赵国强
- 作品数：313 被引量：663H指数：9
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- 发文基金：国家自然科学基金河南省科技攻关计划河南省医学科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程天文地球更多>>
- 人DNA聚合酶β突变基因和对应蛋白
- 本发明提供了一种新的人基因核苷酸序列,尤其涉及人类修复基因DNA聚合酶β的cDNA序列,是DNA聚合酶β在食管癌中的特殊表现形式,它所编码的蛋白完全丧失DNA聚合酶β的DNA修复活性,它是一种分离出的DNA分子,以M－P...
- 董子明赵国强赵勤谭晓辉杨洪艳薛乐勋
- 文献传递
- 核干细胞因子基因siRNA表达载体的构建及鉴定被引量：7
- 2008年
- 目的构建针对核干细胞因子(NS)基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体。方法根据GenBank提供的NS基因AY825265mRNA序列及siRNA设计原则设计siRNA,筛选得到126-144nt,199-217nt和487-505nt3个19bp片段为靶序列;合成带有BamHI、XhoI酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,经过退火,将此序列克隆至载体pRNAT-U6.1中构建重组表达载体;转化DH5α,提取质粒,应用PCR技术和测序方法鉴定重组克隆。转染入食管癌EC9706细胞,检测NS基因沉默情况。结果PCR筛选得到3个目的片段的阳性重组克隆,测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。RT-PCR和Westernblot检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低EC9706细胞中NSmRNA和蛋白水平的表达。结论成功构建出一组针对NS基因的siRNA表达载体,为下一步NS基因的RNA干扰研究鉴定了基础。
- 张功员赵国强尹磊张钦宪
- 关键词：核干细胞因子RNA干扰基因克隆EC9706
- DNA聚合酶β基因表达对NIH3T3细胞增殖影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察不同类型DNA聚合酶β(DNA Polymerase β,DNA pol β)在小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)的表达及细胞增殖特性的变化。方法用脂质体转染的方法,将野生型(wild type,wt)和食管癌缺失突变型(delete mutional type,dmt)的polβ重组荧光载体pEGFP-C3-polβ转染NIH3T3细胞,建立稳定表达polβ的细胞系,通过荧光倒置显微镜观察其定位,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法绘制生长曲线,流式细胞仪测定其细胞周期。结果转染2种类型polβ的NIH3T3细胞株中,均有外源基因mRNA水平和蛋白水平的表达;荧光倒置显微镜结果显示,野生型的以细胞胞核为主,缺失突变型的polβ表达以细胞胞浆为主,从第3d开始,缺失突变型的细胞生长速度较野生型和对照组明显增快(P<0.05);转染缺失突变型NIH3T3细胞的S期细胞比例为68.29%,明显高于野生型的57.18%、对照组的58.12%和未转染NIH3T3细胞的57.35%(P<0.05)。结论外源野生型polβ基因表达后对NIH3T3细胞的增殖速度无明显影响,而缺失突变型则使其增殖速度加快。
- 赵军路静杨洪艳黄幼田赵继敏赵明耀赵国强张曦董子明
- 关键词：基因表达细胞增殖
- 转化生长因子-β1转染兔骨髓基质细胞修复软骨缺损被引量：1
