钱东 作品数:5 被引量:36 H指数:3 供职机构: 新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点开放实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 美国国立卫生研究院基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
小鼠卵透明带3(mZP3) cDNA的克隆、测序及mZP3 DNA疫苗的构建 被引量:3 2002年 卵透明带 3 (ZP3 )蛋白是透明带中的一种主要蛋白 ,在精卵结合过程中作为精子的初级受体起重要的作用 ,抗 ZP3抗体可以阻断精卵的相互作用 ,ZP3被认为是一种潜在的避孕疫苗的靶抗原。本文根据小鼠卵透明带(m ZP3 ) c DNA序列 (1 3 1 7bp)设计了上游和下游引物 ,从小鼠卵巢中提取总 RNA,经 RT-PCR克隆了鼠卵透明带 3基因的 c DNA,将其亚克隆至 p UCm-T载体后利用蓝白斑特性筛选出阳性克隆 ,酶切鉴定后测序比较 ,与Gene Bank小鼠 ZP3 c DNA序列完全相同 ,证明克隆出正确的小鼠 ZP3 c DNA.将 m ZP3克隆至真核表达质粒p CMV4上 ,构建完成了 DNA避孕疫苗的载体 p CMV4-m ZP3 ,为应用 张富春 林仁勇 钱东关键词:CDNA DNA疫苗 小鼠 靶抗原 小鼠卵透明带3基因疫苗体外瞬时表达的研究 2002年 运用基因重组技术 ,将小鼠 ZP3c DNA片段克隆到真核表达载体 p CDNA3上 ,成功构建了 p CDNA3- ZP3真核表达质粒 ,转染 He L a细胞后 ,EL ISA法检测到 p CDNA3- ZP3真核表达质粒在 He L a细胞瞬时表达系统中能够特异性表达ZP3蛋白 ,结果表明 p CDNA3- 林仁勇 张富春 钱东 马正海 张渝疆 黄弋 钟哲 蹇晓红关键词:小鼠 卵透明带3 基因疫苗 新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中乳头瘤病毒16型E6基因的克隆和序列分析 被引量:28 2001年 为了分析新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16型E6基因结构特点 ,从中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取DNA ,以宫颈癌活检组织标本DNA为模板进行PCR扩增 ,获得HPV16E6基因 ,将其克隆到pUCm T载体上 ,并对其进行基因全序列分析 .PCR检测结果显示宫颈癌组织中HPV16E6阳性率为 82 35 % (14/17) ;测序结果显示 ,新疆株HPV16E6基因全长 45 6bp ,大小与德国标准株一致 .E6基因的第 2 47位碱基发生T→G突变 ,并由此引起所编码的氨基酸亦发生改变 .上述结果表明 ,中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌患者组织中HPV16E6的基因结构与德国标准株HPV16E6基因之间存在差异 . 马正海 钱东 马纪 林仁勇 闻明 钟哲 张富春 张秋云关键词:人乳头瘤病毒16型 E6基因 维族妇女 鼠透明带3(ZP3)融合蛋白表达以及抗血清制备 被引量:5 2002年 鼠透明带 3(mZP3)作为精子的初级受体 ,是鼠透明带中的一种主要糖蛋白 ,抗鼠透明带 3抗体能够阻断精卵的结合 ,达到不育的效果 ,因此mZP3是免疫避孕研究的重要候选抗原。从小鼠卵巢中提取总RNA ,分离mRNA ,反转录获得cDNA ,将cDNA连接到测序载体pUCm -T质粒上 ,通过序列测定和分析得到正确的mZP3cDNA。经内切酶EcoRI和XhoI处理 ,将mZP3cDNA克隆至融合蛋白表达载体pGEX - 4T - 1中 ,在T4DNA连接酶的作用下构建出融合表达载体pGEX -mZP3,转化大肠杆菌BL - 2 1菌株 ,利用IPTG诱导后获得可溶性的蛋白质产物 ,经过SDS -PAGE鉴定 ,表达的融合蛋白GST -mZP3分子质量约为 72kD左右 ,纯化的融合蛋白免疫兔子 ,获得效价为1∶1 0 0 0的抗血清 ,Westernblot检测抗血清具有针对mZP3融合蛋白的专一性 。 张富春 钱东 林仁勇 马纪 马正海 钟哲关键词:CDNA 融合蛋白 抗血清 鼠透明带3cDNA的克隆及其在原核细胞中表达的研究 对许多种类的有害野生动物种群数量的控制已经成为一个非常值得研究的 课题。通过免疫避孕的方式来减小种群的数量,已经被提上了议事日程,在本 研究中,我们将鼠卵透明带3(mZP3)作为研究对象。由于卵透明带3作为精 子的初级受... 钱东关键词:融合蛋白 抗血清 文献传递