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TNFR1BP/IgGFc融合蛋白载体的构建、表达及其生物学活性研究: 2008年; 目的构建肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)封闭肽与IgGFc融合蛋白的真核表达载体,检测其表达和生物学活性。方法将合成的TNFR1封闭肽(TNFR1BP)基因片段插入质粒pIG/3C,构建真核表达载体pIG/3C-TNFR1BP;脂质体法将重组载体转染COS-7细胞;ELISA和Western blot法检测转染细胞的培养上清中TNFR1BP/IgGFc融合蛋白的表达;间接免疫荧光抑制实验、细胞毒抑制实验检测融合蛋白对TNFR1的封闭作用。结果经PCR和核苷酸序列测定证实TNFR1BP基因正确插入质粒pIG/3C。ELISA检测证实,在转染细胞培养上清中有融合蛋白的表达;间接免疫荧光抑制实验和细胞毒抑制实验证实融合蛋白能结合L929细胞表面的TNFR1,并能抑制分泌型肿瘤坏死因子α(sTNF-α)介导的细胞毒作用。结论成功构建并实现TNFR1BP/IgGFc融合蛋白真核表达;体外实验证实此融合蛋白可通过与细胞表面TNFR1结合,从而拮抗sTNF-α介导的生物学效应。; 黄丽霞尹丙姣王晶梁慧芳曾庆岭姜小丹李卓娅; 关键词：肿瘤坏死因子-Α 真核表达

TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白和TNFR Ⅰ封闭肽对TNF-α介导的生物学效应的封闭作用被引量：3: 2008年; 目的:研究比较TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白(TNFR1BP/hIgGFc)和TNFR Ⅰ封闭肽(TNFR1BP)生物学特性及功能,为开发治疗TNF-α相关疾病的肽类药物奠定基础。方法:通过流式细胞术和细胞毒抑制实验检测TNFR1BP/hIgGFc和人工合成TNFR1BP对TNFRⅠ的封闭作用;通过RT-PCR、激光共聚焦显微镜技术检测融合蛋白和封闭肽对TNF-α介导的生物学效应的封闭作用。结果:流式细胞术证实TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白和人工合成TNFR Ⅰ封闭肽二者均能抑制TNF-α与细胞膜表面TNFR1的结合;RT-PCR结果显示二者均可明显抑制TNF-α诱导的IL-1β及IL-8等促炎细胞因子的mRNA表达;激光共聚焦显微镜显示二者均可明显拮抗TNF-α诱导的人单核细胞NF-κB核转位的发生。结论:TNFR1BP/hIgGFc和TNFR1BP均可与细胞表面TNFR Ⅰ结合,拮抗TNF-α介导的生物学效应。; 黄丽霞尹丙姣王晶梁慧芳曾庆岭姜小丹李卓娅; 关键词：TNFR TNFR TNF-Α

肿瘤坏死因子Ⅰ型受体封闭肽-Fc融合蛋白对肥胖大鼠胰岛素抵抗的影响: 目的:探讨特异性阻断肿瘤坏死因子Ⅰ型受体(TNFR1)是否改善高糖高脂饮食引起的胰岛素抵抗。方法:建立稳定表达TNFR1阻断肽(TNFR1BP)和Fc融合蛋白(TNFR1BP-FC)的CHO细胞系,纯化真核细胞表达的融合...; 梁慧芳黄丽霞朱建华杨林张述李清芬李卓娅; 文献传递

肿瘤坏死因子Ⅰ型受体封闭肽-Fc融合蛋白对大鼠胰岛素抵抗的影响: 建立稳定转染TNFR1封闭肽-IgG1Fc段的真核分泌型表达载体pIg的细胞株CHO, 收集培养上清并纯化TNFR1封闭肽—IgG1Fc融合蛋白(TNFR1BP:Fc)。体外实验证实该融合蛋白可与L929细胞上的YNFR...; 梁慧芳黄丽霞朱建华杨林张述李清芬李卓娅; 文献传递

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黄丽霞