龙小纯
- 作品数：20 被引量：43H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫真核表达重组质粒pcDNA3-Sj26的构建及其在树突状细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 本研究构建日本血吸虫2 6kDa谷胱苷肽转移酶(Sj2 6 )基因的真核表达重组质粒(pcDNA3 Sj2 6 ) ,并探讨其在树突状细胞(DC)中的表达。采用PCR扩增Sj2 6基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNA3中,阳性克隆经双酶切、PCR扩增鉴定后,双脱氧链末端终止法进行序列测定。用脂质体介导DNA转染法将pcDNA3- Sj2 6转染DC ,G4 18加压筛选获得阳性克隆并传代培养,用RT PCR检测Sj2 6mRNA的转录水平,用SDS- PAGE、Westernblot和间接免疫荧光法检测Sj2 6蛋白在DC中的表达。结果PCR扩增得到特异的Sj2 6基因片段,双酶切及PCR鉴定表明获得正确的pcDNA3 -Sj2 6重组质粒;测序结果表明,核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank报道的Sj2 6的一致性均为99% ;RT PCR结果显示pcDNA3- Sj2 6转染的DC中有Sj2 6基因mRNA的表达,SDS -PAGE和Westernblot、间接免疫荧光法显示pcDNA3- Sj2 6转染的DC中有Sj2 6的表达。结果证实构建的真核表达重组质粒pcDNA3- Sj2 6成功的转染至DC中并在DC中获得表达。
- 沈定文李雍龙刘文琪龙小纯刘娟
- 关键词：日本血吸虫真核表达重组质粒树突状细胞基因转染免疫功能
- 一氧化氮对日本血吸虫童虫细胞毒作用的研究被引量：15
- 2002年
- 目的研究一氧化氮(NO)对日本血吸虫童虫的杀伤作用.方法用LPS或LPS+IFN-γ诱导离体的小鼠腹腔巨噬细胞,使其产生NO;加入机械断尾的日本血吸虫童虫,测定48 h内童虫的死亡率.为进一步证实NO对童虫的杀伤作用,用诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的抑制剂LNNA(Nω-nitro-Larginine)抑制NO的产生,与未加抑制剂组比较,观察童虫死亡率的变化.结果LPS或LPS+IFN-γ均能有效诱导巨噬细胞产生NO,2.0×105细胞产生的NO浓度分别为(109.96±3.70)μmol/L和(113.50±7.38)μmol/L,其相应的杀虫率分别达91.07%±2.92%和96.86%±2.36%.加入2 mmol/L的L-NNA后,巨噬细胞的NO产量明显降低,其杀虫率也相应减低.结论巨噬细胞诱生的NO对日本血吸虫童虫具杀伤作用.
- 龙小纯李雍龙方正明
- 关键词：一氧化氮日本血吸虫童虫细胞毒作用杀伤作用杀虫率
- Sj26基因转染的树突状细胞对日本血吸虫感染的免疫保护机制研究被引量：4
- 2007年
- 目的探讨日本血吸虫Sj26基因转染的树突状细胞(DC)对日本血吸虫感染的保护性免疫作用机制。方法BALB/c小鼠48只随机均分4组,于小鼠耳廓分别注射细胞悬液(浓度1×106/ml)0.2 ml,A组注射Sj26基因转染的DC、B组注射质粒pcDNA3转染的DC、C组注射未处理的DC,D组注射RPMI-1640。共免疫3次,间隔2周。末次免疫后2周,每鼠经皮肤感染40±2条尾蚴。分别于免疫前、末次免疫后第2周以及攻击感染后第6周采血,ELISA法检测血清IgG抗体、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平,免疫印迹法(Western blot)检测血清特异性抗Sj26 IgG抗体,双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经伴刀豆球蛋白A(ConA)和可溶性虫卵抗原(SEA)刺激后培养上清中IFN-γ和IL-4含量。噻唑蓝法(MTT)检测脾淋巴细胞增殖情况。结果A组血清IgG抗体水平(吸光度A491值),免疫后(A491=0.117)显著高于免疫前(A491=0.049)(t=2.73,P<0.05),也显著高于B组(A491=0.061)和C组(A491=0.058)(t值为2.48和2.56,P<0.05)。