帅磊
- 作品数：11 被引量：15H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- AP2M1在狂犬病病毒侵入中的作用研究被引量：3
- 2019年
- 本研究前期利用RNA干扰技术在人类全基因组水平上筛选到了与狂犬病病毒(RABV)生命周期有关的宿主基因AP2M1。为进一步研究AP2M1影响RABV感染的机制,本实验在人胚胎肾细胞(HEK-293)中沉默或过表达AP2M1,采用高内涵筛选、病毒滴度检测等方法分析AP2M1对RABV感染率的影响。结果显示:敲低AP2M1,RABV感染率显著下降;过表达AP2M1,RABV感染率上升。酸绕过实验显示AP2M1在RABV感染过程中发挥作用。激光共聚焦观察显示RABV G蛋白与AP2M1无共定位。免疫共沉淀实验显示AP2M1与RABV G蛋白无直接相互作用。本研究结果表明,AP2M1基因在RABV感染过程中发挥作用,但不是通过与RABV G蛋白的直接作用影响病毒的感染。本研究为阐明AP2M1在RABV生命周期中具体作用奠定了基础。
- 马骁王翀王金良王子龙王鑫鑫帅磊王喜军葛金英温志远步志高
- 关键词：狂犬病病毒G蛋白
- 表达狂犬病病毒G蛋白重组犬瘟热病毒Snyder Hill株的构建及鉴定
- 2019年
- 为构建一株表达狂犬病病毒(RV) G蛋白的重组犬瘟热病毒(CDV),本研究以本实验室分离的CDVSnyder Hill疫苗株为基础,在CDV P和M基因之间插入RV弱毒疫苗株ERA G蛋白基因,构建重组质粒p CI-CDV-RVG及表达CDV N、P和L蛋白的辅助质粒p CI-CDVN、p CI-CDVP和p CI-CDVL,将重组质粒和辅助质粒共转染BSR细胞,拯救获得了表达RV G蛋白的重组犬瘟热病毒(rCDV-RVG),将该重组病毒在Vero细胞中传代,通过RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定。结果显示RV G基因能够在r CDV-RVG中稳定存在并正确表达。病毒生长动力学曲线显示,重组病毒在Vero细胞中的增殖效率与拯救的亲本病毒r CDV无显著差异(p>0.05)。本研究表明CDV Snyder Hill株作为载体表达外源基因的潜力,为研制高效、安全、廉价的CDV-RV二联活载体疫苗奠定基础。
- 李翠霞王喜军赵丹丹帅磊步志高葛金英
- 关键词：狂犬病病毒G蛋白
- 糖蛋白G基因在基因组P-M位的插入重组表达对狂犬病毒Flury LEP致病力的影响被引量：3
- 2011年
- 【目的】研究狂犬病病毒Flury鸡胚低代毒株(Flury LEP)在基因组P-M位增加糖蛋白基因(G基因)的重组表达对病毒致病力的影响。【方法】利用反向遗传操作技术,构建了P、M基因之间额外插入G基因的重组狂犬病病毒Flury LEP株(rLEP-PGM),并对重组病毒的生物学特性及对小鼠的致病性进行了初步研究。【结果】亲本株和重组病毒具有相似的生长特性,LEP和rLEP-PGM在BHK-21细胞的生长滴度分别为4×106 FFU/mL和2.5×106 FFU/mL,在小鼠神经母细胞(NA)的生长滴度分别为4×107 FFU/mL和2.5×107 FFU/mL;嗜神经指数均为1;Western blot显示,rLEP-PGM在感染细胞的G蛋白表达量比LEP显著提高;小鼠感染试验显示,rLEP-PGM与LEP脑内注射小鼠的LD50分别为3 FFU和1 FFU,肌肉注射途径的LD50分别为4×104 FFU和3.2×105 FFU。【结论】P、M基因之间插入一个额外的G基因能够提高G蛋白的表达水平,同时增强重组病毒外周侵入中枢神经系统的能力。
- 翟洪月陶丽红葛金英王喜军冯娜帅磊马良步志高
