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人表皮生长因子慢病毒载体的构建及表达被引量：3: 2010年; 目的:构建人表皮生长因子(hEGF)慢病毒(LV)载体。方法:酶切并收集pcDNA3.1-hEGF载体中的hEGF目的基因片段,克隆进入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体内,将所得重组体LV-GFP-hEGF与辅助载体pΔ8.2和pVSVG共同转染人胚肾293T细胞,进行病毒包装。收集上清液,按按10-1～10-7倍比稀释后培养,检测病毒滴度;裂解细胞,进行Western Blot分析。结果:PCR扩增、HindⅢ酶切鉴定及测序结果均证实LV-GFP-hEGF构建成功。将LV-GFP-hEGF转染293T细胞,紫外光下检测可见绿色荧光;LV滴度达5×108TU/mL,转染效率>75%,Western Blot证实转染细胞可表达hEGF。结论:成功构建了含有GFP报告基因的hEGF慢病毒载体,包装后的慢病毒可在293T细胞内高效表达。; 张丽梅冯龙张艳敏马晶赵国强安玉会鲍玉洲; 关键词：人表皮生长因子慢病毒载体基因构建

miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响被引量：2: 2012年; 目的:探讨miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法:化学合成miR-451mimics,脂质体包裹转染EC9706细胞为miR-451组,同时设立无关序列(Scramble-miR)对照组、脂质体对照组和空白对照组.转染后48h,荧光定量RT-PCR检测miR-451表达量的变化,Westernblot检测Bcl-2、AKT和磷酸化AKT蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;MTT法检测转染后l、2、3、4、5、6d各组细胞增殖率.结果:miR-451组的miR-451表达水平显著上调(P<0.01,F=69.26),为空白对照组的15.84倍;miR-451组细胞Bcl-2、AKT和磷酸化AKT蛋白表达均显著下调(P<0.05,F=5.83);miR-451组细胞凋亡率为12.07%±1.12%,与3个对照组比较显著升高(P<0.01,F=26.72);miR-451组平均侵袭细胞数为47.4±7.4,与3个对照组比较显著降低(P<0.01,F=34.55).miR-451组细胞的生长在转染后2d出现显著抑制(P<0.05,F=5.95),并且随时间的延长而日益显著.结论:上调miR-451表达可抑制食管癌EC9706细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡.; 冷弘臧文巧王涛王媛媛马晶赵国强; 关键词：食管癌细胞系增殖凋亡

洛阳地区无偿献血人群中疱疹病毒8型的检测被引量：2: 2012年; 目的了解洛阳地区无偿献血人群中疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)的感染情况。方法采用荧光定量PCR法检测外周血单核细胞中HHV-8 DNA,同时采用ELISA方法检测血清中HHV-8抗体。结果 480份无偿献血者标本血清中HHV-8 DNA检出率为6.7%(32/480),HHV-8抗体检出率为6.5%(31/480);HHV-8 DNA和HHV-8抗体的检出率有随年龄增加而增高的趋势。结论洛阳地区无偿献血人群中存在有一定比例的HHV-8感染者,建议对无偿献血者增加HHV-8感染筛查。; 冷弘王媛媛燕备战方春霞马晶臧文巧李敏赵国强; 关键词：人疱疹病毒8型无偿献血者 PCR ELISA

酵母双杂交系统检测SK2与RyR2蛋白的相互作用被引量：4: 2011年; 目的:探讨小电导Ca2+激活K+(SK)通道亚型SK2通道与肌浆网(RyR)2蛋白的相互作用。方法:经PCR扩增及酶切鉴定,构建含有SK2和RyR2目的基因片段的酵母表达载体pGBKT7-SK2和pGADT7-RyR2。pG-BKT7-SK2与pGADT7-RyR2经电转化法转化酵母宿主AH109,X-α-Gal/3AT/SD/-Trp-Leu培养鉴定阳性克隆。结果:获得3个重组质粒pGBKT7-SK2和16个重组子pGADT7-RyR2。酵母双杂交检测结果显示pGBKT7-SK2与pGADT7-RyR2可转化酵母AH109,但无阳性菌落生长。结论:SK2和RyR2蛋白之间可能无直接相互作用。; 马晶赵国强朱含袁建党章茜安玉会; 关键词：肌浆网酵母双杂交相互作用