A组血清能特异识别血吸虫成虫抗原Mr 26 000蛋白。血清IL-4水平,各组免疫前、后均无明显变化。IFN-γ水平,A组血清免疫后为(101.4±4.9)pg/ml,明显高于免疫前的(15.0±1.9)pg/ml(t=5.80,P<0.01),亦高于免疫后的B组(40.1±3.1)pg/ml和C组(35.6±1.2)pg/ml(t值为3.98和4.13,P<0.01)。脾淋巴细胞经ConA刺激诱生的IFN-γ,A组(171.2 pg/ml)显著高于D组(91.0 pg/ml)(t=4.25,P<0.01)。经SEA刺激诱生的IFN-γ,A组(70.8 pg/ml)显著高于D组(49.7 pg/ml)(t=2.83,P<0.01)。经ConA刺激诱生的IL-4水平,A组(79.7 pg/ml)明显低于D组(125.2 pg/ml)(t=4.40,P<0.01)。经SEA刺激诱生的IL-4,A组(50.7 pg/ml)明显低于D组(70.5 pg/ml)(t=2.62,P<0.05)。A组脾淋巴细胞经ConA和SEA刺激后的刺激指数分别为4.1和2.82,均高于其他各组(与D组比较,t=3.20,P<0.01和t=2.15,P<0.05)。结论Sj26基因转染的树突状细胞免疫小鼠主要诱导Th1型免疫应答。
- 沈定文罗金萍李雍龙刘文琪龙小纯
- 关键词：日本血吸虫树突状细胞基因转染保护性免疫
- 紫外线减活日本血吸虫尾蚴疫苗免疫小鼠肺部iNOS的表达及其与免疫保护关系的研究
- 2004年
- 目的 研究紫外线照射减活日本血吸虫尾蚴疫苗免疫小鼠后肺部诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的动态表达及其与保护性免疫的关系。 方法 用紫外线照射减活尾蚴疫苗免疫小鼠,30 d后用尾蚴攻击感染。于感染后第4 d、9 d取免疫小鼠和未免疫小鼠肺脏,用RT-PCR半定量的方法检测各组小鼠肺部iNOS的转录水平;用免疫组化方法确定iNOS在肺部的蛋白表达定位。 结果 正常小鼠肺部无iNOS转录和蛋白表达。免疫小鼠和未免疫小鼠感染血吸虫尾蚴后第4 d肺部iNOS有较高水平的转录表达。感染后第9 d,免疫组小鼠iNOS的表达较第4 d下降,而未免疫组小鼠肺部iNOS的表达消失。免疫组化结果表明,免疫组小鼠肺部炎症病灶细胞中存在iNOS的表达。 结论 移行到肺部的血吸虫童虫能诱导肺部表达iNOS,紫外线减活尾蚴疫苗能促使小鼠肺组织较长时间表达iNOS,iNOS在肺部的持续表达可能与该疫苗使宿主产生的免疫保护力有关。
- 龙小纯李雍龙方正明
- 关键词：INOS
- 小鼠感染日本血吸虫后iNOS的表达及NO介导的杀虫作用研究被引量：2
- 2005年
- 目的研究小鼠在感染日本血吸虫后肺部诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的动态表达及一氧化氮(NO)对童虫的杀伤作用。方法在感染日本血吸虫后不同时间点剖杀小鼠并取其肺组织,用半定量RTPCR的方法检测肺部iNOS的转录水平;用NOS的抑制剂AG(Aminoguanidine,氨基胍)处理感染小鼠,比较处理组与对照组虫荷的高低以确定NO对童虫的杀伤作用。结果未感染小鼠肺部无iNOS转录表达,感染后第4d肺部iNOS有较高水平的转录表达,第9d表达消失;AG处理小鼠的虫荷较未处理组高(P<0.05)。结论移行到肺部的童虫能诱导肺组织表达iNOS,由iNOS产生的NO能对童虫发挥杀灭作用。
- 龙小纯刘璋刘文琪李雍龙
- 关键词：日本血吸虫童虫INOSRT-PCR
- 日本血吸虫Sj26基因转染对树突状细胞功能的影响被引量：2
- 2005年
- 目的探讨日本血吸虫Sj26基因转染对树突状细胞(DC)功能的影响。方法利用脂质体介导的基因转染技术将日本血吸虫Sj26基因转染DC,流式细胞术(FACS)检测Sj26基因转染的DC摄取抗原的能力,混合淋巴细胞反应检测Sj26基因转染的DC对同种异体T淋巴细胞的刺激作用。结果Sj26基因转染后Sj26蛋白在DC中高表达,摄取抗原的能力降低,与pcDNA3转染的DC和未转染的DC相比,Sj26基因转染的DC能明显刺激混合淋巴细胞反应。结论Sj26基因转染DC后能促进DC的活化,增强DC的生物学活性。
- 沈定文李雍龙刘文琪龙小纯刘娟
- 关键词：树突状细胞基因转染日本血吸虫SJ26
