黄皑雪
- 作品数：27 被引量：29H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
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- 大鼠成骨细胞特异单链DNA适配体的筛选与鉴定
- 2015年
- 目的:筛选能特异识别大鼠成骨细胞的单链DNA(ssDNA)适配体并对其进行鉴定。方法:利用完整细胞为靶标的消减细胞SELEX技术筛选大鼠成骨细胞特异ssDNA适配体,通过荧光显微镜、流式细胞术、基因克隆测序、MEME在线软件和RNA structure分析软件,分析适配体的一、二级结构,并对筛选得到的适配体进行鉴定。结果:经过6轮消减细胞SELEX筛选,荧光显微镜鉴定文库已富集;通过流式细胞术检测及测序分析,得到2条适配体L54和L66与大鼠成骨细胞特异结合,其平衡解离常数分别为494.4±133.3和511.4±160.7 nmol/L。结论:筛选获得特异识别大鼠成骨细胞的ssDNA适配体。
- 李慧丁红梅李洁黄皑雪苏雪婷梁超张令强赵强李少华邵宁生
- 关键词：大鼠成骨细胞DNA文库适配体
- 一种利用miR-146a为标志物的肝癌患者血清检测试剂盒及方法
- 本发明公开了属于分子生物医学技术领域的一种利用miR-146a为标志物的肝癌患者血清检测试剂盒及方法。本发明设计miR-146a特异性的引物，采用定量PCR的方法检测正常人血清、肝癌患者血清中miR-146a的含量变化，...
- 邵宁生李慧李少华李洁王玮丁红梅黄皑雪苏雪婷赵强
- 文献传递
- 一种特异识别大鼠成骨细胞的寡核苷酸配基的序列和应用
- 本发明公开了属于分子生物医学技术领域的一种特异识别大鼠成骨细胞的寡核苷酸配基L54的序列和应用。本发明设计L54特异性的序列，采用5’端或3’端修饰、标记(如FITC、生物素或者地高辛)的方法检测L54能够特异识别大鼠成...
- 邵宁生李慧李少华丁红梅李洁黄皑雪苏雪婷赵强
- 文献传递
- 一种利用miR-152作为动脉粥样硬化血清标志物及检测试剂盒
- 本发明公开了属于分子生物医学技术领域的一种利用miR-152为标志物的动脉粥样硬化血清检测试剂盒及方法。本发明设计miR-152特异性的引物，采用定量PCR的方法检测正常人血清、动脉粥样硬化患者血清中miR-152的含量...
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- 文献传递
- 用于未纯化蛋白样品核酸适配体筛选的Western印迹-SELEX筛选技术的建立
- 2014年
- 目的:建立一种基于Western印迹的指数式富集的配体系统进化(SELEX)技术,用于未纯化蛋白样品核酸适配体筛选。方法:将目的蛋白经SDS-PAGE分离后转移到PVDF膜上,用生物素标记的ss DNA与PVDF膜上的蛋白共同孵育,获得能与靶蛋白特异结合的适配体,最后通过生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统、基因克隆测序、MEME在线软件和RNAstructure软件分析适配体的一、二级结构,并对筛选得到的适配体进行鉴定。结果:经过4轮筛选,获得了能特异识别靶蛋白而不识别无关蛋白的适配体,原库Gp45则与上述蛋白均没有结合。结论:建立了Western印迹-SELEX技术,可用于未纯化蛋白样品核酸适配体筛选。
- 李慧赵强梁超丁红梅李洁黄皑雪苏雪婷张令强李少华邵宁生
- 关键词：WESTERN印迹电泳适配体
- LncRNA-GAS5抑制miR-21介导的非完全匹配靶mRNA降解被引量：13
- 2017年
- LncRNA-GAS5作为miR-21的"分子海绵",通过"吸收"miR-21从而调控miR-21对靶基因的抑制.此外,miR-21直接调控非完全匹配靶基因PTEN和TPM1的表达.我们首先在HEK293T和HeLa细胞中确认,miR-21通过碱基互补配对调控非完全匹配靶基因PTEN和TPM1的蛋白表达,但不影响PTEN和TPM1mRNA的水平.此外,过表达miR-21后,qRT-PCR检测PTEN和TPM1mRNA的半衰期,发现它们的半衰期显著缩短,miR-21加速PTEN和TPM1mRNA的降解.通过转染lncRNA-GAS5的过表达质粒,发现lncRNA-GAS5竞争性地与miR-21结合能够延长PTEN和TPM1mRNA的半衰期,而miR-21与lncRNA-GAS5碱基互补配对结合后,又对lncRNA-GAS5存在调节作用,减弱lncRNA-GAS5的稳定性并加速lncRNA-GAS5的降解.LncRNA-GAS5作为miR-21的"分子海绵"能够抑制miR-21对非完全匹配靶mRNAPTEN和TPM1的降解,同时,miR-21与lncRNA-GAS5结合后又存在对lncRNA-GAS5的反馈调节,这些相互作用机制的发现有助于了解lncRNA、miRNA、mRNA之间这个复杂又精细的调控环路.
