施敏敏
- 作品数：62 被引量：124H指数：6
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程天文地球更多>>
- 急性缺血缺氧诱导肝癌细胞自噬及其相关机制被引量：4
- 2012年
- 目的:研究急性缺血/缺氧时肝癌细胞HepG2增殖率及自噬的变化,探讨自噬的作用及机制。方法 :以Western印迹法检测缺氧诱导因子-1(hypoxia induced factor-1,HIF-1)表达并确定体外模拟模型的可靠性;吖啶橙染色后采用荧光显微镜定性观察自噬;以自噬特异性蛋白LC3及P62(P62/SQSTM1)信号蛋白的变化表明自噬的诱导和可能的调控机制;以CCK8检测3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬前后急性缺血/缺氧下HepG2细胞的增殖率变化。结果:急性缺血/缺氧2 h后,HepG2细胞显著表达HIF-1α蛋白,表明体外急性缺血/缺氧模型的可靠性。急性缺血/缺氧可快速诱导肝癌细胞HepG2产生自噬,继而出现HepG2细胞显著增殖活跃;3-MA抑制自噬后,可特异性抑制急性缺血/缺氧所诱导的HepG2细胞增殖;急性缺血/缺氧条件下HepG2细胞P62信号蛋白表达显著下调,自噬抑制后逐渐恢复正常表达水平。结论:自噬在肝癌体外急性缺血/缺氧过程中对肿瘤起到保护作用,其机制可能与P62蛋白的清除有关;抑制自噬可显著降低肝癌细胞增殖率。自噬可能成为肝癌治疗的新靶点。
- 杜海磊佟辉陈聆施敏敏刘卓然李军匡洁杨卫平邱伟华
- 关键词：肝细胞肝癌自噬缺血缺氧
- 尾静脉注射预处理对小鼠肝脏热缺血-再灌注损伤的保护作用
- 2013年
- 目的观察小鼠快速大容量尾静脉注射预处理对肝脏热缺血-再灌注损伤的影响。方法将60只雄性BALB／c小鼠随机分为4组：（1）假手术组；（2）热缺血-再灌注组；（3）快速尾静脉注射＋热缺血-再灌注组：术前72h快速尾静脉（5—7s）注射生理盐水2．5ml；（4）常规尾静脉注射＋热缺血-再灌注组：术前72h常规（〉30s）尾静脉注射生理盐水2．5ml。肝脏热缺血-再灌注模型采用肝门阻断45min，再灌注6h。再灌注后，取小鼠外周血及肝组织，检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平、肝组织丙二醛（MDA）水平变化，并观察肝组织病理表现。结果快速尾静脉注射组血清ALT、AST水平及肝组织MDA水平分别为（641．60±225．00）U／L、（1180．80±212．54）U／L、（11．00±1．06）mmol／L，较常规尾静脉注射组[（1716．20±283．50）U／L、（1994．60±303．80）U／L、（17．22±1．22）mmol／L]和对照组[（1661．20±306．38）U／L、（2046．60±719．21）U／L、（17．20±2．09）mmol／L]显著降低（P〈0．05），病理学亦显示快速尾静脉注射组肝细胞变性坏死、炎性细胞浸润较常规尾静脉注射组和对照组显著减轻（P〈0．01）。结论快速大容量尾静脉注射预处理可以显著减轻小鼠肝脏热缺血一再灌注损伤。
- 何美美闵得金施敏敏姜松耀李建芳陈皓陈尔真
- 关键词：尾静脉注射肝脏热缺血再灌注损伤预处理
- 雷帕霉素抑制门静脉高压症大鼠肠系膜血管新生
- 2016年
- 目的:研究雷帕霉素对门静脉高压症大鼠肠系膜血管新生的抑制作用,并探讨其机制。方法 :采用部分静脉结扎制备门静脉高压症模型。将雄性SD大鼠随机分为假手术对照组、假手术干预组、手术对照组和手术干预组。术后1周起,假手术干预组和手术干预组给予2 mg/(kg·d)雷帕霉素腹腔注射,持续2周,而假手术对照组和手术对照组给予同等剂量二甲基亚砜腹腔注射。病理学和血液动力学分别评估肠系膜血管新生和门静脉压力。Western印迹法测定血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和m TOR信号通路标志物P-核糖体蛋白S6激酶(P-P70S6K)和P-真核细胞翻译启始因子4E结合蛋白1(P-4E-BP1)的表达。结果:术后3周,部分门静脉结扎大鼠脾脏肿大,肠系膜血管新生和门静脉压力显著增高(P<0.01);VEGF、P-P70S6K和P-4E-BP1的相对表达量也明显增高(P<0.01)。雷帕霉素干预2周后,有效改善脾脏肿大,抑制肠系膜血管新生和降低门静脉压力(P<0.01),下调VEGF蛋白表达量、P-P70S6K和P-4E-BP1的相对表达量(P<0.01)。结论:哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路活化促进门静脉高压症大鼠肠系膜血管新生,雷帕霉素阻断该通路,可抑制肠系膜血管新生,降低内脏血流高动力循环。
- 陈云扬王维杰王化恺施敏敏张明钧杨卫平李宏为严佶祺
- 关键词：雷帕霉素门静脉高压症