肠道病毒71型河南分离株2株全基因组序列分析被引量：1: 2012年; 目的:了解2011年河南洛阳和南阳地区流行的肠道病毒71型(EV71)基因特征。方法:分离洛阳和南阳地区EV71病毒各一株,分别进行全基因测序和基因进化分析。结果:EV71/Luoyang2011和EV71/Nanyang2011的VP1区序列在进化树上均属于C4亚型,与国内流行株都具有较高同源性,与2008年广东流行株亲缘关系最近。这2株全基因核苷酸序列同源性为99.3%,氨基酸序列同源性为97.6%,并且氨基酸均没有发生明显改变。结论:EV71/Luoyang2011和EV71/Nanyang2011属于C4亚型,与我省及我国既往流行株相比,未发生大的变异。; 冷弘卢欣刘慧涛马云云王媛媛马晶郭茂峰李敏赵国强; 关键词：肠道病毒71型手足口病同源性分析

穿心莲对人外周血CD4^+T淋巴细胞表面CXCR4和CCR5的影响以及对CXCR4/CCR5启动子作用机制的研究被引量：4: 2011年; 目的:探讨穿心莲对人外周血CD4+T淋巴细胞表面趋化因子受体CXCR4和CCR5的影响以及对CXCR4,CCR5启动子的作用机制。方法:健康志愿者口服含穿心莲内酯的穿心莲胶囊后,采集人外周静脉血并分离CD4+T淋巴细胞,RT-PCR、流式细胞术、Western-bloting检测服药前后人外周血CD4+T淋巴细胞表面CXCR4,CCR5的表达;采用报告基因技术,中药穿心莲提取物给大鼠灌胃后采集含药血清,将含药血清作用于转染有CXCR4,CCR5启动子载体的H9细胞株,检测穿心莲对CXCR4,CCR5启动子的影响。结果:健康志愿者口服穿心莲后,外周血CD4+T淋巴细胞表面CXCR4,CCR5 mRNA和蛋白表达水平较服药前显著降低;并且穿心莲能够显著降低体外培养细胞CXCR4,CCR5启动子活性。结论:穿心莲能够降低人外周血CD4+T淋巴细胞表面CXCR4和CCR5的表达,具有潜在的抗HIV-1作用。; 冯龙赵国强马云云李敏马晶靳静崔英; 关键词：穿心莲抗艾滋病药物

靶向HIV-1启动子的药物筛选系统的建立被引量：1: 2011年; 目的:建立靶向HIV-1启动子的药物筛选系统。方法:将HIV-1启动子核心序列克隆入荧光素酶报告基因载体pGL4.17中,构建重组质粒pGL4.17-HIV-1P并转染H9细胞;分别用杜仲、黄芩、苦参及双黄连灌胃大鼠后采血,将含药血清分别作用于转染的H9细胞,检测H9细胞荧光素酶活性。以灌胃生理盐水的大鼠血清处理的转染细胞为对照,以转染空质粒pGL4.17的H9细胞为空白对照。结果:6组荧光素酶活性差异有统计学意义(F=1820.333,P<0.001)。双黄连组转染细胞荧光素酶活性降低(P<0.05),杜仲、黄芩及苦参组转染细胞荧光素酶活性增高(P<0.05)。结论:初步构建了靶向HIV-1启动子的药物筛选系统,并推测双黄连具有抗HIV-1作用。; 郭文涛马云云刘慧涛李敏靳静马晶赵国强; 关键词：药物筛选中药

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马晶