
  • 1篇兰州大学第二...
  • 1篇兰州理工大学
  • 1篇青海省人民医...
  • 1篇沈阳军区总医...
  • 1篇兰州军区兰州...
  • 1篇中国人民解放...
  • 1篇青海大学
  • 1篇中国疾病预防...
  • 1篇第四军医大学...
  • 1篇解放军第30...
  • 1篇临朐县人民医...

作者

  • 27篇杨月峰
  • 24篇王立生
  • 21篇王华
  • 15篇肖凤君
  • 7篇张群伟
  • 7篇李庆芳
  • 6篇严俊
  • 5篇吴祖泽
  • 5篇孙慧燕
  • 4篇李泽良
  • 3篇王荣亮
  • 3篇鲁茁壮
  • 2篇盖鲁粤
  • 2篇薛淑雅
  • 2篇刘银霞
  • 2篇叶平
  • 2篇李晓姝
  • 2篇高瞻
  • 2篇郭子宽
  • 2篇边素艳

传媒

  • 6篇中国医药生物...
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  • 1篇现代生物医学...
  • 1篇组织工程与重...
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  • 1篇中国科学：生...
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  • 1篇第13届全国...

年份

  • 1篇2017
  • 2篇2016
  • 2篇2015
  • 5篇2014
  • 2篇2012
  • 6篇2011
  • 1篇2010
  • 7篇2009
  • 1篇2008
共 27 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
应用生物发光成像技术示踪植入的骨髓间充质干细胞被引量：3
2009年
以间充质干细胞(MSC)为基础的细胞治疗已进入临床试验阶段,用于多种组织修复,而移植细胞体内存活是影响疗效的重要因素。为了体内示踪MSC,构建了萤火虫荧光素酶基因(fluc)逆转录病毒表达载体pL(fluc)SN,并筛选出稳定表达fluc的GPE+86细胞克隆。将逆转录病毒上清转染C57小鼠来源的MSC,经G418筛选后得到稳定表达fluc的MSC。将2×106个标记好的细胞注射正常骨骼肌,应用生物发光技术检测移植后不同时间细胞的存活情况。结果表明,随着时间的延长,细胞存活数目逐渐减少;移植后1天细胞死亡率高达(43.2±11.7)%,3天后细胞存活(8.6±2.5)%,6天后仅为(5.4±3.1)%,10天时未检测到荧光信号。结论:生物发光成像技术可用于移植的MSC体内示踪,但是即使将MSC植入正常的骨骼肌组织,大部分注入的MSC也将在短期内死亡。
边素艳盖鲁粤叶平杨月峰王华郭子宽王立生
关键词：骨髓间充质干细胞细胞标记细胞移植
KSP抑制剂SB743921对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响及其机制研究
目的：纺锤体蛋白(KSP)是细胞周期进程中必不可少的线粒体蛋白,SB743921是第二代嘧啶酮类纺锤体蛋白化学抑制剂,是一种选择性纺锤体蛋白抑制剂。虽然Ⅰ期临床研究显示SB743921在进展期实体瘤和难治复发的淋巴瘤中具...