- 鼠肝缺血再灌注后多耐药相关蛋白和根蛋白的表达及定位被引量：3
- 2007年
- 目的探讨鼠肝缺血再灌注后血浆胆红素升高发生的分子机制。方法实验分为假手术组(A 组),70%的鼠肝缺血35 min 再灌注组(B 组),研究时点为再灌注后的1 h、6 h、1 d、3 d、5 d。HE 染色分析肝组织病理改变。计算胆汁生成率,常规生化方法检测胆汁、血浆中胆红素含量的变化。荧光定量 PCR 检测肝组织多耐药相关蛋白2(MRP2)以及肝细胞骨架连接蛋白根蛋白的表达。激光共聚焦方法分析 MRP2、根蛋白在肝细胞毛细胆管膜上的定位。结果 70%鼠肝缺血35min 再灌注模型炎症反应轻,无肝细胞坏死的发生。与 A 组比较,B 组再灌注后的1 h～3 d,胆汁生成率及胆汁中结合胆红素含量明显降低;再灌注后的1 h～5 d,血浆中胆红素含量显著增加。荧光定量聚合酶链反应(PCR)发现,再灌注后6 h～5 d,B 组根蛋白表达下调,以再灌注后的6 h～1 d 尤为明显,MRP2表达的明显下调仅发生在再灌注后的6 h。激光共聚焦分析发现,再灌注后的6 h～5 d 在根蛋白表达缺失处,B 组 MRP2在毛细胆管膜上的定位减少。结论根蛋白表达下调所致的 MRP2在毛细胆管膜上的定位减少很可能是鼠肝缺血再灌注后血浆胆红素升高发生的分子机制。
- 舒明彭承宏陈皓沈柏用邱伟华姜志宏施敏敏蔡劬李宏为
- 关键词：肝缺血再灌注胆红素
- 肝脏X受体α对肝细胞HepG2胆固醇代谢基因表达的调控被引量：3
- 2010年
- 目的:研究肝细胞X受体α(liver X receptorα,LXRα)基因对HepG2肝细胞胆固醇代谢相关基因表达的调控作用。方法:将特异性LXRα小片段干扰RNA(siRNA)经脂质体Lipofectamine 2000介导转染人HepG2肝细胞,同时行HepG2肝细胞LXRα的激动(T0901317)实验,采用实时定量PCR方法分别测定干扰和激动前后的LXRα以及胆固醇代谢相关基因ATP结合盒(ABC)G5、ABCG8、ABCA1 mRNA的表达。结果:LXRαsiRNA干扰24h后,HepG2实验组LXRα mRNA相对表达量显著低于阴性对照组(P<0.01),LXRα mRNA表达抑制率为86.06%。实验组ABCG5、ABCG8和ABCA1 mRNA表达水平均较阴性对照组有下降趋势(P>0.05)。HepG2加入激动剂(T0901317)48h后,实验组ABCG8和ABCA1基因表达均显著升高(P<0.05),但ABCG5基因表达仅有升高趋势(P>0.05)。结论:RNA干扰使HepG2肝细胞LXRα表达受抑制,继而有使靶基因ABCG5、ABCG8、ABCA1表达降低趋势;人工合成配体T0901317与LXRα结合,使其活性增加,上调了ABCG8、ABCA1和ABCG5 mRNA的表达。提示LXRα可调控HepG2肝细胞的胆固醇代谢基因。
- 王蕾蔡劬蒋兆彦施敏敏崔巍韩天权袁耀宗吴卫泽张圣道
- 关键词：肝X受体Α胆固醇代谢RNA干扰激动剂胆石病
- 霉酚酸酯对脓毒症肝损伤的保护作用被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)对脓毒症小鼠肝脏的保护作用。方法:将48只雄性Balb/c小鼠随机分为脓毒症模型组、MMF预处理[10 mg/(kg·d),2 d]的脓毒症模型组。两组分别于造模后1 h、6 h和24 h及假手术后检测丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)水平并行肝脏HE染色及病理评分。采用Western印迹法检测自噬相关蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ表达并观察7 d存活率。结果:与假手术组相比,脓毒症小鼠造模后6 h和24 h病理评分显著增高[(3.17±0.75)比(0.50±0.55)](P<0.000 1),[(2.67±0.82)比(0.50±0.55)](P<0.000 1);6和24 h血清ALT也显著升高[(1 077.80±188.80)比(120.70±40.90)],(P<0.000 1),[(432.20±154.80)比(120.70±40.90)](P<0.01)。预先给予MMF可显著降低以上指标:6 h病理评分降低[(3.17±0.75)比(2.17±0.75)](P<0.05),6 h和24 h血清ALT水平也都降低[(1 077.80±188.80)比(597.30±299.10)](P<0.05),[(432.20±154.80)比(179.60±45.80)](P<0.05);提高存活率(13.3%,53.3%,P<0.05),同时LC3Ⅱ蛋白表达升高。结论 :MMF可显著减轻脓毒症肝损伤,诱导自噬增加是其可能作用机制之一。
- 陆美玲王金龙施敏敏陈皓陈尔真
- 关键词：脓毒症肝损伤自噬
