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方井晋
作品数:
11
被引量:14
H指数:2
供职机构:
杭州九源基因工程有限公司
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相关领域:
医药卫生
生物学
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合作作者
王同映
杭州九源基因工程有限公司
刘晓妮
杭州九源基因工程有限公司
马国昌
杭州九源基因工程有限公司
单剑峰
杭州九源基因工程有限公司
黄岩山
浙江大学医学院
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方井晋
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含有艾塞那肽的药物制剂
含有艾塞那肽的药物制剂。本发明提供了一种适合多用给药的稳定药物制剂,包含艾塞那肽、能够维持制剂在水溶液状态下pH值为3.0-7.0的缓冲液、药学上可接受的辅料和防腐剂,所述的辅料可任选自葡萄糖、蔗糖、甲硫氨酸、甘露醇或甘...
马国昌
周哲
程睿
方井晋
王同映
文献传递
聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体的纯化与分析
2010年
目的获得高活性的聚乙二醇定点单修饰的产物PEG-rmhG-CSF-Cys176。方法用聚乙二醇马来酰亚胺基和高活性的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)的半胱氨酸(Cys)基团特异性结合,并用离子交换层析分离纯化修饰产物,通过高效凝胶过滤色谱检测纯度,MTT法检测体外的生物活性。结果蛋白纯度为97%,体外生物活性为0.8×108IU·mg-1。结论半胱氨酸反应性PEG和游离Cys的结合是在rmhG-CSF活性区以外的位置C末端,修饰后的蛋白活性基本未受影响。
张金玲
马南佳
汪军远
方井晋
刘晓妮
关键词:
重组人粒细胞集落刺激因子
突变体
聚乙二醇
重组HSA-hG-CSF融合蛋白在毕赤酵母中的表达
被引量:8
2006年
为了延长G-CSF半衰期,利用甲醇酵母表达重组人血清白蛋白融合的集落细胞刺激因子(rHSA-G-CSF)。用PCR方法从人胎肝cDNA文库扩增出HSA cDNA序列,hG—CSFcDNA序列从大肠表达载体中酶切获取。将HSA和hG—CSF两片段连接后,克隆到酵母分泌型表达载体pGENYK中,酶切线性化后原生质体转化导入酵母细胞进行整合。工程菌经发酵罐培养表达,层析法分离纯化融合蛋白。纯化的融合蛋白经Western印迹分析表明具有HSA和G—CSF的免疫原性,体外生物学活性分析表明,同等尔数的融合表达产物的活性为E.coli表达G—CSF单体的活性的50%以上。体内动物实验研究表明,经HSA融合的G.CSF的半衰期为G—CSF单体的15~20倍。甲醇酵母表达的融合HSA的G-CSF具有比G-CSF更长的半衰期,有良好的临床应用前景。
王昌梅
王同映
杨志愉
单剑峰
刘晓妮
马国昌
戎亚雯
方井晋
黄岩山
周金宝
关键词:
毕氏酵母
聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体
本发明涉及一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG-rmhG-CSF)的制备和鉴定。通过点突变技术,将重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)18位的半胱氨酸(cys)突变为丝氨酸(ser),再通过噬...
金荣
徐飞虎
王同映
刘晓妮
王昌梅
单剑峰
朱琳
方井晋
汪军远
戎亚雯
文献传递
一种重组人粒细胞集落刺激因子的RP-HPLC检测方法
本发明涉及一种重组人粒细胞集落刺激因子的RP-HPLC检测方法。该方法采用Vydac C4柱,乙腈梯度洗脱,柱温为60±3度。本方法使用的C4柱与中国药典2010版使用的C18柱不同,但是检测灵敏度和准确度更高。而欧洲药...
郭旺明
方井晋
陈海红
沈玲
李辉
文献传递
聚乙二醇单修饰的重组人集落细胞刺激因子赖氨酸缺陷体
本发明公开了一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子赖氨酸缺陷体(PEG-rhG-CSF-Lys<Sup>D</Sup>)。通过噬菌体展示技术表达所有赖氨酸突变的重组人粒细胞集落刺激因子赖氨酸缺陷体(rhG-CSF-...
金荣
刘晓妮
徐飞虎
单剑峰
戎亚雯
方井晋
马国昌
王同映
黄岩山
文献传递
含有艾塞那肽的药物制剂
本发明提供了一种适合多用给药的稳定药物制剂,包含艾塞那肽、能够维持制剂在水溶液状态下pH值为3.0-7.0的缓冲液、药学上可接受的辅料和防腐剂,所述的辅料可任选自葡萄糖、蔗糖、甲硫氨酸、甘露醇或甘氨酸的一种或几种,所述的...
马国昌
周哲
程睿
方井晋
王同映
文献传递
一种重组人粒细胞集落刺激因子的RP-HPLC检测方法
本发明涉及一种重组人粒细胞集落刺激因子的RP-HPLC检测方法。该方法采用Vydac C4柱,乙腈梯度洗脱,柱温为60±3度。本方法使用的C4柱与中国药典2010版使用的C18柱不同,但是检测灵敏度和准确度更高。而欧洲药...
郭旺明
方井晋
陈海红
沈玲
李辉
肝素钠有关物质检测方法学研究及效价的快速测定
肝素钠(Heparin sodium)是一种硫酸氨基葡聚糖的钠盐,具有抗凝血作用,是需要迅速达到抗凝作用的首选药物,被广泛用于治疗静脉血栓和预防凝血。2008年爆发的“肝素钠事件”暴露出肝素钠的药品标准存在严重漏洞。经调...
方井晋
关键词:
阴离子交换
肝素钠
硫酸皮肤素
双波长分光光度法
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聚乙二醇单修饰的重组人集落细胞刺激因子赖氨酸缺陷体
本发明公开了一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子赖氨酸缺陷体(PEG-rhG-CSF-Lys<Sup>D</Sup>)。通过噬菌体展示技术表达所有赖氨酸突变的重组人粒细胞集落刺激因子赖氨酸缺陷体(rhG-CSF-...
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