陈芳芳
- 作品数：47 被引量：94H指数：5
- 供职机构：安徽农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省教育厅重点项目安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生文化科学生物学更多>>
- 禽类MHCⅡ类分子结构与抗病性关系和基于Ii-Key的病毒抗原免疫增强作用的研究
- 主要组织相容性复合体(MHC)是重要的抗原提呈类分子，而MHCⅡ类分子在成熟装配过程中其多态性α、β链与γ链(即恒定链，又称Ii链)组成的九聚体。其中α和β链对动物抗病/易感性有重要影响，而γ链则通过影响抗原提呈、B细胞...
- 陈芳芳
- 关键词：主要组织相容性复合体
- 文献传递
- 鸡MHCⅠ类分子克隆及其二聚体融合基因的构建与表达
- 2011年
- 为进一步研究MHCⅠ类分子作用机制,以及为制备MHCⅠ基因工程疫苗奠定基础,克隆鸡MHCⅠ基因,并构建MHCⅠβ2m-α融合基因进行原核表达。运用RT-PCR方法,克隆鸡MHCⅠα和β2m链基因,并通过编码连接肽(Gly4Ser)4的基因序列将两者头尾相连,构建了pET-32a-MHCⅠβ2m-α重组质粒,经PCR扩增、双酶切和测序鉴定后,重组质粒在E.coliBL21细胞进行IPTG诱导表达融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting方法分别检测表达产物。结果表明,成功克隆了MHCⅠα和β2m链基因,长度分别为1014和300 bp;构建的融合基因MHCⅠβ2m-α长度为1194 bp,经原核表达,融合蛋白分子质量约为62.0 ku,能与相应的抗体结合,具有一定的免疫学活性。
- 戴银程宝艳胡晓苗王骏俊陈芳芳余为一
- 关键词：融合蛋白
- 用噬菌体肽库筛选IBDV单克隆抗体的模拟表位被引量：2
- 2012年
- 目的:筛选法氏囊病毒(IBDV)单克隆抗体所针对的模拟抗原表位。方法:以纯化的3株IBDV单克隆抗体为靶分子用噬菌体12肽库筛选相应抗原模拟表位;应用间接和竞争ELISA鉴定所筛选的阳性样品;最后对与抗体高亲和结合的噬菌体进行测序分析。结果:经过四轮淘洗,随机挑取30个克隆经间接ELISA鉴定,发现其中22个克隆结合活性较高。进一步应用竞争ELISA,获得14个噬菌体克隆,其抑制率高达50%以上。对这些噬菌体进行DNA测序,并分析比对了IBDV相应序列,确定了3个抗原模拟表位。结论:通过噬菌体随机肽库成功筛选出3个IBDV模拟表位,为进一步研究IBDV抗原性质奠定了基础。
- 李向红陈芳芳黄成斌余为一
- 关键词：噬菌体肽库单克隆抗体IBDV模拟表位
- 大口黑鲈Nesfatin-1蛋白及其原核表达方法与应用
- 本发明公开了大口黑鲈Nesfatin‑1蛋白及其原核表达方法与应用。本发明首次利用大肠杆菌原核表达系统表达出大口黑鲈Nesfatin‑1蛋白，利用镍柱亲和层析法纯化得到大量可溶性重组蛋白，浓度达到1.05mg/mL；EL...
- 苏时萍刘帆刘鑫鑫陈芳芳李西雷张君
- 鸡恒定链协助抗原肽结合MHCⅡ类分子并进入细胞内吞体被引量：5
- 2019年
- 为探明鸡恒定链(invariant chain,Ii)的胞质区/跨膜区[Ii(Cyt/Tra)]作为载体是否可携带抗原肽在细胞内结合MHCⅡ类分子和进入转运途径的细胞器(内吞体),构建4个基因目的片段[Ii、Ii(Cyt/Tra)、F2(新城疫病毒F蛋白片段)和Ii(Cyt/Tra)/F2],分别将它们插入原核表达载体pET-32a和真核表达载体pmCherry-C1/N1中,构建8个重组质粒,再转入工程菌(E.coli)和人肾细胞系(293T),并应用拉下法(pull-down)检测目的蛋白与MHCⅡβ的结合,应用激光共聚焦确定它们在真核细胞与MHCⅡβ的共定位以及在内吞体的定位。结果表明,构建的重组质粒均能相应地原核或真核表达相应目的蛋白;Ii、Ii(Cyt/Tra)和Ii(Cyt/Tra)/F2不仅能够与MHCⅡβ结合,还能进入细胞内吞体;但是F2既不能与MHCⅡβ结合,也不能进入内吞体。Ii活性片段Cyt/Tra不仅本身具有结合MHCⅡβ的作用,而且还可以携带抗原肽与之结合并一起转入细胞内吞体而进入抗原递呈途径。该结果为进一步研究Ii载体转运抗原提供了理论依据。
- 陈芳芳张旭谭红黎桂亚萍余为一
- 关键词：II活性片段抗原递呈
- CD74的抗原递呈和免疫调节及高效免疫载体功能研究进展
- 2018年
- CD74又称主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ相关恒定链(Ii)。它的基本功能是辅助MHCⅡ类分子递呈外源性抗原肽,启动特异性体液免疫应答。近年来发现,CD74还参与MHCⅠ类分子递呈内源性抗原和细胞免疫应答。CD74也是巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)的受体,在炎症和抗感染等反应中具有免疫调节功能。正是基于在辅助抗原递呈和免疫调节中的功能,CD74还被用作高效免疫载体,由于表现出双靶向进入Ⅰ类和Ⅱ类分子递呈抗原途径的优点和具有增强体液免疫和细胞免疫效果的作用,得到广泛应用。我们总结了CD74的辅助递呈抗原、免疫调节和高效载体的三种作用。
- 陈芳芳刘雪兰余为一
- 关键词：CD74抗原递呈免疫调节
- 一种鸡功能性巨噬细胞的分离和培养方法及其诱导培养基
- 本发明公开了一种鸡功能性巨噬细胞的分离和培养方法及其诱导培养基，所述方法的步骤包括：(1)制备含巨噬细胞刺激因子的培养基；(2)直接从12-21日龄幼龄鸡腿骨或胫骨获得鸡骨髓来源巨噬细胞前体细胞，或者用鸡淋巴细胞分离液分...
