黄云辉
- 作品数：31 被引量：109H指数：5
- 供职机构：第三军医大学基础部全军免疫学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种快速分离细胞凋亡片段化DNA的简单方法——NP-40法被引量：16
- 2000年
- 目的鉴定细胞凋亡的一个重要生化指标是凋亡细胞的核 DNA通过琼脂糖凝胶电泳呈现典现的 DNA“梯状”图谱。传统分离凋亡细胞片段化 DNA的方法多采用酚 /氯仿抽提。因此 ,有必要探寻一种更为灵敏、简单的分离凋亡片段化 DNA的新方法。方法通过比较传统分离凋亡片段化 DNA的方法 ,并对 HERRMANN等 [1 ]报道的方法加以改进。结果本文介绍一种快速分离凋亡 DNA片段化的新方法 ( NP- 40法 )。结论这种简单、快速的分离方法无需酚 /氯仿反复抽提 ,无需大量的细胞样品 ,并且凋亡 DNA片段化梯状图谱清晰 ,适用于大多数凋亡细胞片段化
- 熊世勤朱锡华黄云辉
- 关键词：细胞凋亡DNA片段化
- 超抗原SED在大肠杆菌中的表达被引量：5
- 2002年
- 目的构建稳定的SED原核表达系统。方法采用PC R技术扩增葡萄球 菌D型肠毒素（SED）超抗原的成熟蛋白编码区DNA序列，构建SED DNA与6个组氨酸基因融合的表达载体pTrcHis-SED，转入E.coli DH5α，IPTG诱导后，用SDS-PAGE和免疫印迹 检测融合蛋白的表达情况。目的蛋白用Ni-NTA金属亲和层析法进行纯化，SDS-PAGE和毛细管电泳检测蛋白纯度。结果成功构建了原核表达载体pTrcHis-SED。分子量 约 为28 000 u的6His-SED融合蛋白可在E.coli DH5α中稳定表达。Ni-NTA金属亲和层析 后得到 纯度较高（>95%）的SED融合蛋白，且具有免疫学活性。结论本研究为SE D免疫识别研究奠定了实验基础。
- 李亚斐朱锡华黄云辉杨劲
- 关键词：超抗原原核表达大肠杆菌免疫学活性免疫识别
- 人CD7 cDNA在HEK293细胞中的表达
- 2001年
- 目的建立表达人白细胞分化抗原 CD7蛋白的哺乳动物细胞模型 ,为深入研究 CD7的功能奠定基础。方法采用 PCR方法扩增 CD7c DNA,将目的片段定向克隆于真核表达载体 pc DNA3 ,限制性内切酶酶切分析重组质粒并进行序列测定 ;通过电穿孔法将重组真核表达载体 pc DNA 3 / CD7转染于人胚肾 2 93细胞 ( HEK2 93 ) ,经 G4 18筛选得到抗性克隆 ;利用FCM检测 CD7分子在 HEK2 93细胞的表达。结果得到了含 CD7全长 c DNA的重组真核表达载体 pc DNA3 / CD7。FCM分析表明 :转染了 pc DNA3 / CD7的 HEK2 93细胞表达人 CD7蛋白。结论为深入研究
- 周艳春朱锡华黄云辉
- 关键词：CD7人胚肾293细胞真核表达CDNAHEK293细胞
- 超抗原SED突变体的构建表达和鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 在预测的SED免疫识别活性位点处引入定点突变 ,构建SED突变体。方法 分别设计侧翼引物和突变引物 ,用megaprimerPCR方法引入突变碱基 ,将PCR产物与pTrcHis B质粒连接 ,转化E .coliDH5α ,用IPTG进行诱导表达 ,金属螯合亲和层析法纯化 ,免疫印迹检测纯化的蛋白。结果 测序结果表明在相应的位置引入了正确突变 ,SDS PAGE和免疫印迹检测结果证实了目的蛋白的表达 ,将构建成功的突变体分别命名为SEDN2 3A、SEDN2 3A/H2 6R、SEDF45A、SEDL5 9A、SEDN61A、SEDI92A和SEDF2 0 3A。结论 成功构建了一系列SED突变体 。
- 李亚斐朱锡华黄云辉杨劲
- 关键词：超抗原突变体
- 雷公藤多甙对家兔急性实验性血清病免疫功能的影响被引量：2
- 1995年
- 为了探讨雷公藤多甙（ＴＷＰ）对家兔急性实验性血治病（ＡＥＳＳ）的免疫调节作用，我们以家兔ＡＥｓＳ为实验模型，观察ＢＳＡ免疫实验动物后的不同时期ＴＷＰ对家兔外周血Ｔ和Ｂ淋巴细胞增殖的影响、白细胞介素－２（ＩＬ－２）活性的影响及肾脏组织的病理学变化。结果表明：ＴＷＰ明显抑制ＣｏｎＡ诱导Ｔ淋巴细胞的增殖，但对ＬＰＳ诱导的Ｂ淋巴细胞增殖无影响。抑制ＣｏｎＡ诱导Ｔ淋巴细胞产生ＩＬ－２；抑制循环免疫复合物（ＣＩＣ）的形成；减少肾小球内炎性细胞浸润和肾小球内免疫复合物（ＩＣ）沉积。提示：ＴＷＰ可能通过抑制Ｔ淋巴细胞的功能，发挥对家兔ＡＥＳｓ的免疫调节作用，从而减轻ＡＥＳＳ发病进程中肾脏病理损伤的程度。
