孙刘妹
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：“十二五”国家科技计划农村领域黑龙江省研究生创新科研项目国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 产气荚膜梭菌ε毒素原核表达及其单克隆抗体的制备
- 2016年
- 以大肠杆菌表达的D型产气荚膜梭菌点突变的ε毒素蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,经过ELISA方法筛选,获得2株稳定分泌抗ε毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C3-D7和5H6-B8,单抗均为IgG1型。Western blot鉴定结果显示:2株单抗均能与重组ε毒素蛋白及D型产气荚膜梭菌ε毒素蛋白发生特异性结合。本试验为进一步研究产气荚膜梭菌ε毒素的生物学特性及建立产气荚膜梭菌的快速检测方法提供了基础。
- 王玉赛孙刘妹唐丽杰徐义刚姜艳平李一经
- 关键词：产气荚膜梭菌单克隆抗体
- 猪轮状病毒DN30209株VP4全长蛋白表达及多抗制备和鉴定被引量：2
- 2014年
- 为开展猪轮状病毒(PRV)及其VP4蛋白相关特性研究,参照Gen Bank所收录的猪轮状病毒JL94、OSU等株序列设计一对特异性引物,从实验室分离鉴定的猪轮状病毒DN30209株扩增约2 330 bp VP4全长基因,并成功构建重组质粒VP4-p MD18-T。重组质粒经测序、序列比对及分析。结果表明,DN30209株VP4全基因长2331 bp,与参考株JL94的核苷酸同源性为99.7%,氨基酸同源性为99.5%。将VP4基因连接到p GEX-6P-1原核表达载体中,构建并筛选出阳性原核表达载体重组质粒VP4-p GEX-6P-1。阳性重组质粒转化Rosetta宿主菌感受态细胞中,经IPTG诱导,获得以包涵体形式表达的重组蛋白,融合蛋白大小约为112 ku,与预期大小相符。回收、纯化并复性该蛋白,将其作为免疫原免疫大白兔,制备兔抗PRV VP4全长蛋白多克隆抗体,间接ELISA测定多抗效价到1:105,间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western blot)检测表明该多抗均可与PRV具有很好的抗原抗体反应性,为猪轮状病毒研究提供有效实验材料。
- 任晓峰窦秀静郝雅环孙刘妹魏小宁
- 关键词：猪轮状病毒原核表达抗体制备
- ST细胞表达TGEV主要蛋白的研究被引量：1
- 2018年
- 为了提高猪睾丸(swine testicular,ST)细胞的转染效率,研究猪传染性胃肠炎病毒(Porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)各蛋白的功能,试验利用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的真核表达载体pEGFP-C1转染ST细胞,对ST细胞的转染条件进行优化;然后利用优化后的转染条件将TGEV各蛋白真核表达质粒转染到ST细胞,通过免疫印迹(Western-blot)和间接免疫荧光(IFA)方法检测TGEV各蛋白在ST细胞中的表达情况。结果表明:悬浮细胞转染法(在细胞传代的同时进行转染)比贴壁细胞转染法(待细胞贴壁后再进行转染)的转染效率更高,且转染质粒与转染试剂的比例为1∶3时是转染ST细胞的最佳比例。利用优化后的转染条件将TGEV各蛋白真核表达质粒转染到ST细胞,48 h后采用IFA法检测发现TGEV各蛋白在ST细胞中成功表达,Western-blot法检测发现TGEV各蛋白在ST细胞中表达的大小与预期相符。说明优化后的转染条件可用于提高ST细胞的转染效率。
- 王丽郭田田秦越高玉孙刘妹李海滨李一经
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒免疫印迹间接免疫荧光
- MFM对猫呼吸功能的影响
- 2012年
- 猫是世界上最受喜爱的宠物之一,也是研究中枢神经系统功能、用药后呼吸系统及心血管系统的功能效应、生物反射等理想动物模型[1-3]。东北农业大学兽医外科教研室结合国内外猫的麻醉现状及猫的独特的科研价值和在人们生活中所占有的独特的地位,开发出适合于猫的复方麻醉剂(MFM,由舒泰、赛拉嗪、强痛灵等组成)[4-5],并对其麻醉后呼吸频率(RR)、血氧饱和度(SPO2)、呼末二氧化碳分压(PetCO2)、每分钟通气量(MV)和潮气量(TV)等指标进行监测,以评价该制剂对猫呼吸功能的影响。
- 邹晶蔺东启孙刘妹刁洪秀孙思超马海鹍范宏刚
- 关键词：MFM分钟通气量二氧化碳分压心血管系统动物模型
- 舒泰复合赛拉嗪和强痛灵对猫呼吸功能的影响
- 2013年
- 猫是世界上最受喜爱的宠物之一，也是研究中枢神经系统功能、用药后呼吸系统及心血管系统的功能效应、生物反射等理想动物模型。东北农业大学兽医外科教研室结合国内外猫的麻醉现状及猫的独特的科研价值和在人们生活中所占有的独特的地位，开发出适合于猫的复方麻醉剂，
- 邹晶蔺东启孙刘妹刁洪秀孙思超马海鹍范宏刚
- 关键词：中枢神经系统心血管系统
- 产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体的制备被引量：1
- 2017年
- 为了制备产气荚膜梭菌致病性毒力因子α毒素的单克隆抗体,试验采用PCR法获得α毒素基因,克隆入原核表达质粒p ET-30b,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,构建表达α毒素的重组菌BL21/p ET-30b-α;IPTG诱导重组菌表达,并进行SDS-PAGE分析,以纯化的重组α毒素蛋白为免疫原免疫Balb/c小鼠,经筛选、亚类鉴定及特异性试验检测单克隆抗体。结果表明:重组菌表达的α毒素蛋白分子质量约为43 ku;杂交瘤细胞株3C5能够稳定分泌抗α毒素单克隆抗体,单克隆抗体亚型为Ig G2a型,能够特异识别产气荚膜梭菌天然α毒素蛋白。说明制备的单克隆抗体具有良好的反应原性。
- 孙刘妹徐义刚唐丽杰王玉赛尹纪元姜艳平李一经
- 关键词：产气荚膜梭菌Α毒素单克隆抗体特异性反应原性
- 猪流行性腹泻病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2015年
- 为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清抗体的间接ELISA方法,本研究以原核表达的重组N蛋白作为检测抗原,优化ELISA反应条件,建立了PEDV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对PEDV血清检测为阳性,对猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒感染猪的阳性血清检测结果均为阴性;其批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。采用建立的ELISA方法检测了130份临床样品,其中78份血清样品为PEDV抗体阳性。表明建立的以重组N蛋白为包被抗原检测PEDV血清抗体的方法可以用于检测PEDV感染及相关的流行病学调查。
- 姜艳平姜新鹏孙刘妹赵广宇崔文唐丽杰乔薪瑗李一经
- 关键词：猪流行性腹泻病毒重组N蛋白抗体检测