- 陈芳芳金星余为一
- 文献传递
- 鸡新城疫病毒F基因部分片段克隆表达及其抗体制备被引量：6
- 2008年
- [目的]为进一步研究新城疫病毒的分子结构和基因疫苗奠定基础。[方法]用自行设计的l对引物,通过RT-PCR从接毒的SPF鸡胚的尿囊液中克隆了新城疫病毒F基因部分片段,将该基因片段插入含谷胱甘肽(GST)基因的质粒pGEX-4T-1,构建了重组质粒,对提取的融合蛋白进行亲和层析纯化和琼扩、ELISA及W estern-blot检测。[结果]通过克隆和PCR扩增获得新城疫病毒F基因的部分片段,大小为509 bp;对构建的重组质粒pGEX-4T-1-F509经诱导表达,获得分子大小约为44 000 bp的融合蛋白,其中F基因的部分片段大小约18 000 bp;经亲和层析,获得纯化GST-F509融合蛋白,进一步用该蛋白免疫小鼠,制备了鼠源抗鸡新城疫病毒F蛋白抗体。[结论]琼脂扩散试验、ELISA及W estern-blot检测表明,该融合蛋白中的F片段具有良好的抗原性。
- 程宝艳余为一彭明义程帮照戴银陈芳芳
- 关键词：新城疫病毒F基因原核表达
- 鸡新城疫病毒HN基因片段的原核表达及其单抗制备被引量：1
- 2011年
- [目的]研究NDV-HN蛋白抗原表位在动物免疫应答中的作用特点。[方法]根据HN基因和载体pGEX-4T-1的多克隆位点自行设计1对引物,以该实验室保存的重组质粒为模板,进行PCR扩增,再将其所得片段定向插入pGEX-4T-1,构建重组质粒,并对该重组质粒进行鉴定;再将构建的重组质粒在大肠杆菌中表达;最后,鉴定了相应单克隆抗体。[结果]PCR结果表明,得到了与预期结果一致的长度为850 bp的片段;重组质粒鉴定结果表明,成功构建了包含目的基因片段的重组表达质粒pGEX-4T-HN23;重组质粒经原核表达获得大小为57 kD的融合蛋白,免疫Balb/c小鼠试验表明,用免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA筛选和3次亚克隆获得2株稳定传代(可传20代以上)和分泌抗NDV-HN抗体的杂交瘤细胞株。[结论]获得的鸡新城疫病毒HN单克隆抗体,为进一步研究HN在致病过程的作用及特异性诊断提供了重要试验材料。
- 王贤陈芳芳余为一
- 关键词：新城疫病毒HN原核表达单抗
- 鸡B-FA分子中结合Ii链功能片段特性的研究
- 2016年
- 目的:研究鸡Ii链结合的B-FA分子的功能片段及其特征。方法:将克隆的B-FA基因片段(α1α2、sα1α2和α3TC)分别插入原核或真核表达质粒,然后分别转染或与Ii共转染工程菌E.coli(BL-21)或293T细胞,经过诱导表达、亲和层析纯化和SDS-PAGE鉴定后,分别用Pull-down法观察B-FA片段与Ii结合与在细胞内的共定位特征。结果:首先,构建了3个重组原核表达质粒和4个重组真核表达质粒。原核表达的B-FA片段经亲和层析纯化可获得单一蛋白分子。其次,用Pulldown从共转染工程菌表达的蛋白分子中分别检测到Ii/B-FA-α1α2和Ii/B-FA-sα1α2,而未能检测到Ii与α3TC的结合物,而免疫印迹结果也表明该两片段是结合Ii链形成复合物的功能片段。最后,在真核表达的293T中,B-FA-α1α2具有同B-FA相同的细胞定位特性。结论:鸡B-FA-α1α2片段是结合Ii的功能片段,并保持了B-FA的细胞定位的作用。本研究结果首次提供了B-FA分子与Ii的互相作用的实验依据。
- 喻丹丹吴琼罗兰芳余为一陈芳芳
- 关键词：复合物
