孙健
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国科学院生物物理研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗人CD3改形单链抗体的构建、表达及活性测定被引量：4
- 2000年
- CD3单抗通过多种途径有效地影响机体的免疫状态，在临床应用中具有极大的潜力。为克服鼠源单抗用于临床的局限性，拟采用抗体工程技术研制抗人CD3改形单链抗体。首先，将鼠源CD3单抗OKT3轻重链CDRs分别移植到人源抗体LS1轻链和Nd重链的框架中，经计算机模拟其空间构象，进行残基替换，确定CD3改形VL、VH_氨基酸序列，化学合成改形VL、VH_基因，将其分别插入至载体pROH80中，构建成抗人CD3改形单链抗体（scFv）基因。再将scFv基因克隆至构建的表达载体pALM中诱导表达，产物主要为包涵体。对包涵体进行变性和复性，用IMAC法纯化，FACS法测定CD3改形scFv与抗原的结合活性，显示其竞争抑制率为18%。
- 蒋欣俞小淙刘喜富张卫国黄浩旻林晴孙健陈润生黄华梁
- 关键词：CD3
- 应用统计方法确定真核基因外显子被引量：1
- 1992年
- 研究了人类基因外显子、内含子的编码结构及D值,发现外显子、内含子间有显著不同,应用“剪接法”进行外显子定位,成功率达到74.6％,表明这一方法可在实际研究中应用。
- 徐军凌伦奖沈如群孙健陈润生
- 关键词：外显子内含子真核基因
- 抗人CD3单链抗体与改形单域抗体的表达被引量：9
- 1996年
- 设计并化学合成含有适当酶切位点及连接肽的寡核苷酸序列,与一定的背景载体连接并改造成适用于单链抗体表达的载体:外分泌型pWAI80和融合蛋白型pROH80从分泌抗人CD3单克隆抗体的杂交瘤细胞UCHT1中,经PCR扩增出轻、重链可变区基因V_H和V_K,并插入上述表达载体中构建成单链抗体基因.通过对鼠OKT3结合位点的结构模拟,并比较人、鼠抗体家族性保守序列,设计出改形OKT3的基因序列.化学法部分合成8个寡核苷酸片段,应用重叠PCR技术扩增出完整改形重链基因V_H,并克隆、酶切和测序鉴定.将所克隆V_H基因插入表达载体pCOMB3和 pGEX-4T-1中进行表达.经 IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和 Western blot分析以及 ELISA检测,结果发现分泌型表达产物及 M13基因Ⅲ-V_H改形单域抗体融合蛋白具有与CD3单抗竞争抑制的活性;而融合型单链抗体及改形单域抗体表达产物主要以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的 30％左右.
- 刘喜富萧飒顾征王勇陈艾林晴张卫国黄华梁孙健陈润生沈倍奋陈兴
- 关键词：CD3单链抗体分子设计基因表达