肖凤君朱荔王华杨月峰王立生
关键词：凋亡乳腺癌KSP
人SPRED2基因重组腺病毒载体的制备及其对K562细胞ERK通路的影响被引量：1
2012年
目的:构建携带SPRED2的质粒载体与重组腺病毒载体,并观察其在K562细胞的表达及对ERK信号通路的作用,为Spred2在造血细胞中的作用的研究奠定基础。方法:以HepG2细胞cDNA为模板,RT-PCR克隆SPRED2全长CDS序列,并亚克隆到pCDNA3.0和pshuttle-CMV质粒载体,构建携带SPRED2的真核表达载体pCDNA3.0-Spred2与穿梭载体pshuttle-CMV-Spred2;将线性化pshuttle-CMV-Spred2与腺病毒骨架质粒Adf11p在感受态细胞BJ5183中进行同源重组,产生重组质粒Adf11p-Spred2;后者经线性化后转染至HEK293细胞进行病毒包装;在HEK293细胞扩增病毒颗粒,以CsCl密度梯度离心法进行纯化,TCID50法测定病毒滴度;将病毒颗粒以100MOI感染K562细胞,Western blot检测Spred2过表达情况及Spred2对细胞ERK的影响。结果:经酶切、DNA测序、Western blot检测等方法鉴定,证明pCDNA3.0-Spred2与Adf11p-Spred2携带Spred2序列正确,能够在HEK293细胞、K562细胞正确表达,Spred2过表达能够显著抑制K562细胞ERK活性。结论:成功构建对K562细胞有高感染效率的SPRED2重组腺病毒载体,且Spred2对K562细胞ERK信号通路有显著抑制作用。
刘小云罗芳王华杨月峰张群伟王立生
关键词：重组腺病毒载体ERK通路K562细胞
携带免疫基因的前列腺癌特异性溶瘤腺病毒制备及功能验证
2014年
目的制备前列腺癌特异性免疫溶瘤双功能腺病毒Ad-PL-PPT-E1A,评价其体外溶瘤和免疫激活功能。方法以LNCaP细胞和Jurkat细胞的cDNA为模板,采用普通PCR和巢式PCR分别扩增获得前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)基因、CD40L-N基因和CD40L-C基因;并采用重叠PCR方法将PSA、Linker、CD40L-N和CD40L-C基因依次连接并扩增获得融合蛋白基因PSA-IZ-CD40L(PL)。采用以Adeasy系统为基础的溶瘤腺病毒构建体系,构建并制备携带PL的溶瘤重组腺病毒Ad-PL-PPT-E1A。以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的溶瘤腺病毒Ad-PL-PPT-E1A感染PC3M细胞后不同时间点,流式细胞术检测细胞凋亡情况;50 MOI的Ad-PL-PPTE1A感染PC3M细胞,于48 h收集其裂解液,并将其作用于正常人外周血单个核细胞,CCK8检测细胞增殖能力。结果 PCR成功扩增并连接获得融合蛋白基因PL,构建并制备了携带PL基因的溶瘤腺病毒Ad-PL-PPT-E1A。RTPCR和Western印迹检测结果显示,Ad-PL-PPT-E1A可在PC3M细胞中高效表达E1A和PL蛋白。将Ad-PL-PPTE1A感染PC3M细胞后,可见明显的细胞病变;同时,流式细胞检测结果显示,当感染滴度达到200 MOI时,48 h的凋亡率达到70.67%±2.98%。CCK8结果显示,Ad-PL-PPT-E1A感染后,可恢复PC3M细胞裂解液对人外周血单个核细胞的抑制作用。结论成功制备和鉴定了前列腺癌特异性免疫溶瘤双功能腺病毒Ad-PL-PPT-E1A,并在体外证实了其具有溶瘤和免疫的双重功能。
薛淑雅杨月峰王华肖凤君孙慧燕张群伟王秀冬王立生
关键词：前列腺癌溶瘤腺病毒免疫基因
腺病毒-甲病毒杂合载体的构建
2010年
目的将腺病毒Ad5/F11p造血细胞靶向和甲病毒复制子载体目的基因高效转录的特点相结合,构建腺病毒-甲病毒杂合载体,以提高目的基因在造血细胞的表达水平。方法基本实验过程包括骨架质粒构建,穿梭质粒构建,同源重组产生杂合病毒基因组,杂合病毒在包装细胞的拯救和扩增,以及杂合病毒对造血细胞基因转移效率的初步评价。具体步骤如下:利用重叠延伸PCR技术将pFiber5/11p质粒上Ad5的E4区部分删除产生骨架质粒pAdEasy/F11pDE4orf3。在pShuttle质粒的多克隆位点处分别插入造血细胞特异性启动子(CD11a promoter,CD11Ap)、甲病毒载体元件(nsP)、目的基因(GFP)、PolyA加尾信号构建杂合穿梭质粒pSh-SFV-GFP。