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曾美珍: 作品数：11 被引量：24H指数：3; 供职机构：中山大学中山眼科中心更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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复方血栓通对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用: 陈晓云李建桥肖伟朱晓波李涛曾美珍罗燕唐仕波

SpltMNPV p49基因的表达及其多克隆抗体的制备: P49是最新发现的杆状病毒凋亡抑制基因,目前只在两种杆状病毒中鉴定出它的存在,分别是海灰翅夜蛾核多角体病毒(Spodoptera littoralis multicapsid nucleopolyhedrovirus, ...; 曾美珍; 关键词：细胞凋亡杆状病毒多克隆抗体基因表达; 文献传递

斜纹夜蛾核多角体病毒p49基因在大肠杆菌中的表达及其在昆虫细胞中的表达时相分析被引量：2: 2004年; 利用PCR方法从斜纹夜蛾核多角体病毒 (SpltMNPV)基因组中扩增获得了细胞凋亡抑制基因p4 9的完整ORF并将其克隆于pMD1 8 T载体 ,其序列分析结果与文献报道一致。将基因重组于硫氧还蛋白融合表达载体pThioHisC ,在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中获得了稳定表达 ,表达的P4 9融合蛋白占菌体总蛋白 30 %左右 ,主要以包涵体形式存在。分离纯化重组表达的SpltMNPVP4 9蛋白作为抗原 ,免疫家兔制备得到效价高于 1∶1 0 0 0 0的抗重组P4 9蛋白多克隆抗体。应用制备的抗体对受SpltMNPV感染的Sl细胞中P4 9蛋白的表达时相进行分析 ,结果显示P4 9蛋白在细胞感染后 3h内便可检测到。; 曾美珍王瑾雯李镇龙綮新王珣章; 关键词：SPLTMNPV 凋亡抑制多克隆抗体

PCR-SSCP在检测Leber遗传性视神经病变线粒体DNA突变的应用被引量：2: 2005年; 目的探讨PCR-SSCP技术检测Leber遗传性视神经病变(LHON)线粒体DNA(mtDNA)3个原发突变的最佳分析条件。方法应用PCR-SSCP技术检测LHONmtDNA,对主要影响SSCP分辨率的聚丙酰胺凝胶的浓度和组成优化分析,并与突变特异性引物PCR(MSP)、限制性片段长度多态性(FRLP)及测序结果相印证。结果80g/L交联度为66:1的非变性聚丙酰胺凝胶能同时检出LHONmtDNA的三个原发致病突变,与MSP、FRLP及DNA测序的结果一致。结论该分析条件简便、快速,能有效地检测LHONmtDNA突变。; 贾小云郭向明黎仕强张清炯肖学珊郭莉曾美珍; 关键词：LEBER遗传性视神经病变 PCR-SSCP 线粒体DNA突变 MTDNA突变 LHON 同时检出

Leber遗传性视神经病变mtDNA新原发突变位点研究被引量：2: 2006年; 目的分析中国Leber遗传性视神经病变(LHON)患者是否存在新的原发突变位点。方法分别用聚合酶链反应(PCR)扩增、异源双链-单链构像多态性聚合酶链反应(HA-SSCP-PCR)、限制性片段长度多态性(RFLP)和DNA测序等方法,对260例已确诊不携带mtDNA11778A、3460A、14484C3种原发突变的可疑LHON患者进行新的原发突变位点15257、14482、14498、14568、14596、14495及14459的筛查,分析中国人种的原发突变频谱。结果在260例可疑LHON患者和100例正常人中发现8种线粒体DNA多态位点。其中T14488C、A14518G、A14617G是尚未报道过的多态位点(http://www.mitomap.org/)。但未发现15257、14482、14498、14568、14596、14495及14459等位点的突变。结论在中国人中初步排除15257A位点是原发突变的可能性。由于存在种族的差异,ND6基因中的14452～14601碱基对可能不是中国LHON患者的突变热区,中国患者可能存在其他的突变热区。; 王燕郭向明贾小云黎仕强曾美珍郭莉; 关键词：突变

改良的人视网膜血管内皮细胞的培养与鉴定方法被引量：6: 2013年; 背景优化人视网膜血管内皮细胞的培养和鉴定方法在视网膜血管性疾病的研究中有重要作用，以往研究者已成功培养了人视网膜血管内皮细胞，但进一步简化其方法并达到获取量大而纯的细胞是基础研究和临床研究的基础。目的探索一种更为简便快速、收获量大且纯度高的视网膜血管内皮细胞的改良培养方法，并对目标细胞的抗原表达特点进行分析，比较眼科新生血管性疾病研究中常用的两种血管内皮细胞的标志性蛋白表达情况。方法利用正常人角膜移植供体眼球分离视网膜组织，采用质量分数2％胰蛋白酶和质量分数0．133％胶原酶I用二步消化法获取人视网膜血管内皮细胞，在传统培养方法中采用含质量分数10％胎牛血清的人血管内皮细胞培养液的基础上，添加内皮细胞生长因子一B（13-ECGF）和肝素钠，对分离的细胞进行体外培养，培养皿用纤维黏连蛋白（FN）包被以促进培养细胞的贴壁。观察收获的目标细胞的形态特征，采用活体显微镜进行形态学观察、常规组织病理学观察目标细胞的生长状态，免疫组织化学法检测Ⅷ因子、CD31、CD34在细胞中的表达以鉴定目标细胞。结果应用胰蛋白酶、胶原酶二步消化法可成功获取人视网膜血管内皮细胞，原代培养的细胞72h贴壁，第9～10天细胞达到融合状态，呈铺路石样。常规组织学观察显示，细胞核呈鲜亮蓝色，细胞质呈淡红色。培养的细胞对Ⅷ因子、CD31、CD34相关抗原表达呈阳性反应。结果显示培养的血管内皮细胞均有CD31、CD34同时表达，但其阳性染色程度低于Ⅷ因子相关抗原阳性反应，人脐静脉血管内皮细胞（UVECs）与人血管内皮细胞相同。结论在胰蛋白酶、胶原蛋白酶消化法的基础上用含10％优质胎牛血清的人内皮细胞培养基中添加生长因子和肝素钠，并用FN包被培养皿进行体外培�; 毛羽翔林少芬曾美珍田景毅唐仕波; 关键词：视网膜血管内皮细胞细胞培养免疫组织化学细胞鉴定