- 关键词：反向遗传技术糖蛋白
- 红色荧光示踪狂犬病病毒ERA株病毒粒子方法的建立
- 2018年
- 为建立一种狂犬病病毒(RABV)荧光标记方法,便于有效地观察研究RABV侵入细胞及脱壳的过程,本研究采用CY5-NHS酯红色荧光染料标记氨基的方法将纯化的RABV ERA株进行CY5-NHS酯荧光染料标记;采用亲脂性羰花青荧光染料将细胞膜染成绿色;采用DNA荧光染料将细胞核染成亮蓝色;在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下成像,动态观察病毒吸附细胞并内吞的过程。与传统的染色方法相比,本研究建立的病毒标记方法更适合在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下观察和拍摄RABV感染细胞的过程,为RABV感染机制的研究提供了一种有效研究方法,对于其它弹状病毒科病毒标记方法的建立也具有一定的参考意义。
- 单博文王金良刘仁强帅磊王喜军葛金英温志远夏咸柱步志高
- 关键词：狂犬病病毒活细胞成像
- 表达犬瘟热病毒H基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究被引量：4
- 2012年
- 为研制安全、有效的新型犬瘟热疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗株Rockborn-20/8血凝素(H)蛋白的重组病毒rLa-CDV-H,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为犬瘟热活载体疫苗的安全性和有效性。通过免疫荧光和western blot试验证明了CDV H蛋白的正确表达;重组病毒株保持了LaSota亲本株的低致病性和高滴度鸡胚生长特性;重组病毒rLa-CDV-H接种12周龄比格犬后,可以诱导显著的CDV中和抗体反应。本研究表明重组病毒rLa-CDV-H具有作为犬瘟热重组病毒活载体疫苗的潜力。
- 田美杰葛金英王喜军冯娜马良帅磊苏华高玉伟夏咸柱步志高
- 关键词：犬瘟热病毒血凝素蛋白重组新城疫病毒
- 整合素β1影响狂犬病病毒的外周入侵
- 狂犬病是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的一种重要人兽共患病,每年导致约59,000人死于该病,严重威胁着人类社会公共卫生安全。人间狂犬病基本经犬类咬、抓伤所传播,一旦发病致死率几乎为100%。目前...
- 帅磊
- 关键词：狂犬病病毒整合素Β1G蛋白病毒入侵
- 文献传递
- 分子修饰狂犬病ERA疫苗株及表达埃博拉或马尔堡病毒GP重组ERA疫苗株的研究
- 本文主要从以下几方面进行了论述: Ⅰ:分子修饰狂犬病毒ERA疫苗株的研究 狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus，RABV)引起的一种人兽共患病，一旦出现神经症状致死率几乎达100％。全世界每...
- 帅磊
- 关键词：狂犬病病毒埃博拉病毒马尔堡病毒疫苗株分子修饰
- 分子修饰狂犬病ERA疫苗株剂量依赖反应及对强毒的攻毒保护研究
- 2018年
- 为评价分子修饰狂犬病ERA疫苗株(简称rERAG_(333E))的免疫效果,本实验将其分别以10~3FFU/mL、10~4FFU/m L、10~5FFU/mL、10~6FFU/mL的剂量口服免疫小鼠,监测小鼠血清中和抗体持续期;同时在小鼠免疫4周后采用不同现地流行株进行攻毒保护实验。结果表明,rERAG_(333E)以10~4FFU/mL以上剂量免疫小鼠,免疫后各实验组小鼠均能够产生较高水平的抗狂犬病病毒(RABV)中和抗体,且能够抵抗经典效检强毒株CVS-24和现地流行强毒株GX/09和MRV的致死性攻击,保护率达到100%;免疫有效持续期能够达到24周以上。以上结果表明rERAG_(333E)是一种安全有效,具有推广使用潜力的狂犬病口服疫苗候选株。