骨架质粒与穿梭质粒在大肠杆菌BJ5183菌株中同源重组产生杂合病毒质粒pAd5/F11p-SFV-GFP,经与辅助病毒质粒Ad5/f11p-HV共转染293细胞后拯救出杂合病毒Ad5/F11p-SFV-GFP,经CsCl密度梯度离心法纯化,得到的病毒滴度为3×1010pfu/ml。与对照病毒Ad5-GFP相同感染复数(100MOI)分别感染U937细胞,利用流式细胞术检测GFP+细胞比例。结果pAdEasy-1/F11p-E4orf3和pSh-SFV-GFP经相应酶切和测序鉴定,与预期设计一致;CsCl密度梯度离心纯化得到杂合病毒;100MOI Ad5/F11p-SFV-GFP感染U937细胞2 d后,GFP+细胞比例为55.79%,而对照病毒Ad5-GFP的感染效率为2.42%。结论成功构建了腺病毒-甲病毒杂合载体,为进一步评价其对造血细胞的基因转移效率奠定了基础。
李泽良王华杨月峰肖凤君鲁茁壮王立生
关键词：腺病毒科甲病毒属复制子基因转移技术
Ad-HGF基因修饰的胎盘间充质干细胞治疗兔肢体缺血的实验研究被引量：1
2016年
目的研究重组腺病毒介导肝细胞生长因子(adenoviral vector mediated human hepatocyte growth factor,AdHGF)修饰的胎盘源间充质干细胞(placenta-derived mesenchymal stem cells,PMSC)在兔肢体缺血模型中促新生血管生成的作用。方法无菌取足月产妇胎盘胎儿面中心区域胎盘组织,胶原酶消化法分离干细胞,体外培养传代,感染Ad-HGF 48 h后收集细胞用于治疗兔肢体缺血实验。左侧治疗组后肢缺血肌肉组织内多点注射总细胞数5×106/ml Ad-HGF修饰的PMSC,右侧对照组后肢缺血肌肉组织内注射生理盐水。结果治疗后第14天腹主动脉穿刺行数字减影血管造影(digital subtraction angiography,DSA)检查,可见左侧肢体缺血治疗后微血管生成数明显多于未治疗右侧肢体,血管形成能力明显增强。苏木精伊红染色法(HE)后置光镜下观察显示,治疗组毛细血管密度明显大于未治疗组(P<0.05)。实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,q PCR)检测后肢肌肉组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)、HGF的表达明显升高(P<0.05)。结论经Ad-HGF基因修饰的PMSC能明显促进血管新生,加快局部缺血组织血流循环的重建,是治疗肢体慢性缺血的有效手段。
肖凤君黄晓东王少霞王华杨月峰李沛雨王立生
关键词：间充质干细胞AD-HGF肢体缺血成纤维细胞生长因子肝细胞生长因子
1-磷酸鞘氨醇对淋巴管内皮细胞生物学特性调节作用的研究
2009年
目的:研究1-磷酸鞘氨醇(S1P)对淋巴管内皮细胞(HDLEC)的生物学特性的调节作用及其调节机制。方法:应用RT-PCR方法检测HDLEC是否表达SPK及S1P受体,应用MTT法、细胞扩散盒技术检测S1P对HDLEC增殖、迁移特性的影响,并用Western印迹方法检测S1P对HDLEC的MAPK信号通路的调节。结果:HDLEC表达SPK及S1P受体,包括S1P1,S1P2,S1P3和S1P4。外源性S1P对HDLEC没有促增殖作用,但可促进其迁移,并可通过S1P1和S1P2诱导MAPK快速磷酸化。结论:初步研究结果提示,S1P可以影响淋巴管内皮细胞的生物学特性,有可能成为调控淋巴管生成及其功能的新靶点。
肖秀斌王华李庆芳严俊杨月峰徐尹张伟京王立生
关键词：1-磷酸鞘氨醇淋巴管内皮细胞细胞增殖迁移
低氧条件下白藜芦醇对HepG2细胞增殖及自噬的调节作用及初步机制被引量：4
2011年
白藜芦醇(resveratrol)是天然存在于葡萄、红酒及花生等中的一种多酚类化合物,具有抗癌、抗氧化等作用.目前针对resveratrol抗癌作用的研究大多侧重于常氧状态,而对于更接近体内肿瘤生长环境即低氧状态的研究相对匮乏.本文以肝癌细胞HepG2为模型,探讨了低氧(1%O2)条件下resveratrol抑癌的相关功能和机制.结果表明,在低氧状态下resveratrol不仅抑制HepG2细胞的活性,而且也促进了低氧诱导的自噬保护机制;进一步研究发现,去乙酰化酶Sirt1和鞘氨醇激酶SPK1也参与上述过程.本文初步揭示了低氧状态下癌细胞对resveratrol敏感性低的可能机制,更加明确resveratrol在实体瘤中的抗癌作用,并为resveratrol的药物研发提供了借鉴.
