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高致病性PRRSV GD疫苗株与野毒株双重荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立被引量：4: 2012年; 为建立一种能够快速鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GDr180疫苗株与GD野毒株的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究在PPRSV的Nsp2基因和Orf7基因区域分别设计不同荧光标记的MGB探针及特异性引物。这两种MGB探针能够分别特异结合GD野毒株和GDr180疫苗株。通过对PRRSV培养液、感染猪血清和组织样品检测证明了该方法的可行性;采用双重实时荧光定量RT-PCR方法检测PRRSV GDr180疫苗株和GD强毒株时敏感性分别达到19.4拷贝/μL和34.2拷贝/μL;该方法与PRRSV其他8个病毒株和猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型和猪细小病毒不发生交叉反应,表明该方法具有良好的特异性;因此可以用于PRRSV GDr180疫苗株与野毒株的鉴别检测。; 张文利孙丰廷王海光刘灿英聪宁宜宝

HP-PRRSV GD株强弱毒株抗原在感染猪体内的动态分布研究: 高致病性猪繁殖与呼吸综合征(Highly pathogenic porcine reproductive andrespiratory syndrome,HP-PRRS)是由美洲型PRRSV高致病性变异毒株引起的一种急性...; 孙丰廷; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因弱毒疫苗免疫剂量

高致病性猪繁殖与呼吸综合征强弱毒株在猪体内的抗原动态分布研究: 根据GenBank公布的PRRSV美洲株基因组序列，设计筛选1对特异性引物，用RT-PCR检测接种高致病性PRRSV强弱毒株后不同时期的各个组织样品，分析猪体内病毒的动态分布情况。结果显示，强弱毒株在感染猪体内组织器官分...; 孙丰廷毕丁仁宁宜宝; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株抗原基因

高致病性猪繁殖与呼吸综合征GD强弱毒株感染对猪外周血淋巴细胞亚群的影响: 2015年; 为了从细胞水平探讨PRRSV GD强毒株和PRRSV弱毒疫苗接种仔猪后对其外周血淋巴细胞亚群的影响,运用血常规技术和流式细胞技术分析了猪体外周血淋巴细胞亚群的动态变化。将30日龄20头SPF猪分成3组,分别感染HP-PRRSV GD第5代强毒株、GDr180弱毒疫苗株及留作对照。于感染后第0、3、7、10、14、21、28及35天采血进行外周血淋巴细胞亚群测定,分析淋巴细胞亚群的变化。结果表明:HP-PRRSV GD强毒株感染可导致白细胞、淋巴细胞数量、单核细胞、粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞、Tm细胞、和γδT细胞数量的下降;而弱毒疫苗GDr180株免疫则表现为白细胞、淋巴细胞、单核细胞、引起粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞和Tm细胞的上升,对γδT细胞的影响不大;阴性对照组在整个检测期间各种细胞基本上保持稳定状态。从实验结果可以看出:与HP-PRRSV GD强毒株破坏免疫细胞不同,PRRSV弱毒疫苗GDr180株免疫接种能刺激猪免疫细胞增殖,给试验猪提供良好的免疫反应。; 张文利王海光孙丰廷刘灿英聪宁宜宝; 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株野毒株外周血淋巴细胞亚群

HP-PRRSV GD株及传代致弱毒株GDr180株在仔猪体内的动态分布研究: 本试验旨在利用实时荧光定量RT-PCR技术与免疫组织化学染色技术对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)GD株及细胞传代致弱毒株GDr180株在仔猪体内动态分布的规律和特点进行研究，比较PRRSV GD强弱毒...; 刘灿孙丰廷宁宜宝张文利王海光毕丁仁; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病原鉴定

HP-PRRSV GD株及传代致弱毒株GDr180株在仔猪体内的动态分布研究: 引言/目的本试验旨在利用实时荧光定量RT-PCR技术与免疫组织化学染色技术对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine reproductive and respiratory s...; 刘灿孙丰廷宁宜宝张文利王海光毕丁仁

高致病性猪繁殖与呼吸综合征强弱毒株在猪体内的抗原动态分布研究: 引言根据GenBank公布的PRRSV美洲株基因组序列,设计筛选1对特异性引物,用RT-PCR检测接种高致病性PRRSV强弱毒株后不同时期的各个组织样品,分析猪体内病毒的动态分布情况。结果显示,强弱毒株在感染猪体内组织器...; 孙丰廷毕丁仁宁宜宝

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立: 2012年; 根据GenBank公布的24株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株和5株PRRSV经典毒株的保守区基因序列,使用PrimerExpress 3.0软件设计并合成实时荧光定量PCR(Real-timeFluorescent Quantitative PCR,Real-time FQ-PCR)用引物和探针,建立了Real-time FQ-PCR检测方法以鉴别检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒。用建立的检测方法对已定量的10倍倍比稀释的质粒pGET-258为标准品进行检测,并与常规PCR进行比较。结果显示,该Real-time FQ-PCR方法敏感度可达1.5个拷贝,比常规PCR敏感度高100倍,且批内和批间重复性检测结果的变异系数均小于2%。用该方法与常规PCR方法及病毒分离方法对18份临床样品进行对比检测,显示该方法灵敏度高、成本低,并且能够对样品中病毒进行定量,为高致病性猪繁殖与呼吸综合征的快速鉴别诊断提供了有效的技术手段。; 刘灿孙丰廷宁宜宝张文利王海光英聪陈坚毕丁仁; 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征实时荧光定量PCR TAQMAN探针

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孙丰廷