兔泪腺内干细胞的体外分离及鉴定: 2014年; 【目的】从正常兔泪腺组织及泪腺上皮细胞中分离及培养干细胞并鉴定。【方法】取4周龄左右的新西兰大白兔(0.5～1.0 kg),麻醉后取双眼主泪腺组织,右眼泪腺用于石蜡切片并行免疫组织化学检查,左眼泪腺予酶消化法分离培养并进一步纯化泪腺上皮细胞。首先,免疫组化检测兔泪腺组织切片中的ATP-binding cassette sub-family G member 2(ABCG2),巢蛋白(nestin),Tumor protein 63(P63),α-平滑肌肌动蛋白(SMA),波形蛋白(vimentin)等干细胞的标志物表达阳性的部位。其次,泪腺上皮细胞先以Peter Complete Medium(PCM)培养基培养,待出现梭形细胞后,更换Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)培养基以常规分离培养干细胞。分离出的细胞取第三代用于免疫荧光检测ABCG2,nestin,P63,α-SMA,vimentin等干细胞的标志物,同时进行成脂,成骨诱导分化。【结果】兔泪腺组织免疫组织化学检查存在ABCG2,nestin,P63,α-SMA,vimentin阳性的细胞,成功分离该细胞后,该细胞可表达ABCG2,nestin,P63,α-SMA,vimentin干细胞的标志,并可成功诱导其分化为脂肪细胞及骨细胞。【结论】兔泪腺组织中存在具有干细胞特征的细胞并能诱导分化,该细胞有望成为泪腺自我修复及重建的种子细胞,成为干眼临床治疗的新手段。; 李丽丽王泳刘良平曾美珍钟兴武; 关键词：泪腺干细胞干眼

紧密连接蛋白Claudin-2在新生视网膜血管的表达变化和意义: 罗燕肖伟李建桥陈晓云曾美珍李涛唐仕波

靶向人白细胞源性精氨酸氨肽酶基因shRNA重组腺病毒的构建: 2012年; 目的:构建靶向人白细胞源性精氨酸氨肽酶(LRAP)基因的shRNA重组腺病毒,有效抑制LRAP基因在人视网膜血管内皮细胞中的表达。方法:设计并合成3对靶向人LRAP基因shRNA的单链寡核苷酸,退火后克隆至腺病毒穿梭载体pRNAT-H1.1/Adeno得到3个重组穿梭质粒。将重组穿梭质粒和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183-AD-1中进行同源重组形成腺病毒表达质粒,并在293a细胞中包装形成重组腺病毒颗粒。重组腺病毒经扩增和滴度测定后感染原代培养的人视网膜血管内皮细胞,应用荧光实时定量PCR测定LRAP mRNA的相对表达量,筛选得到沉默效率最高的LRAP shRNA重组腺病毒,并应用Western blot法验证经RNA干扰后视网膜血管内皮细胞中LRAP的蛋白表达水平。结果:PCR、酶切和DNA测序证实LRAP shR-NA重组穿梭质粒和表达质粒的插入序列正确。收获病毒后的PCR证实重组腺病毒颗粒包装成功。实时荧光定量PCR筛选得到具有最大沉默效率的重组腺病毒,其沉默效率达到约79%。Western blot法证实经RNA干扰后,人视网膜血管内皮细胞中的LRAP蛋白水平显著降低。结论:成功构建了靶向人LRAP基因的shRNA重组腺病毒,可有效抑制人视网膜血管内皮细胞中LRAP基因的表达。; 曾美珍罗燕林少芬陈晓云田景毅唐仕波; 关键词：SHRNA 重组腺病毒视网膜血管内皮细胞

飞秒激光辅助猴眼角膜基质透镜移植观察被引量：5: 2015年; 【目的】评估飞秒激光辅助猴眼角膜基质透镜移植术后透镜生物相容性,观察猴眼表参数及泪液因子表达的变化。【方法】3只健康青年恒河猴,麻醉后行双眼全飞秒激光角膜基质透镜取出术,左右眼分别为一组,右眼植入同种异体角膜基质透镜,左眼植入自体右眼取出的角膜基质透镜。术后1周、1月、3月、5月、6月观察眼表炎症反应、中央角膜厚度、屈光状态及角膜地形图变化,同时对术前、术后1周、1月、3月多个时间点猴眼泪液进行采集并进行多因子检测。【结果】术后两组透镜均透明,未见排斥反应,中央角膜厚度及屈光状态在术后6月趋于稳定,各时间点差异无统计学意义,角膜地形图陡K和平K值比较差异无统计学意义(P>0.05),泪液因子检测两组间多个时间点比较均无统计学意义(P>0.05)。【结论】同种异体角膜基质透镜植入角膜基质袋内安全有效,可预测性好,同种异体及自体角膜基质透镜植入猴眼角膜基质袋无明显差别。; 刘良平王泳何淼李赛群曾美珍钟兴武; 关键词：飞秒激光同种异体移植

曾美珍

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