严俊李晓姝孙慧燕王华肖凤君李庆芳杨月峰王立生吴祖泽
关键词：白藜芦醇自噬去乙酰化酶鞘氨醇激酶
重组质粒pUDK-PmL-IR-GM的体内免疫激活作用
2011年
目的构建携带融合蛋白基因PSA-IZ-mCD40L(PmL)和GM-CSF基因的重组质粒载体pUDK-PmL-IR-GM,并评价其小鼠体内免疫激活作用。方法采用类似基因合成的方法将前列腺特异性抗原基因、异亮氨酸拉链基因和鼠源性CD40配体基因连接并扩增获得融合蛋白基因PmL。将GM-CSF、PmL和核糖体内部进入位点基因依次克隆到pUDK载体,获得重组质粒pUDK-PmL-IR-GM。分别于第1、11、21和35天免疫小鼠,末次免疫后10d分离小鼠脾脏T淋巴细胞。采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群;MTT法检测前列腺特异性抗原刺激下的T淋巴细胞增殖效应;非放射性细胞杀伤检测试剂盒检测对LNCaP细胞的特异性杀伤作用。结果 PCR成功扩增GM-CSF基因和融合蛋白基因PmL,并将其克隆至pUDK载体上,以核糖体内部进入位点连接,得到重组质粒pUDK-PmL-IR-GM。pUDK-PmL-IR-GM免疫小鼠后,T淋巴细胞性能检测显示:CD4+T淋巴细胞与CD8+T淋巴细胞的比值较对照组明显升高(P<0.05);前列腺特异性抗原刺激后,其增殖能力明显增强(与阴性对照相比,P<0.01),且明显高于其他免疫组(P<0.01);其对LNCaP细胞杀伤效率大于25%,且明显强于pUDK免疫组(P<0.05)。结论成功构建重组质粒载体pUDK-PmL-IR-GM,并证实其能在一定程度激活小鼠T淋巴细胞的特异性免疫反应。
杨月峰王华肖凤君徐洁李庆芳严俊王立生
关键词：前列腺特异抗原CD40配体T淋巴细胞亚群
靶向型辅助腺病毒的构建及其功能研究被引量：1
2014年
目的构建一种新型辅助腺病毒,并用于靶向型第三代腺病毒载体的制备,提高其对造血细胞的感染效率。方法采用重叠PCR的方法合成含有不完全包装信号序列A1-A4和loxP序列的DNA片段SynES,替换穿梭质粒pShuttle中原有的包装信号序列,得到穿梭质粒pShuttle-SynES;将所得穿梭质粒与骨架质粒Ad5/F11p在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得重组腺病毒质粒载体pAd5/F11p-HV,将其转染293细胞包装重组腺病毒Ad5/F11p-HV。参照第三代腺病毒包装策略,利用Ad5/F11p-HV包装获得携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的第三代腺病毒HD-Ad5/F11p-GFP;将其以不同的感染强度感染人白血病细胞系K562、U937、Jurkat和人脐带血CD34+细胞后,采用荧光显微镜和流式细胞术检测GFP的表达。结果采用DAN片段SynES替换穿梭质粒pShuttle上的包装信号,获得新的穿梭质粒pShuttle-SynES;进一步构建获得重组腺病毒质粒pAd5/F11p-HV,并制备了辅助腺病毒Ad5/F11p-HV。采用该辅助腺病毒包装pC4HSU-GFP,获得了第三代腺病毒HD-Ad5/F11p-GFP;CsCl密度梯度离心分离HD-Ad5/F11p-GFP和Ad5/F11p-HV,获得了高质量的HD-Ad5/F11p-GFP。与对照病毒HD-H14-GFP相比,HD-Ad5/F11p-GFP可明显提高对人白血病细胞U937、Jurkat和人脐带来源CD34+细胞的感染效率。结论设计并构建了一种靶向性辅助腺病毒,并以此为基础成功制备了对造血细胞高效感染的第三代重组腺病毒。
杨月峰李泽良鲁茁壮王华肖凤君张群伟孙慧燕王立生
关键词：辅助病毒白血病
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