孟凡涛
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鲢鱼恒定链cDNA的克隆及其分子结构分析被引量：1
- 2013年
- 为研究鱼类恒定链(Invariant chain,Ii)的结构与功能,应用RT-PCR和RACE(rapid amplification of cDNAends)法,从脾脏细胞中克隆了鲢(Aristichthys molitrix)Ii基因cDNA,并进行了测序。该基因cDNA全长为1 136bp,其中开放阅读框为699 bp,编码232个氨基酸。比对氨基酸序列发现,鲢与其他物种的Ii链有相同的结构域。将Ii基因cDNA片段和表达不同结构域的DNA片段分别插入真核表达质粒pEGFP-C1,转染真核细胞系COS7,发现鲢Ii跨膜区和胞浆区在细胞内具有定位作用。根据推测的氨基酸序列,分析不同种间Ii的同源性,表明鲢与斑马鱼(Brachydanio rerio)的同源性最高(78%),与人等哺乳动物Ii的同源性较低(30%～40%)。进一步模拟构建和比较不同物种Ii链的3D结构,显示链鱼和小鼠、人和鸡的Ii链结构非常相似,甚至在一些具有重要作用的氨基酸是相同的。上述结果表明,作为重要的免疫分子,不同脊椎动物的Ii链不仅在遗传上具有高度同源性,而且在结构方面仍保持着高度的相似性。
- 叶显峰孟凡涛刘洪明祖国掌
- 关键词：RACE克隆
- 小鼠恒定链短肽Ii-key增强免疫应答的研究
- 主要组织相容性复合体(Majorhistocompatibilitycomplex，MHC)，是由一群紧密连锁的基因群，定位于动物或人某对染色体的特定区域，呈高度多态性;其编码的分子表达于不同细胞表面，参与抗原递呈，制约...
- 孟凡涛
- 关键词：抗体检测免疫应答
- 文献传递
- 鸡新城疫病毒F基因片段的原核表达及其抗F蛋白单克隆抗体的制备被引量：2
- 2012年
- [目的]制备鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)抗原的单克隆抗体。[方法]克隆和表达了NDV-F蛋白基因的部分片段F306,经杂交瘤技术制备了抗F蛋白的单克隆抗体。[结果]首先根据F基因和载体pGEX-4T-1的多克隆位点自行设计了1对引物,以保存的重组质粒为模板,通过PCR扩增获得长度为306 bp的片段,再将其定向插入pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-1-F306。其次经原核表达获得大小为35.8 kD的融合蛋白,提纯后免疫Balb/c小鼠。最后,用免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA筛选和3次亚克隆获得2株稳定传代和分泌抗NDV-F的抗体的杂交瘤细胞株。连续传代10次后,细胞上清和腹水的抗体效价仍维持在1∶5 124和1∶64 000以上。[结论]获得了2株稳定分泌抗鸡NDV-F抗体的杂交瘤细胞。
- 孟凡涛陈芳芳余为一
- 关键词：新城疫病毒F蛋白原核表达单克隆抗体
- 两种基于恒定链活性片段载体在增强抗体分泌中作用的比较被引量：5
- 2012年
- 目的:比较基于恒定链片段的两种载体的免疫效果和作用机理。方法:分别构建了含新城疫病毒抗原表位F306和Ii不同片段的三个嵌合体(Ii-key/F306、Ii-key/F306/ND(两个氨基酸残基)和用抗原表位取代Ii-CLIP的Ii/F306),经纯化后的融合蛋白免疫小鼠,并用ELISA检测其抗体效价。同时嵌合体与Mhc共转染COS7细胞,观察两者的细胞定位与结合。结果:Ii-key/F306免疫组比单独F306抗原肽免疫组的抗体效价提高2倍,Ii-key/F306/ND免疫组增至4倍,而Ii-F306免疫组只增强2.5倍。在与Mhc共转染的COS7细胞和免疫共沉淀中,Ii-key/F306和Ii-key/F306/ND既没有与MHCⅡ分子的膜共定位作用,也不能与后者结合;而Ii-F306却能与MHCⅡ分子在浆膜共定位,并与后者结合。结论:这些结果表明,嵌合体都具有增强免疫效果的作用,并提示Ii片段促进了抗原肽与MHCⅡ分子结合。
- 孟凡涛陈芳芳余为一
- 关键词：抗体共定位