- 王雪莲李翠霞帅磊王喜军葛金英步志高
- 关键词：口服疫苗狂犬病ERA
- 表达荧光素酶重组RABV rERA-Luc株的构建及其生物学特性的研究
- 2021年
- 为建立一种能够实现病毒活体示踪的狂犬病病毒(RABV),以有效地研究RABV的侵染机制,本研究基于重组RABV rERA载体,利用反向遗传技术构建了包含rERA全长基因组cDNA及萤火虫荧光素酶(Luc)基因的重组质粒,并经Pme I酶切鉴定正确后,将该质粒与辅助质粒共转染鼠肾成纤维细胞(BSR),4 d后收集上清液,在BSR细胞盲传3代后收集上清液,经RT-PCR扩增结果显示,获得了Luc基因的目的条带;间接免疫荧光试验(IFA)鉴定结果显示,上清液接种的细胞出现绿色荧光;将上清液中的重组病毒纯化后电镜观察结果显示重组病毒与亲本病毒均呈弹头状,Western blot结果显示纯化后重组病毒感染BSR细胞后均能够表达RABV 5种结构蛋白,与亲本病毒蛋白表达情况一致,上述结果表明获得了与亲本病毒性状一致的重组病毒,命名为rERALuc。将重组病毒在BSR细胞中连续传15代,每代均经PT-PCR及测序鉴定,并经IFA测定每代重组病毒的病毒滴度,分析重组病毒增殖稳定性;测定各代次重组病毒感染BSR细胞48 h后的荧光素酶活性,分析其遗传稳定性。各代次重组病毒的RT-PCR及测序结果显示,Luc基因均未发生突变;IFA结果显示,F5代及以后代次的重组病毒与亲本病毒在体外的病毒滴度无显著差异并能稳定传至15代;荧光素酶活性测定结果显示,重组病毒荧光素酶活性随传代次数的增加逐渐升高且从第5代以后的重组病毒均能够稳定表达荧光素酶,而亲本病毒荧光素酶活性一直维持较低水平,表明重组病毒具有较强的增殖及遗传稳定性。将重组病毒与亲本病毒分别感染BSR细胞和小鼠神经瘤细胞(NA),感染后不同时间(24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h),分别经IFA测定两种病毒的病毒滴度,绘制生长曲线,并测定二者的荧光素酶活性。结果显示,重组病毒与亲本病毒在这两种细胞中的生长特性均无显著差异;且rERA-Luc的荧光素酶活性均随感
- 王娅荣帅磊王金明舒伦金山步志高
- 关键词：狂犬病病毒荧光素酶生物学特性
- 狂犬病病毒囊膜糖蛋白基因DNA免疫研究被引量：1
- 2013年
- 狂犬病病毒(RV)囊膜糖蛋白(G)是该病毒诱导保护性免疫反应的主要抗原。为研究G蛋白基因的DNA免疫效果,本研究构建了表达哺乳动物密码子优化的RV G基因的重组真核表达质粒pCAGG-RVG,间接免疫荧光试验及western blot结果表明,重组RV G基因在pCAGG-RVG转染的BHK-21细胞中获得正确表达。将pCAGG-RVG按500μg剂量经肌肉注射途径免疫比格犬,间隔4周以相同剂量、途径加强免疫一次,并于初次免疫前、后不同时间检测血清RV的中和抗体。结果显示,pCAGG-RVG一次免疫即可诱导产生显著的中和抗体反应,二次免疫中和抗体滴度表现出显著地增强效果。二次免疫后,中和抗体滴度缓慢下降,保持持续平稳,至初次免疫后第54周,7只免疫犬病毒中和抗体滴度平均为2.88 IU/mL,并且全部高于0.5 IU/mL,即全部高于对强毒攻击保护的最低中和抗体滴度要求。因此,本研究构建的pCAGG-RVG具有预防狂犬病的潜力,是一种有希望的狂犬病候选疫苗。
- 蒋伟王喜军帅磊葛金英任家琰步志高
- 关键词：狂犬病病毒DNA疫苗G蛋白
