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高致病性PRRSV GD疫苗株与野毒株双重荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立被引量：4: 2012年; 为建立一种能够快速鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GDr180疫苗株与GD野毒株的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究在PPRSV的Nsp2基因和Orf7基因区域分别设计不同荧光标记的MGB探针及特异性引物。这两种MGB探针能够分别特异结合GD野毒株和GDr180疫苗株。通过对PRRSV培养液、感染猪血清和组织样品检测证明了该方法的可行性;采用双重实时荧光定量RT-PCR方法检测PRRSV GDr180疫苗株和GD强毒株时敏感性分别达到19.4拷贝/μL和34.2拷贝/μL;该方法与PRRSV其他8个病毒株和猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型和猪细小病毒不发生交叉反应,表明该方法具有良好的特异性;因此可以用于PRRSV GDr180疫苗株与野毒株的鉴别检测。; 张文利孙丰廷王海光刘灿英聪宁宜宝

一株高致病性繁殖与呼吸综合征病毒的全基因序列测定与遗传变异分析: 引言/目的为了调查我国近年来流行的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的变异情况与分子流行特征.材料方法利用RT-PCR方法对2011年年中从广东发病猪场分离到的1株PRRSV GD-2011株进行了...; 刘灿英聪龚文芝宁宜宝

检测污染兽用疫苗14种支原体PCR方法的建立及应用被引量：4: 2014年; 为完善兽用疫苗中支原体污染的检测技术,本研究对污染生物制品的14种常见支原体基因组进行分析,设计一对可以同时检测这14种支原体的通用引物,建立兽用疫苗中支原体污染的PCR检测方法。应用该方法对10种兽用活疫苗的61批次和10种细胞系的21份传代细胞样品进行支原体污染的检测,并与培养法、DNA荧光染色法及成品的支原体PCR检测试剂盒相比较,除成品的支原体PCR检测试剂盒的检测结果不同之外,其他3种方法的检测结果均相同。但培养法耗时长,DNA荧光染色法操作复杂,成品的支原体PCR检测试剂盒只能检测5种污染细胞的常见支原体,出现漏检情况,而本研究建立的PCR检测方法快速、准确,可以为今后兽用疫苗的支原体污染检测工作提供参考。; 英聪王海光刘灿沈青春毕丁仁宁宜宝; 关键词：兽用疫苗 PCR检测

高致病性猪繁殖与呼吸综合征GD强弱毒株感染对猪外周血淋巴细胞亚群的影响: 2015年; 为了从细胞水平探讨PRRSV GD强毒株和PRRSV弱毒疫苗接种仔猪后对其外周血淋巴细胞亚群的影响,运用血常规技术和流式细胞技术分析了猪体外周血淋巴细胞亚群的动态变化。将30日龄20头SPF猪分成3组,分别感染HP-PRRSV GD第5代强毒株、GDr180弱毒疫苗株及留作对照。于感染后第0、3、7、10、14、21、28及35天采血进行外周血淋巴细胞亚群测定,分析淋巴细胞亚群的变化。结果表明:HP-PRRSV GD强毒株感染可导致白细胞、淋巴细胞数量、单核细胞、粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞、Tm细胞、和γδT细胞数量的下降;而弱毒疫苗GDr180株免疫则表现为白细胞、淋巴细胞、单核细胞、引起粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞和Tm细胞的上升,对γδT细胞的影响不大;阴性对照组在整个检测期间各种细胞基本上保持稳定状态。从实验结果可以看出:与HP-PRRSV GD强毒株破坏免疫细胞不同,PRRSV弱毒疫苗GDr180株免疫接种能刺激猪免疫细胞增殖,给试验猪提供良好的免疫反应。; 张文利王海光孙丰廷刘灿英聪宁宜宝; 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株野毒株外周血淋巴细胞亚群

HP-PRRSV GD株及传代致弱毒株GDr180株在SPF仔猪体内的动态分布研究: 本研究旨在利用实时荧光定量PCR技术对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GD株及其传代致弱毒株GDrl80株在SPF仔猪体内动态分布的规律和特点进行研究。笔者将GD株和GDrl 80株分别人工感染35日龄SPF仔猪，后于3d...; 刘灿英聪宁宜宝张磊王海光陈坚; 关键词：仔猪荧光定量PCR 动态监测

支原体污染的检测及鉴定方法研究进展被引量：5: 2012年; 自1956年国外学者第一次检测到细胞培养物中存在支原体污染以来,这个世界性问题持续了半个多世纪。对于生物制品中支原体污染的检测方法多种多样,但尚无统一的内控标准,而建立一种快速、准确的方法用于支原体污染的检测,可以有效地减少和预防支原体污染,从而提高生物制品的纯净性。本文对支原体污染的几种常见检测及鉴定方法进行综述,包括DNA荧光染色法、PCR、IFA与ELISA等,以期为支原体污染的检测及鉴定研究提供参考。; 英聪刘灿王海光宁宜宝毕丁仁

应用PCR法检测生物制品中支原体污染: 支原体(Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁的最小原核细胞型微生物，它结构简单，大小介于病毒和细菌之间。自1956年第一次检测到细胞培养物中存在支原体污染以来，支原体污染细胞培养物这个世界性问题持续了半个多世纪，兽用活...; 英聪; 关键词：生物制品疫苗质量 PCR检测荧光染色法

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立: 2012年; 根据GenBank公布的24株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株和5株PRRSV经典毒株的保守区基因序列,使用PrimerExpress 3.0软件设计并合成实时荧光定量PCR(Real-timeFluorescent Quantitative PCR,Real-time FQ-PCR)用引物和探针,建立了Real-time FQ-PCR检测方法以鉴别检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒。用建立的检测方法对已定量的10倍倍比稀释的质粒pGET-258为标准品进行检测,并与常规PCR进行比较。结果显示,该Real-time FQ-PCR方法敏感度可达1.5个拷贝,比常规PCR敏感度高100倍,且批内和批间重复性检测结果的变异系数均小于2%。用该方法与常规PCR方法及病毒分离方法对18份临床样品进行对比检测,显示该方法灵敏度高、成本低,并且能够对样品中病毒进行定量,为高致病性猪繁殖与呼吸综合征的快速鉴别诊断提供了有效的技术手段。; 刘灿孙丰廷宁宜宝张文利王海光英聪陈坚毕丁仁; 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征实时荧光定量PCR TAQMAN探针

高致病性猪繁殖与呼吸综合征强毒株与弱毒疫苗株对仔猪呼吸系统的致病特性与病毒分布比较研究: 引言/目的本研究旨在对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,HP-PRRSV)强毒GD株及其传代...; 刘灿英聪张文利王海光宁宜宝

支原体污染的实验室检测及鉴定方法: 支原体污染造成的危害非常广泛，其影响涉组织培养的细胞、鸡胚及其生产的疫苗，应当引起高度重视。本文对支原体污染的几种常见检测及鉴定方法进行综述，包括DNA荧光染色法、PCR、IFA、ELISA等，以其为支原体污染的检测研究...; 英聪刘灿宁宜宝王海光; 关键词：荧光染色法免疫疫苗

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英聪