- 小鼠肝脏热缺血-再灌注中霉酚酸酯对TGF-β_1表达的影响
- 2013年
- 目的:观察霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)预处理对小鼠肝脏热缺血-再灌注(WIR)损伤后内源性转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:采用小鼠70%肝脏WIR模型,HE染色观察肝脏病理改变,TNF-αmRNA水平反映肝WIR炎症程度,ELISA和实时定量PCR观察TGF-β1水平。结果:MMF预处理可显著降低小鼠肝脏WIR后6 h、24 h丙氨酸转氨酶水平,肝组织损伤Suzuki评分显著减轻(P<0.05)。在肝脏WIR 6 h、24 h时,MMF组与对照组相比,TGF-β1mRNA、蛋白质表达显著下降(P<0.05)。结论:在小鼠肝脏WIR中,MMF可能通过降低TGF-β1的表达减轻肝组织损伤。
- 闵得金施敏敏何美美李健芳陈皓
- 关键词：转化生长因子Β1霉酚酸酯
- DEPDC1基因在胰腺癌的表达及其siRNA对胰腺癌细胞的影响被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨DEPDC1基因在人胰腺癌细胞株、胰腺癌组织和癌旁组织的表达;应用RNA干扰技术靶向沉默胰腺癌细胞株PANC-1中DEPDC1基因,研究其对细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:应用半定量RT-PCR方法检测4个胰腺癌细胞株、4例胰腺癌组织和癌旁组织DEPDC1基因的表达;靶向DEPDC1的siRNA载体转染胰腺癌细胞株PANC-1,采用实时定量PCR和Western印迹法检测基因沉默前、后DEPDC1基因及蛋白表达变化,CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖、周期及凋亡的变化。结果:胰腺癌细胞株和胰腺癌组织中DEPDC1基因呈高表达,癌旁组织呈低表达甚至不表达;转染siRNA的PANC-1细胞与对照组比较,DEPDC1基因及其蛋白表达下调,细胞增殖被显著抑制(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著上升、S期细胞比例则显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论:DEPDC1基因在人胰腺癌细胞株、胰腺癌组织中呈高表达,在癌旁组织中呈低表达甚至不表达。DEPDC1 siRNA可明显下调靶基因DEPDC1及其蛋白质表达,阻滞胰腺癌细胞株PANC-1周期,诱导凋亡,抑制增殖,提示DEPDC1基因在胰腺癌发生、发展中起重要作用。
- 潘春鹏鲍国清施敏敏詹茜祝哲诚邓侠兴陈皓彭承宏沈柏用
- 关键词：胰腺癌增殖周期
- p53对肝癌细胞中GADD45β表达诱导的影响及其调控机制被引量：6
- 2010年
- 目的 观察p53对肝癌细胞GADD45β诱导的影响并探讨其机制.方法 转染p53全序列建立Hep3B^＋p53;比较S腺苷蛋氨酸对Hep3B^＋p53的GADD45β表达诱导及其对近端启动子活性影响;比较DNA合成能力和细胞克隆形成能力及其对Caspase基因的影响.结果 Hep3B^＋p53可以稳定表达p53蛋白;p53转染能使S腺苷蛋氨酸对Hep3B^＋p53中GADD45β的表达诱导由0.0089增加至0.0192和0.0371,同时使启动子中3个核因子（NF）-κB活性分别增强1倍、50%和25%,Hep3B^＋p53的DNA合成能力降至80.99%和42.53%,细胞克隆形成能力的抑制率为15.04%和90.42%;Hep3B^＋p53的Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的活性无明显变化.结论 p53在肝癌细胞的GADD45β表达诱导中有重要作用,增强转录调节因子的表达水平是其可能的作用机制.
- 杨卫平覃胜灵姚永良衣琳施敏敏陈皓邱伟华
- 关键词：P53GADD45Β启动子
- 霉酚酸在肝移植受者的药代动力学与药效学相关性研究被引量：4
- 2010年
- 目的研究肝移植受者早期口服霉酚酸(免疫抑制剂)药代动力学与药效学的相关性。方法20例肝移植受者口服霉酚酸酯前、后,用酶增强免疫法测定患者血浆霉酚酸浓度。服药前(0h)及服药后1,2h,用患者血清处理人急性淋巴细胞白血病T淋巴(CEM)细胞,检测CEM细胞的增殖情况。结果口服霉酚酸酯前,CEM细胞增殖率显著高于服药后1,2h(P<0.05);服药后1,2h霉酚酸浓度与相应的CEM细胞增殖率呈负相关(P<0.05)。结论肝移植受者口服霉酚酸酯后,血清对CEM细胞的增殖产生显著抑制作用,其作用和霉酚酸浓度呈显著负相关。
- 张贵阳施敏敏张伟霞顾志冬茅华荣陈皓
- 关键词：霉酚酸酯霉酚酸药代动力学药效学肝移植