- 2012年
- 目的观察转化生长因子-β1（TGF-β1）基因转染兔骨髓基质细胞（MSCs）复合海藻酸钠凝胶修复兔关节软骨缺损的效果。方法取兔龄4周龄的新西兰兔骨髓，体外分离纯化培养得到MSCs。选用24只成年新西兰兔，随机分为4组，在两侧股骨髁非负重区造成全层软骨缺损模型，A组（实验组）植入TGF-β1转染的MSCs＋藻酸钙，B组（对照组I）植入空质粒转染的MSCs＋藻酸钙，C组（对照组Ⅱ）植入不含MSCs的藻酸钙，D组（对照组Ⅲ）旷置。于移植后12周取材，观察软骨缺损修复及组织学评价。结果实验组修复组织基本光滑，有大量Ⅱ型胶原蛋白表达，3个对照组修复组织Ⅱ型胶原蛋白表达量少，仍有明显缺损。实验组与3个对照组12周时O’Driscoll，Kee—leyandSalter组织形态学评分分别为：实验组为（17．0004-1．758）分，对照组I为（7．830±1．528）分，对照组Ⅱ为（6．580±1．379）分，对照组Ⅲ为（3．170±1．267）分，组间单因素方差分析比较结果显示，实验组分别与3个对照组两两比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论TGF-β1转染兔MSCs修复软骨缺损效果优于其他对照组。
- 殷力娄超举韩奇财杜振宁李树山徐晨阳李红帅赵国强
- 关键词：软骨修复转化生长因子-Β1骨髓基质细胞基因转染
- rhEGF基因治疗角膜碱烧伤的实验研究被引量：2
- 2007年
- 目的探讨重组人表皮生长因子(rhEGF)基因缓释型滴眼液对兔角膜碱烧伤的基因治疗。方法新西兰白兔75只,分为A(rhEGF-pcDNA3.1-脂质体基因滴眼液)、B(rhEGF衍生物滴眼液)、C(pcDNA3.1空质粒-脂质体对照组)三组分别点眼治疗兔角膜碱烧伤。每天观察模型眼眼表、荧光素染色并照相。分别测定hEGFmRNA、hEGF和EGFR在角膜组织中的表达。结果A组眼表结膜充血、分泌物、角膜水肿和角膜混浊程度均比B组和C组轻。角膜荧光素染色显示A组角膜上皮的溃疡面积较B组和C组范围小,21d转为阴性。A组基因在行滴眼24h后在全层角膜细胞内可见hEGFmRNA和蛋白质表达,第3d达高峰,细胞阳性率高达95%,随后逐渐降低,21d仍有弱表达。结论rhEGF-PcDNA3.1-脂质体基因滴眼液能够降低角膜的炎症反应,促进角膜上皮细胞的增生,加速角膜碱烧伤的损伤修复过程。
- 高岚赵国强张艳敏鲍玉洲
- 关键词：重组人表皮生长因子角膜碱烧伤
- 重症肌无力患者胸腺组织抑制性消减cDNA文库的构建及分析被引量：1
- 2012年
- 目的:构建重症肌无力(MG)患者胸腺组织抑制性消减cDNA文库,分析MG胸腺差异表达基因。方法:分别从6例正常和6例MG患者胸腺组织中分离出mRNA,逆转录合成cDNA,行抑制性消减杂交,将得到的差异表达基因进行T-A克隆,构建cDNA文库,并进行序列分析。应用实时荧光定量PCR检测20例MG患者、10例正常对照胸腺组织中GSTM3和KPNA5 mRNA的表达。结果:共获得125个阳性克隆;Blast同源性检索共得到27个差异表达基因;MG患者GSTM3、KPNA5基因表达量(0.671±0.097和0.712±0.080)高于正常对照胸腺(0.582±0.047和0.571±0.018),差异有统计学意义(tGSTM3=5.458,P<0.001;tKPNA5=2.755,P=0.010),与消减文库结果一致。结论:成功建立了MG胸腺组织抑制性消减cDNA文库。
- 杨俊红崔新征方华关兵峰赵国强张清勇高峰
- 关键词：重症肌无力差异基因CDNA文库胸腺
- 人源抗肾小球基底膜单链抗体scFv3原核载体的构建、表达和纯化
- 抗肾小球基底膜(glomerular basement membrane ，GBM)疾病是一种罕见的自身免疫性疾病，特点是急进性肾小球肾炎和肺出血。虽然本病的发病率低，但多数患者病情重，预后差，死亡率高。本文通过基因工程...
