马晶
- 作品数：23 被引量：36H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学交通运输工程更多>>
- HIV-1 P24人源化单克隆抗体的制备及鉴定
- 2014年
- 目的 通过建立新型人源化抗HIV-1 P24单克隆抗体制备技术平台,研制1～2种抗HIV-1 P24抗体.方法 使用连接P24的磁珠分选特异性分泌P24抗体的B细胞,有限稀释后,提取总mRNA,采用逆转录和巢式PCR扩增免疫球蛋白重链和轻链基因,经测序鉴定后克隆到真核表达载体Cloning vector AbVec-hIgG1、Cloning vector AbVec-hIgKappa、Cloning vector AbVec-hIgLambda中;通过瞬时转染293T细胞得到重组抗体;使用proteinA亲和层析纯化抗体.结果 成功筛选到5对抗HIV-1 P24的人源单克隆抗体基因.结论 本研究初步成功地建立了人源化HIV-1 P24单克隆抗体的制备及纯化方法,为HIV早期诊断以及筛选其他人源化单克隆抗体奠定了基础.
- 崔佳雯毛怡心马晶贾润清余双庆张晓梅常占军戴蕾李喜英牛卫东梁世杰刘征刘建勋徐兰英曾毅张晓光
- 关键词：HIV-1逆转录聚合酶链反应抗体单克隆酶联免疫吸附测定
- 含有H5N1 NA基因重组腺病毒疫苗在小鼠体内的免疫效果研究被引量：1
- 2009年
- 目的考察含有禽流感病毒A／Anhui／1／2005（H5N1）优化型NA基因的重组腺病毒在BALB／c小鼠体内的免疫效果，并筛选合适的免疫剂量。方法重组病毒以肌内注射方式在第0周和第4周免疫BALB／c小鼠两次，低、中、高组的免疫剂量分别是10^5、10^7和10^9 TCID50/次，第5周时分别使用神经氨酸酶活性抑制试验和ELISpot实验来检测和比较疫苗的体液和细胞免疫效果。结果重组病毒免疫后的小鼠均可检测出针对NA抗原的特异性体液和细胞免疫反应，并且免疫效果与免疫剂量呈正相关，10^7 TCID50／只／次是合适的免疫剂量。另外，从包含NA全长氨基酸残基的合成肽库中筛选到两个能够刺激BALB／c小鼠T淋巴细胞分泌IFN-γ的表位，即NA109-124：CRTFFLTQGALLNDKH和NA182-199：AVAVLKYNGIITDTIKSW。结论含有优化型NA基因的重组腺病毒疫苗能够诱导BALB／c小鼠同时产生NA抗原特异性的体液和细胞免疫反应，是较好的H5N1流感病毒候选疫苗株，值得进一步深入研究。
- 马晶张晓光李魁彪张晓梅王敏白天杨亮徐红舒跃龙曾毅
- 关键词：神经氨酸酶腺病毒免疫
- 河南省某市HIV感染者基因型耐药横断面调查
- 2012年
- 目的了解河南省某市HIV耐药毒株在HIV／AIDS患者中的情况。方法采集2011年河南省某市150份HIV／AIDS患者血清，提取RNA，逆转录及巢式PCR扩增HIV-1pol基因区。所得序列构建系统进化树分析亚型；并利用StanfordHIVDrugResistanceDatabase分析HIV基因耐药相关突变和耐药情况。结果150份样本中34份测序阳性，其中未接受抗病毒治疗样本9份，接受抗病毒治疗样本25份；B＋亚型占94．1％。测序阳性样本的基因突变率为58．8％，其中未接受抗病毒治疗的突变率为5．9％，接受抗病毒治疗的突变率为52．9％。结论接受抗病毒治疗的耐药样本中出现了对反转录酶抑制剂不同程度的耐药及多药耐药，说明仍需加强耐药监测及管理，尽量减少耐药株的产生，并根据耐药检测结果及时调整治疗方案。
- 闫晓马晶张晓梅常战军刘建勋兰琳徐兰英张胜勇白建敏钱建华张晓光曾毅
- 关键词：HIV基因
- 多重RT-PCR结合反向杂交技术检测多种流感病毒方法的研究
- 2010年
- 目的 建立一种基于多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的多种流感病毒核酸快速检测方法.方法 对5种亚型流感病毒的HA基因序列进行比对分析,选择合适的保守区域设计引物序列,并在扩增产物序列内部选择高变区设计探针序列.首先,使用生物素标记的引物扩增出同样带标记的PCR产物;然后,产物与膜上的探针杂交,通过生物素-亲和素反应,最后以斑点显色的方式来检测和鉴别不同亚型的流感病毒.实验中还通过摸索不同的引物浓度和探针浓度来优化反应条件.结果 成功建立了一种基于多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的检测方法,该方法能够成功检测和鉴别5种不同亚型的流感病毒,检测灵敏度比传统的RT-PCR方法高100～1000倍.结论 成功建立了一种可高通量快速检测多种流感病毒的多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的检测方法.
- 杨亮张晓梅张晓光马晶王敏温乐英王大燕白天舒跃龙钱永华曾毅
- 关键词：聚合酶链反应杂交流感
- HIV-1逆转录酶P66亚单位蛋白和整合酶蛋白的表达、纯化和体外活性检测
- 获得性免疫缺陷综合征，简称艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS），是由免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染所引起的一种严重...