- 何礼芳姜曼黄云辉
- 关键词：雷公藤多甙血清病免疫复合物肾小球肾炎
- 烧伤患者血清对肺毛细血管内皮细胞与中性粒细胞粘附特性的研究被引量：2
- 2002年
- 目的 探讨烧伤继发急性肺损伤 (acutelunginjury ,ALI)患者肺毛细血管内皮细胞(PVEC)与中性粒细胞 (PMN)的粘附能力 ,观察C5a在PVEC PMN粘附行为中的作用程度及规律。 方法 采用微管吸吮技术 ,定量测定PVEC PMN之间粘附力值变化 ;测定髓过氧化酶 (MPO)活性 ,反映PVEC粘附PMN的数量。 结果 随着rh C5a浓度上升 ,PVEC粘附了更多的PMN ;粘附力值也逐渐增加 ,3 0 0 μg/Lrh C5a时差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1) ;MPO也随之上升 ;工作浓度为 1∶10 4 的anti C5aRMcAb可缓解急性肺损伤 (ALI)血清所致的MPO增加 ,呈量效关系 , 结论 C5a、C5aR共同参与了PVEC PMN的粘附过程。而且急性肺损伤所致的粘附力值上升可被anti C5aRMcAb所抑制 ,提示C5a。
- 吕凤林朱锡华胡承香黄云辉
- 关键词：烧伤肺毛细血管中性粒细胞髓过氧化酶微管吸吮血管内皮细胞
- 雷公藤多甙对家兔急性实验性血清病实验性治疗的研究被引量：3
- 1991年
- 为了证实雷公藤多甙(GTW)是否对家兔急性实验性血清病(AESS)有治疗作用,我们以家兔AESS为实验模型,设对照组和治疗组,每组动物各17只。治疗组于注射牛血清白蛋白(BSA)前2天和注射后给GTW15mg/kg/d胃管灌服,临用前将GTW混悬于0.5％羧甲基纤维素钠(CMC),共2周。对照组胃管灌服等量0.5％CMC,共2周。结果证明:治疗组与对照组动物相比,循环中特异性BSA-抗BSA复合物和血清中抗BSA-IgG抗体显著减少,血清中总补体量增高,肾组织炎性病变和肾小球内免疫复合物沉积减轻,血浆白蛋白、肌酐均恢复正常,充分说明GTW对家兔AESS确实有治疗作用;并对其作用机理作了讨论。
- 何礼芳朱锡华黄云辉谯怡然朱英桂
- 关键词：雷公藤多甙免疫复合物血清病
- 死亡分子受体介导凋亡信号的研究进展
- 1999年
- 死亡分子受体与死亡分子相互作用引发的细胞凋亡倍受人们关注。Fas、TNFR、DR3/Wsl-1和CAR 4个死亡分子受体已被确定,它们参与免疫调节、CTL杀伤活性、肿瘤消退、移植排斥反应等并发挥着重要的生物学作用。
- 王希良黄云辉
- 关键词：细胞凋亡信号传导
- 急性实验性血清病家兔血浆以金葡球菌Cowan Ⅰ株处理后对病变的缓解作用
- 1990年
- 为了证实葡萄球菌A蛋白(SPA)是否能除去急性实验性血清病(AESS)家兔血浆中免疫复合物以减轻肾小球肾炎的病变,本实验设实验组和对照组,每组家兔各14只。实验组於注射抗原(BSA)后第8、10、12天抽血14ml/kg体重,分离血浆以金葡球菌Cowan Ⅰ株(含SPA)处理后,再将血浆与血球混匀输回原家兔体内;对照组家兔血浆以金葡球菌Wood 46株(不含SPA)处理后,再将血浆与血球混匀输回原家兔体内。结果证明:实验组动物与对照组动物相比,循环中BSA-抗BSA复合物显著减少,肾组织病变也显著减轻。充分说明SPA确能除去血浆中免疫复合物,从而减轻家兔肾小球肾炎的病变。为临床提供了一种治疗免疫复合物病的可行途径。
- 何礼芳朱锡华黄云辉周伟朱英桂
- 关键词：金葡球菌免疫复合物肾小球肾炎
- AP-1与NF-κB的活化表达与T细胞的无能被引量：13
- 2003年
- 目的 :探讨无能T细胞IL 2产生的缺乏与转录因子AP 1和NF kappaB的关系。方法 :通过提取活化组和无能组T细胞的核蛋白 ,进行凝胶电泳迁移率变动分析实验 (EMSA) ,检测了转录因子AP 1和NF kappaB的表达情况。结果 :与活化组相比 ,无能T细胞中AP 1不但表达水平下降 ,且出现组份缺失现象 ;转录因子NF kappaB在无能T细胞中的表达则高于活化组 ,但均有三种复合物存在。结论 :无能T细胞IL 2产生减少或缺乏可能与转录因子AP 1和NF kappaB表达紊乱 (减弱或增强 )以及组份的缺失有关。
- 许桂莲朱锡华杨劲黄云辉
- 关键词：无能AP-1NF-KAPPAB活化表达T细胞
