姚广新
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市基础研究重大（重点）项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 雄激素/雄激素受体对小鼠附睾Caveolin-1表达调控机制的研究被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨雄激素和雄激素受体(AR)对小鼠附睾Caveolin-1表达的调控机制。方法:通过搜索前期染色体免疫共沉淀-测序(ChIP-seq)实验得到的小鼠附睾AR结合位点的数据库,寻找Caveolin-1基因相关联的AR结合位点。分别取正常小鼠、睾丸阉割小鼠以及睾丸阉割后补充外源雄激素的小鼠的附睾组织,一方面,抽提总RNA,利用逆转录PCR以及逆转录荧光定量PCR检测Caveolin-1基因的mRNA表达水平;另一方面,利用AR抗体进行染色体免疫共沉淀(ChIP),采用ChIP-PCR以及ChIP-qPCR的方法,检测Caveolin-1基因相关联的AR结合位点在体内与AR的结合情况。结果:从小鼠附睾AR结合位点的数据库中找到两个Caveolin-1相关联的AR结合位点,均位于第二内含子区域。睾丸阉割后,Caveolin-1基因的表达显著升高(P<0.05),表达量是对照组的(1.8±0.17)倍;两个AR结合位点的富集倍数分别由正常状态下的(13.5±1.47)倍和(10.5±1.03)倍降至(1.05±0.17)倍和(1.4±0.14)倍(P<0.01)。补充雄激素后,Caveolin-1基因的表达又降至正常水平(P<0.05),为正常对照组的(1.03±0.06)倍。两个AR结合位点的富集倍数则分别升至(16.4±2.6)倍和(10.0±0.92)倍(P<0.01)。结论:Caveolin-1在小鼠附睾内是AR的一个直接靶基因,其表达受雄激素的负调控。该研究为理解雄激素/AR在小鼠附睾内的调控网络提供了新的视角。
- 胡双纲姚广新孙赟
- 关键词：雄激素雄激素受体CAVEOLIN-1
- 新型抗结核分枝杆菌药物筛选模型的建立被引量：2
- 2011年
- 为建立基于酶水平和细胞水平的新型抗结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)药物的筛选模型,以M.tuberculosis H37Rv基因组DNA为模板,PCR特异性扩增异柠檬酸裂解酶(ICL)基因,构建表达载体,在E.coli BL21(DE3)中高效表达,使用N i2+亲和层析柱纯化重组ICL,检测其活性。优化ICL酶反应条件,考察待筛选样品溶剂对酶活性的影响,建立ICL抑制剂酶水平筛选模型;考察与优化耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegma)在以乙酸盐为唯一碳源的培养基中的生长状况,建立基于M.sm egma的乙醛酸代谢途径抑制剂的细胞水平筛选模型;利用上述2种筛选模型对1 060种可能具有拮抗活性的微生物代谢样品进行初筛和复筛,两者筛选结果正相关性较好。
- 张磊磊由鹏飞姚广新侯爵张怡轩
- 关键词：结核分枝杆菌耻垢分枝杆菌
- 人HoxA10基因真核表达载体构建和表达产物的鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的:克隆人子宫内膜容受性标志分子HoxA10基因的cDNA,转入真核细胞载体,并在293T细胞中进行表达和鉴定。方法:应用RT-PCR法从人子宫内膜组织中扩增HoxA10基因的cDNA编码区序列,将PCR产物克隆至pCMV-HA真核表达载体中,测序鉴定该载体。以LipofectamineTM2000将该载体转染入293T细胞中,Western blotting检测HoxA10蛋白的表达。结果:PCR扩增出的人HoxA10基因cDNA正确克隆到了pCMV-HA载体,成功构建了pCMV-HA-HoxA10重组载体;将其转染入293T细胞,用HoxA10和HA抗体进行Western blotting,均检测到了融合蛋白的表达。结论:携带有HA蛋白标签的人HoxA10基因的真核表达载体pCMV-HA-HoxA10克隆及表达成功,为进一步研究HoxA10与其它蛋白质的相互作用以及建立HoxA10的荧光素酶报告基因分析系统奠定了基础。
- 胡双纲姚广新赵晓明孙赟高玉平
- 关键词：HOXA10基因真核表达载体293T细胞基因表达
- 镉暴露对人精子组蛋白甲基化影响的研究
- 目的 组蛋白甲基化是表观遗传调控的重要方式.成熟精子中大部分的组蛋白被鱼精蛋白替换,仅仅"残留"少数的核小体.近年来的研究表明,人和小鼠精子上的核小体主要分布在与发育相关的DNA区域,包括印记基因、miRNA簇及HOX基...
- 茹彦飞吕瑞途姚广新张永莲蓝斐施惠娟
- Intein介导的重组人AR DBD的原核可溶性表达、纯化及活性鉴定被引量：2
- 2011年
- 雄激素受体通过DNA结合域与效应元件结合发挥作用,在以往的研究中多采用与GST或Protein A融合的方式对雄激素受体的DNA结合域(AR DBD)进行重组表达,但获得无融合标签的纯AR DBD的操作非常繁琐。现借助内含肽介导的自剪切作用经一步亲和层析得到纯度较高的无融合标签的AR DBD,以利于对其性质和功能的研究。通过PCR方法扩增了编码人雄激素受体520～644位氨基酸的核苷酸序列,将该序列克隆入pTWIN1融合表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后对诱导温度及IPTG浓度进行优化,重组蛋白几乎全部可溶表达。将可溶性部分吸附到几丁质亲和层析柱上,通过pH诱导的内含肽自剪切作用释放出不含融合标签的重组人ARDBD蛋白,凝胶阻滞分析证明该蛋白只特异性结合保守的雄激素响应元件(ARE),具备正常的生物学活性。
- 姚广新张怡轩胡双纲
- 关键词：DNA结合域内含肽