- 马晶
- 关键词：免疫缺陷病毒逆转录酶整合酶原核表达活性检测
- 文献传递
- 上部结构对基础水平承载力的影响
- 随着我国经济建设的高速发展,出现了越来越多的大型桥梁,这些桥梁大多是以群桩基础作为主要的基础形式。利用由竖直桩组成的群桩基础来承受水平荷载已经十分广泛,研究群桩基础在水平荷载作用下的受力变形特性就显得非常重要。目前,大部...
- 马晶
- 文献传递
- 含H5N1-HA基因重组腺病毒疫苗的构建及其诱导免疫应答的初步探讨
- 2009年
- 目的构建包含H5N1-HA基因的重组腺病毒疫苗并探讨其免疫效果。方法用Admax系统构建包含H5N1-HA基因的重组腺病毒疫苗，并用PCR、Western—Blot等方法对重组病毒疫苗进行鉴定；疫苗免疫小鼠后，通过H1实验和ELISPOT实验检测其体液免疫和细胞免疫反应，评价其免疫效果。结果成功得到了含有H5N1-HA基因的重组腺病毒疫苗；基因表达鉴定表明，HA基因能够在细胞中进行表达；血凝抑制实验结果显示小鼠产生的针对HA抗体滴度在1：320和1：640之间；ELISPOT结果显示实验组和对照组（PBS）相比斑点数量差异有统计学意义（P〈0．05），以上免疫结果表明重组腺病毒载体疫苗可以诱导小鼠产生良好的特异性体液和细胞免疫反应。结论含H5NA—HA的重组腺病毒疫苗可以诱导小鼠产生良好的免疫反应，为研制人禽流感疫苗打下基础。
- 张晓光李魁彪马晶王乃福张晓梅桑云虎董婕徐红曾毅
- 关键词：流感病毒A型流感病毒A型腺病毒疫苗
- 含有人H5N1流感病毒NA基因的重组腺病毒候选疫苗株在小鼠体内诱发细胞免疫反应被引量：4
- 2009年
- 本研究旨在构建人H5N1流感病毒NA基因的重组腺病毒候选疫苗株,并考察其在BALB/c小鼠体内的细胞免疫效果。本研究选用流感病毒A/Anhui/1/2005(H5N1)的NA基因为研究对象,分别将野生型和按照人密码子优化的NA基因插入重组腺病毒载体,构建并鉴定了两种重组腺病毒rAdV-WtNA和rAdV-Mod.NA,纯化后病毒在第0周和第4周以肌肉注射方式免疫BALB/c小鼠两次,免疫剂量是109TCID50/只/次,第5周时使用Elispot方法检测并比较病毒的细胞免疫效果。结果显示,所制备和纯化的两种重组病毒均可有效表达NA目的蛋白;免疫后的小鼠均可检测出明显的针对NA抗原的特异性细胞免疫反应,而且rAdV-Mod.NA组分泌IFN-γ细胞的数量显著高于rAdV-WtNA组(P=0.016)。说明rAdV-Mod.NA是较好的人H5N1流感病毒候选疫苗株,值得进一步深入研究。
- 马晶张晓光陈红李魁彪张晓梅张柯杨亮徐红舒跃龙谭文杰曾毅
- 关键词：H5N1神经氨酸酶重组腺病毒细胞免疫
- EBV-LMP2蛋白的表达和初步纯化
- 2010年
- 目的 应用杆状病毒表达载体表达并纯化EB病毒LMP2蛋白.方法 利用杆状病毒Bac-to-Bae杆状病毒表达系统,将EBV-LMP2基因插入到质粒pFastBacTMHT B中,获得携带EBV-LMP2基因的重组杆状病毒Bac-LMP2.重组病毒感染Sf-9细胞,表达N端携带6个组氨酸（6 X His）的LMP2融合蛋白His-LMP2.经镍离子亲和层析纯化,获得纯化蛋白.结果 SDS-PAGE及Western-Blot检测表达的蛋白相对分子质量大小与预计结果一致.HPLC分析纯化后蛋白的纯度可达86%.结论 利用杆状病毒表达系统表达EB病毒LMP2基因并经过初步纯化后,可以获得较好纯度的LMP2蛋白.
- 王湛马晶周玲张晓光杜海军杨松梅曾毅
- 关键词：基因表达
- HIV-1型整合酶蛋白的表达、纯化及复性研究
- 2007年
- 目的对HIV-1整合酶蛋白进行原核表达、纯化以及复性研究。方法从HIV-1 HXB2中PCR扩增出全长的整合酶基因,连入原核表达载体pET-30a中,得到pET-30a整合酶表达质粒。再将质粒转入大肠杆菌BL21中诱导表达,经镍柱纯化后得到整合酶蛋白。纯化后蛋白在FoldIt复性液中进行稀释复性确定最佳复性液,然后蛋白在此条件下复性并用反相柱回收,最后通过对复性蛋白抽干及再溶分析复性蛋白的物理稳定性。结果HIV-1整合酶蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总量的10%。经镍柱纯化后蛋白的总浓度为0.9 mg/ml。蛋白的最佳复性液是:Tris-Cl 55 mmol/L, NaCl 264 mmol/L,KCl 11 mmol/L,Gu-HCl 550 mmol/L,EDTA 1.1 mmol/L,以及附加成分中的GSH、GSSG。复性后蛋白抽干后再溶,溶液清亮透明,SDS-PAGE可见有寡聚体状态的蛋白。结论成功构建了pET-30a整合酶表达质粒。纯化后蛋白的浓度较高。确定了最佳的蛋白复性液。并且初步检测了复性蛋白的物理稳定性。这为蛋白体外活性研究和AIDS药物研究打下了基础。
- 马晶张晓光张晓梅郭秀婵曾毅
- 关键词：HIV-1整合酶原核表达复性