- 王雅楠刘章锁邢国兰赵国强肖静王沛
- 关键词：急进性肾小球肾炎肺出血单链抗体免疫反应性原核载体
- 文献传递
- 小鼠SK2基因亚克隆的构建和鉴定(英文)被引量：1
- 2010年
- 背景:小电导Ca2+激活钾(small conductance Ca2+-activated potassium channels,SK channels)通道存在于大多数可兴奋性细胞并在动作电位的复极化中发挥着重要作用。但SK通道与Ca2+及其他分子的偶合及调控途径尚未明确。目的:为观察SK2通道基因区段与Ca2+及其他分子的偶合及调控,构建pGBAT7和SK2基因片段重组子。方法:根据SK2基因的全长序列,设计3个SK2基因片段引物,经PCR扩增,测序鉴别后,分别亚克隆到酵母表达质粒pGBKT7。构建的pGBKT7-SK2亚克隆通过电转染法分别转染到酵母AH109菌中并被激活。pGBKT7-SK2亚克隆从酵母AH109菌中提取,电泳和测序鉴定。结果与结论:SK2目的基因PCR扩增产物分别为411,546,729bp。成功构建了3个含有411,546,729bp的pGBKT7-SK2亚克隆,电泳和测序鉴别表明构建的pGBKT7-SK2亚克隆完全符合设计要求。转染到酵母AH109菌中pGBKT7-SK2亚克隆可被激活,为探讨SK2通道与其他分子的功能相关提供了重要的物质基础。
- 章茜袁建党赵国强安玉会
- 关键词：酵母克隆
- Edg4基因小分子干扰RNA载体的构建及其对卵巢上皮性癌细胞的沉默效应
- 2007年
- 目的构建针对 Edg4基因的小分子干扰 RNA(siRNA)载体,初步观察其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的沉默效应。方法利用软件分析、设计针对人 Edg4 mRNA 的 siRNA 靶序列,合成发夹样 DNA 序列;退火成双链,克隆至真核表达载体 pRNAT-U6.1质粒上,经 PCR 技术鉴定及DNA 双向测序证实其序列无误后,用脂质体包裹并转染卵巢癌细胞系 SKOV3细胞,用荧光显微镜初步观察其在 SKOV3细胞中的转染率。采用实时荧光定量荧光定量 PCR 技术检测转染前后 SKOV3细胞中 Edg4 mRNA 的表达,生化法测定转染前后 SKOV3细胞上清液中溶血磷脂酸(LPA)含量的变化,流式细胞术检测转染后 SKOV3细胞的凋亡率。结果经 PCR 技术鉴定及 DNA 双向测序证实重组真核表达载体的序列无误,并将此命名为 pRNAT-U6.1-siEdg4。荧光显微镜下观察,转染后 SKOV3细胞内有明显绿色荧光信号,转染率为64%;实时荧光定量 PCR 技术检测显示,转染后 SKOV3细胞的Edg4 mRNA 表达水平(0.05±0.01)明显低于转染前(0.29±0.04,P<0.05);SKOV3细胞上清液中LPA 的含量,转染后明显低于转染前[分别为(3.0±1.0)、(7.5±2.2)μmol/L;P<0.05];流式细胞仪检测显示,转染后 SKOV3细胞的凋亡率明显高于转染前(分别为53.38%、0.51%;P<0.05)。结论本研究成功构建了针对人 Edg4基因的 siRNA 真核表达载体,并能较高效转染 SKOV3细胞,转染后能明显抑制 SKOV3细胞中 Edg4 mRNA 的表达,诱导卵巢癌细胞凋亡。
- 乔玉环李留霞郭瑞霞周蔚王淼张孝艳张建好赵先兰张梦真赵国强
- 关键词：卵巢肿瘤基因表达
- 人表皮生长因子慢病毒载体的构建及表达被引量：3
- 2010年
- 目的:构建人表皮生长因子(hEGF)慢病毒(LV)载体。方法:酶切并收集pcDNA3.1-hEGF载体中的hEGF目的基因片段,克隆进入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体内,将所得重组体LV-GFP-hEGF与辅助载体pΔ8.2和pVSVG共同转染人胚肾293T细胞,进行病毒包装。收集上清液,按按10-1～10-7倍比稀释后培养,检测病毒滴度;裂解细胞,进行Western Blot分析。结果:PCR扩增、HindⅢ酶切鉴定及测序结果均证实LV-GFP-hEGF构建成功。将LV-GFP-hEGF转染293T细胞,紫外光下检测可见绿色荧光;LV滴度达5×108TU/mL,转染效率>75%,Western Blot证实转染细胞可表达hEGF。结论:成功构建了含有GFP报告基因的hEGF慢病毒载体,包装后的慢病毒可在293T细胞内高效表达。
- 张丽梅冯龙张艳敏马晶赵国强安玉会鲍玉洲
- 关键词：人表皮生长因子慢病毒载体基因构建