- 郑伟董洁李少华丁红梅李慧黄皑雪夏伟白琛俊郭晓华李达耿介李洁邵宁生
- 关键词：MIR-21PTEN
- 一种利用miR-145为标志物的肝癌患者血清检测试剂盒及方法
- 本发明公开了属于分子生物医学技术领域的一种利用miR-145为标志物的肝癌患者血清检测试剂盒及方法。本发明设计miR-145特异性的引物，采用定量PCR的方法检测正常人血清、肝癌患者血清中miR-145的含量变化，含量显...
- 邵宁生李少华李慧王玮丁红梅李洁黄皑雪苏雪婷赵强
- 文献传递
- 人肿瘤坏死因子α特异性结合miR-146b的新生物学特性研究
- 2016年
- 目的:探讨人肿瘤坏死因子α(TNF-α)作为micro RNA(mi RNA)结合蛋白的生物学特性。方法:Western印迹检测LPS激活的U937细胞中TNF-α蛋白表达水平,RT-PCR检测几种炎症相关的mi RNA在激活前后表达水平的变化;用RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP)技术钓取U937细胞中TNF-α结合的mi RNA,RT-PCR检测RIP产物中上述几种mi RNA的含量;用凝胶阻滞实验检测TNF-α与mi RNA是否直接结合。结果:LPS激活的U937细胞中能检测到膜结合型和可溶性2种形式的TNF-α,细胞激活前后mi R-16和mi R-21的表达水平在检测的几种mi RNA中最高,mi R-146b和mi R155次之;而RIP产物中mi R-146b的水平在实验组和对照组中有显著差异,其他mi RNA差异不明显;凝胶阻滞实验结果显示mi R-146b能与人TNF-α直接结合。结论:首次证实人TNF-α能够直接特异地结合mi R-146b,提示TNF-α可能作为mi RNA结合蛋白发挥生物学功能。
- 沈雪莲李洁黄皑雪王超男孙乐桥李少华丁红梅李慧郭晓华郑伟董洁邵宁生
- 关键词：人肿瘤坏死因子ΑMICRORNARNA结合蛋白
- 一种特异识别异质性核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)的寡核苷酸适配体C6‑8的序列和应用
- 本发明公开了属于分子生物医学技术领域的一种特异识别异质性核糖核蛋白A2／B1(hnRNPA2／B1)的寡核苷酸适配体C6‑8的序列和应用。通过针对多种肿瘤细胞的SELEX技术获得了单链DNA寡核苷酸适配体C6‑8，标记F...
- 邵宁生李慧李少华黄皑雪丁红梅李洁苏雪婷赵强
- 文献传递
- 含p53保守结合位点的microRNA表达载体的构建及应用
- 2014年
- 目的:构建含p53保守结合位点的microRNA(miRNA)表达载体,促进相关miRNA在具有野生型p53蛋白细胞中的高效表达。方法:改构miRNA表达载体pCMV-miR,在其多克隆位点前插入p53保守结合位点,分别将miR-138、miR-34a和miR-21前体序列pre-miR-138、pre-miR-34a和pre-miR-21插入上述改构的载体pCMV/p53-miR,将构建的pCMV/p53-miR-138、pCMV/p53-miR-34a和pCMV/p53-miR-21表达载体转染具有野生型p53的HeLa细胞和不表达p53的H1299细胞,分析p53对上述miRNA表达调控的影响。结果:转染改构的miRNA表达载体后,HeLa细胞中miR-138、miR-34a和miR-21的表达水平明显提高,它们对应的已知靶基因Cyclin D3、CDK2和PTEN的表达同时被显著下调。结论:在p53转录调控作用下,具有p53保守结合位点的miRNA表达载体能够更加有效地提高miRNA的表达水平;构建的载体不但可用于促进相关miRNA的表达,也能用于miRNA是否受p53调控的检测。
- 秦性良苏雪婷丁红梅黄皑雪李慧侯绿滨葛兴枫李洁邵宁生
- 关键词：P53转录调控MICRORNA