- 感染血吸虫小鼠肝脏中一氧化氮合酶动态探讨被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨感染血吸虫小鼠肝脏中一氧化氮合酶 (iNOS)与热休克蛋白 (HSP) - 70表达的动态变化。方法 日本血吸虫尾蚴经皮肤感染小鼠后第 0 ,2 1,2 8,38和 4 5d分别取其肝脏 ,用RT PCR半定量法检测iNOS表达的动态变化 ;用Western blot方法检测HSP 70表达的动态变化。结果 感染后第 2 1d起能检测到iNOS的表达 ,感染后第 38d达峰值 ,第 4 5d时表达水平有所下降 ;HSP 70在未感染小鼠肝脏内有微弱的表达 ,在感染后 2 1d的肝脏其表达显著增强 ,38d达峰值 ,4 5d后表达下降。结论 血吸虫感染可诱导iNOS和HSP 70在肝脏的协同表达 。
- 刘文琪龙小纯李雍龙
- 关键词：INOSHSP-70日本血吸虫肝脏
- Ⅱ类人白细胞抗原等位基因与晚期肝脾型日本血吸虫病的相关性研究被引量：3
- 2005年
- 目的 探讨Ⅱ类人白细胞抗原 (HLA Ⅱ )基因多态性与晚期肝脾型日本血吸虫病的相关性。 方法 用聚合酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)技术对 46例晚期肝脾型日本血吸虫病患者 (实验组 )和 43例慢性日本血吸虫病患者 (对照组 )HLA DRB1、DPA1、DQA1和DQB14个基因位点的等位基因进行分型。对两组间等位基因频率的差异进行 χ2 检验。 结果 实验组HLA DRB1 0 4、DPA1 0 10 3、DQA1 0 60 1和DQB1 0 2 0 1等位基因频率明显高于对照组 ,而HLA DQA1 0 5 0 1和DQB1 0 60 1等位基因频率明显低于对照组。 结论 HLA DRB1 0 4、DPA1 0 10 3、DQA1 0 60 1和DQB1 0 2 0 1等位基因 ,因其与晚期肝脾型日本血吸虫病呈显著的正相关 (P <0 0 5 )而可能是该病的遗传易感基因 ,而HLA DQA1 0 5 0 1和DQB1 0 60 1等位基因与对该病存在抵抗性有关。
- 章俊华刘文琪李雍龙龙小纯
- 关键词：DQB1DQA1日本血吸虫病晚期等位基因频率人白细胞抗原
- 诱导型一氧化氮合酶在感染日本血吸虫小鼠肝组织中的表达被引量：4
- 2004年
- 目的 研究诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在感染日本血吸虫小鼠肝脏中的动态表达。 方法 日本血吸虫尾蚴经皮肤感染NMRI小鼠 ,感染后第 0、2 1、2 8、3 8和 45天取其肝组织 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)半定量法检测i NOS转录水平的动态表达 ,用蛋白质印迹法 (Westernblotting)测定表达的蛋白变化 ,并用免疫组化方法确定iNOS在肝组织中的表达定位。 结果 RT PCR结果显示 ,未感染小鼠肝组织中未见iNOS的表达 ,感染后第 2 1天可见到iNOS在肝组织中的转录表达 ,第 2 8天明显表达 ,第 3 8天达峰值 ,第 45天下降 ,与第 3 8天相比 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。Westernblotting结果表明 ,感染后第 3 8天和第 45天分别可见到iNOS的表达。间接荧光抗体试验结果表明 ,iNOS主要在肝虫卵肉芽肿细胞中表达。 结论 日本血吸虫能诱导宿主肝组织iNOS的动态表达 ,肝组织中的虫卵可能与iNOS表达有关。
- 龙小纯李雍龙Andreas Ruppel
- 关键词：诱导型一氧化氮合酶日本血吸虫小鼠INOS肝组织
- 一氧化氮诱导日本血吸虫成虫原代培养细胞凋亡的研究被引量：9
- 2004年
- 目的 探讨NO诱导的日本血吸虫细胞凋亡的细胞毒作用。 方法 用不同剂量NO供体—硝普钠 (SNP)处理日本血吸虫成虫原代培养细胞 ,8h后用Annexin V FITC标记原代培养细胞 ,荧光显微镜下观察细胞的凋亡情况。结果 SNP能明显诱导日本血吸虫原代培养细胞发生凋亡 ,且细胞凋亡的发生率具剂量依赖性 ,3 0 0 μmol/LSNP处理组细胞的凋亡发生率明显高于 10 0 μmol/LSNP处理组。 结论 NO能诱导日本血吸虫细胞凋亡 ,NO对血吸虫童虫的细胞毒作用可能与此有关。
- 刘文琪龙小纯李雍龙
- 关键词：一氧化氮原代培养细胞细胞凋亡
