孙巍
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人食管上皮细胞TAP-1和LMP-2表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的：探讨不同浓度脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）处理,体外原代培养的人正常食管上皮细胞TAP-1、LMP-2表达的变化。方法：采用Western blot和RT-PCR技术从蛋白水平和mRNA水平上分析不同浓度的DON处理24小时,体外培养的人正常食管上皮细胞TAP-1、LMP-2分子表达的变化规律及其量-效关系。结果：不同浓度（50、100、1 000、2 000μg/L）DON处理人食管上皮细胞24小时后,DON各处理组食管上皮细胞TAP-1蛋白的Western blot半定量检测结果分别为0.47±0.22、0.28±0.16、0.24±0.18和0.21±0.19,统计分析表明DON 100、1 000、2 000μg/L处理组与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。相关分析表明,在0~2000μg/L浓度范围内,随DON处理浓度增高,食管上皮细胞TAP-1蛋白的表达量逐渐降低（r=-0.595,n=4,P〈0.01）。RT-PCR结果发现,经不同浓度DON处理食管上皮细胞TAP-1mRNA的相对表达量虽然呈现先升高后降低的趋势,但与对照组相比无统计学差异。DON各处理组LMP-2蛋白的Western blot半定量检测结果分别为2.25±1.03、3.31±1.35、1.90±1.19和2.12±0.22均高于空白对照组（0.91±0.21）,其中100μg/L处理组相对表达量最高,差异有统计学意义（P〈0.05）。RT-PCR结果,DON 100μg/L处理组的LMP-2 mRNA的相对表达量最高为2.23±0.56,明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。其余处理组差异无统计学意义。结论：DON可剂量依赖地抑制体外培养的人正常食管上皮细胞的TAP-1蛋白的表达,但对TAP-1的mRNA未见显著影响。DON（100μg/L）可以促进食管上皮细胞LMP-2蛋白和mRNA表达,其余各浓度未见明显影响。
- 李月红孙巍严霞王娟王俊灵姚志刚张祥宏
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇抑制人食管上皮细胞HLA-Ⅰ分子蛋白表达被引量：1
- 2011年
- 目的探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对人正常食管上皮细胞(human leukocyteantigen-Ⅰ,HLA-Ⅰ)表达的影响。方法采用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)、免疫细胞化学染色(immunohistochemistry,IHC)以及反转录聚合酶链反应(reversetranscliption-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,从蛋白水平和mRNA水平上分析不同浓度DON处理24h后,体外培养的人正常食管上皮细胞HLA-Ⅰ表达的变化及剂量-效应关系。结果 IHC检测结果,不同浓度(50、100、1 000、2 000μg/L)DON处理24 h后,各处理组HLA-Ⅰ蛋白阳性细胞百分数均低于空白对照组,其中100、1000和2 000μg/L处理组差异有统计学意义(P<0.05);相关分析表明在0～2 000μg/L范围内,DON浓度与HLA-Ⅰ蛋白阳性细胞百分数之间存在明显的剂量-效应关系(r=-0.756,P<0.05)。FCM检测结果表明,DON在0～2 000μg/L范围内,随着浓度增加食管上皮细胞HLA-Ⅰ蛋白表达的荧光指数逐渐降低,两者之间存在明显的剂量-效应关系(r=-0.634,P<0.05)。RT-PCR结果显示,各处理组HLA-a mRNA的表达量与空白对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DON可剂量依赖地抑制体外培养的人正常食管上皮细胞HLA-Ⅰ蛋白的表达,但是对于mRNA表达无明显影响。
- 孙巍李月红严霞王娟王俊灵姚志刚
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇上皮细胞HLA抗原
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对成人食管上皮细胞TAP-1、LMP-2表达的影响
- 目的探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人正常食管上皮细胞TAP-1、LMP-2表达的影响。方法采用Western blot和RT-PCR技术从蛋白水平和mRNA水平上分析不同浓度的DON处理24h,体外培养的人正常食管上...
- 李月红孙巍严霞王娟王俊灵姚志刚张祥宏
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇
- 文献传递
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人正常食管鳞状上皮细胞抗原提呈相关分子及凋亡影响的实验研究
- 目的：脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）又称呕吐毒素（vomitoxin，VT），结构上属于单端孢菌烯族毒素，在全世界的粮食和饲料的污染均非常普遍，联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）...
- 孙巍
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇食管上皮细胞BLOTTING
- 文献传递
- 成人食管上皮细胞的原代培养方法被引量：3
- 2009年
- 探讨一种简便实用、成本低、纯度高并且成熟稳定的成人食管上皮原代培养的方法。成人食管上皮细胞来源于食管癌患者手术切除食管的正常黏膜上皮。采用组织块法,分别在DMEM/F12混合培养基和1640培养基中培养成人正常食管上皮细胞。通过直接观察、细胞形态学观察和免疫细胞化学方法观察细胞的生长情况、细胞形态学特征及鉴定所得到的细胞。结果表明,与1640培养基相比,应用DMEM/F12混合培养基具有明显的优越性。正常食管上皮细胞在DMEM/F12混合培养基中生长较好,细胞融合快,成纤维细胞污染少,可以生长成为典型的"铺路石"样,可连续培养21天,组织块最多可以被迁移4次,且细胞生长状态良好。免疫细胞化学染色鉴定证实95%的细胞具有广谱细胞角蛋白,即确定是食管上皮来源的细胞。本研究应用改良的组织块法培养的正常食管上皮细胞纯度高、产量较大,可以满足正常食管上皮细胞恶性转化方面的研究工作,而且方法简便易行、成熟稳定,是一种适合推广应用的正常食管上皮细胞培养方法。
- 孙巍李月红张祥宏严霞曹富民王俊灵王娟姚志刚
- 关键词：食管上皮细胞细胞培养
