尚珂 作品数:19 被引量:40 H指数:4 供职机构: 上海医药工业研究院 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 化学工程 更多>>
柔红霉素产生菌SIPI-DM中dnmv的基因置换研究 dnmV基因编码柔红霉素生物合成途径中TDP-柔红糖胺C4酮基还原酶。阻断基因组上的dnmV基因并导入源于阿维菌素生物合成途径的aveBIV基因可构建得到表柔红霉素工程菌。本文从高产的柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌Stre... 尚珂 张伟 朱春宝 朱宝泉 胡又佳文献传递 表柔红霉素工程菌的构建及其原生质体紫外诱变 被引量:2 2009年 本研究将质粒pYG836转化到柔红霉素产生菌SIPI-DM中,采用同源重组双交换法,用aveBIV基因置换基因组上的dnmV基因,得到稳定遗传的表柔红霉素工程菌DM3。为进一步提高工程菌的发酵单位,对其原生质体进行连续4次的紫外诱变育种,最终得到一株发酵单位较出发菌株提高了93.7%的突变菌株。 张伟 尚珂 胡又佳 朱春宝 洪文荣关键词:同源重组 原生质体 紫外诱变 柔红霉素产生菌SIPI-DM中dnmV的基因置换 被引量:3 2009年 dnmV基因编码柔红霉素生物合成途径中TDP-柔红糖胺C4酮基还原酶。阻断基因组上的dnmV基因并导入源于阿维菌素生物合成途径的aveBIV基因可构建得到表柔红霉素工程菌。本文从高产的柔红霉素产生菌SIPI-DM中分别扩增dnmV基因两侧同源交换臂,并在两侧交换臂中插入aveBIV基因构建用于置换dnmV基因的同源双交换重组质粒。经筛选及验证得到aveBIV基因直接置换dnmV基因的表柔红霉素工程菌,且该工程菌基因组上不引入抗性基因,有利于进一步的基因改造。 尚珂 张伟 朱春宝 朱宝泉 胡又佳关键词:基因置换 柔红霉素产生菌dnmV基因阻断突变和功能替换研究 表柔红霉素是工业生产表阿霉素的重要前体,以微生物直接发酵方法生产表柔红霉素可以节省多步化学合成反应,降低成本,减少污染。柔红霉素生物合成途径的研究成果提示通过改变TDP-L-柔红糖胺生物合成中的一步,即dnmV基因编码酶... 尚珂关键词:柔红霉素 基因阻断 文献传递 受SnpR激活的snpA启动子调控的柔红霉素C-14羟化酶基因的克隆、表达和应用研究 被引量:2 2006年 尝试将柔红霉素经微生物转化法合成多柔比星,从Streptomyces sp.C5中通过PCR的方法扩增了含核糖体结合位点、大小为1.3kb的编码C-14柔红霉素羟化酶的doxA基因及受SnpR调控的snpA启动子。最终构建的重组质粒pYG908,能表达一大小为46.6ku的蛋白条带,CO结合差光谱分析表明所表达的酶在450nm有吸收峰。重组质粒转化Streptomyces lividans TK24后,工程菌能转化柔红霉素生成和多柔比星保留时间一样的产物。 谢丽萍 尚珂 胡又佳 朱春宝 朱宝泉微生物转化法合成7α,15α-二羟基雄烯醇酮 被引量:12 2004年 7α,15α-二羟基雄烯醇酮1是合成口服避孕药Yasmin活性成分屈螺酮的重要中间体,应用亚麻刺盘孢(Colletotrichum lini AS 3.4486)的羟化酶系统对去氢表雄酮底物进行生物转化,合成了7α,15α-二羟基雄烯醇酮,转化率60~70%。转化机理研究发现,亚麻刺盘孢将底物的7位羟基化合成7α-羟基雄烯醇酮,再将其15位羟基化形成双羟基的产物。亚麻刺盘孢菌能够特异性、有序地完成对去氢表雄酮的两步羟化反应,与文献报道的结论一致,间接转化方法和转化机理属于首次报道。 尚珂 胡海峰 朱宝泉关键词:微生物转化 柔红霉素产生菌SIPI-1482中dnmV基因功能的阻断及恢复 被引量:3 2006年 dnmV基因产物为柔红霉素生物合成途径中TDP-15-脱氧已糖C4酮基还原酶,破坏该基因能阻断柔红糖胺的合成,进而阻断柔红霉素的产生。从天蓝淡红链霉菌(S.coeruleorubidus)SIPI- 1482基因组DNA中经PCR扩增出dnmV及其上游dnmU基因片段,并由此构建了用于阻断dnmV基因的同源重组质粒pYG817,转化SIPI-1482菌株后成功地破坏了dnmV基因,发酵结果显示阻断突变株不再代谢产生柔红霉素,为引入新的基因来改变代谢产物的糖基结构打下了基础。通过导入dnmV基因表达质粒可重建该突变株的生物合成途径,恢复产生柔红霉素,但产量比出发菌株要低。 尚珂 宫倩 胡又佳 朱春宝 朱宝泉关键词:柔红霉素 同源重组 基因阻断 天蓝淡红链霉菌SIPI-1482中dnrX基因的敲除及多柔比星产生菌的构建 被引量:3 2007年 柔红霉素是合成重要抗肿瘤抗生素多柔比星的前体,由微生物发酵产生。通过PCR从国内柔红霉素生产菌种天蓝淡红链霉菌SIPI-1482基因组DNA中扩增出约1080bp的dnrX部分序列,将PCR扩增片段中985bp的片段亚克隆至大肠埃希菌质粒pYG813构建了同源重组突变质粒pYG963,转化SIPI-1482原生质体并成功地敲除了dnrX基因,得到一株稳定的突变株。该突变株的发酵试验表明dnrX基因所编码的酶的功能已经被有效地阻断,对酸敏感的副产物减少,柔红霉素的产量增加了近3倍,将原野生菌改造成为多柔比星产生菌,发酵效价与原野生菌株柔红霉素的发酵效价相当,为直接发酵法生产多柔比星打下了基础。 宫倩 尚珂 胡又佳 朱春宝 朱宝泉关键词:多柔比星 同源重组 柔红霉素产生菌Streptomyces coeruleorubidus SIPI-1482中dnmV基因克隆及阻断 本研究针对dnmV基因,利用用于基因破坏的重组质粒对柔红霉素产生菌S. coeruleorubidusSIPI-1482进行基因阻断,验证了在该菌株中进行同源重组所需交换臂长度,并对破坏子进行分子生物学和发酵实验的研究。 尚珂 胡又佳 朱春宝 朱宝泉关键词:基因克隆 发酵工程 基因重组 文献传递 一种乙醇脱氢酶及其基因和重组酶 本发明公开了一种乙醇脱氢酶及其基因。该基因是下列核苷酸序列之一:1)其具有序列表中SEQ ID No.1所示的碱基序列;2)编码由序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明还公开了含有该基因的重组... 胡又佳 陈祈磊 尚珂 谢丽萍 朱春宝文献传递