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重组H8N4亚型禽流感病毒的拯救: 2012年; 将H8N4亚型流感病毒的HA和NA基因插入双向转录/表达载体pHW2000中,并与本实验室保留的适应毒株A/PR/8/34(H1N1)的6个质粒pHW2000-PB2、pHW2000-PB1、pHW2000-PA、pHW2000-NP、pHW2000-M、pHW2000-NS共转染293T和MDCK混养细胞,在细胞内部完成病毒粒子的组装,然后接种SPF鸡胚,经3代扩毒后,成功拯救了H8N4亚型重组流感病毒,并对其进行鉴定及生物学特性分析。本研究结果为该亚型禽流感病毒变异机理研究及疫苗的研制等奠定了基础。; 崔鹤馨李沂田宇飞袁森凡敏靖杰齐延新郭欢欢田明尧金宁一; 关键词：病毒拯救禽流感病毒重组病毒

乙型脑炎病毒分型基因芯片的制备被引量：7: 2011年; 目的制备乙型脑炎病毒分型基因芯片。方法根据乙型脑炎病毒的基因组学序列,应用生物学软件设计乙型脑炎病毒分型引物及探针,制备JEV分型基因芯片。PCR扩增荧光标记的片段与固定于玻片上的探针杂交后,进行芯片清洗、扫描及结果分析。通过特异性、灵敏性、重复性试验验证,建立分型基因芯片检测方法。结果杂交显示,设计的6条探针中有3条特异地与相应的标记样品杂交并在芯片上呈现较强的阳性杂交信号,其中1号探针能特异性检出乙型脑炎病毒,4、5号探针可对JEV-Ⅰ和JEV-Ⅲ型进行分型。制备的基因芯片具有可靠的重复性。结论建立的基因芯片具有高特异性、灵敏性及良好的重复性,可以快速、准确、高通量地对乙型脑炎病毒进行分型检测。; 郭欢欢凡敏鲁会军刘振江齐延新秦艳青岳云强袁森崔鹤馨田宇飞刘昊田明尧金宁一; 关键词：乙型脑炎病毒基因型基因芯片

猪源新城疫病毒F和HN基因的表达及其对BHK-21细胞膜的融合作用: 2012年; 为了分析猪源新城疫病毒F和HN基因对BHK-21细胞膜的融合作用,采用RT-PCR方法从猪源新城疫病毒JL01株中扩增获得了F蛋白基因,并根据GenBank上登录的猪源新城疫病毒HN基因序列,合成了HN基因,分别将F和HN基因克隆到pKS载体上。又从大肠杆菌BL21(DE3)中扩增得到T7RNA聚合酶基因,将报告基因EGFP与T7RNA聚合酶基因一起定向克隆到痘苗病毒转移载体pSTK上。再将pKS-F、pKS-HN与pSTK-T7-EGFP共转染BHK-21细胞,转染后16h,用Giemsa染液进行染色,可见明显的细胞融合现象。该研究证明猪源新城疫病毒JL01株的F和HN蛋白共同作用于BHK-21细胞使细胞膜融合。; 刘振江鲁会军李国江刘昊靖杰刘燕瑜岳云强郭欢欢凡敏秦艳青金宁一; 关键词：猪源新城疫病毒 T7

云南省思茅地区乙型脑炎病毒及黄热病毒的分子流行病学监测被引量：5: 2011年; 2009年至2010年,在云南省思茅地区普文镇、思茅区、震东乡、六顺乡、勐旺乡等地共采集17880只蚊子(分为91管),其中库蚊16500只(83管),按蚊1380只(8管)。采用RT-PCR方法,对91管蚊虫样本进行流行性乙型脑炎病毒NS1基因及黄热病毒E基因片段扩增,回收阳性PCR产物,并进行测序和遗传进化分析。结果表明,思茅地区库蚊乙型脑炎病毒检测阳性率为18.1%(15管/83管),黄热病毒检测阳性率为15.7%(13管/83管),思茅地区按蚊乙型脑炎病毒检测阳性率为25%(2管/8管),黄热病毒检测阳性率为12.5%(1管/8管)。克隆的流行性乙型脑炎病毒NS1基因及黄热病毒E基因与JEV和YFV参考株进行序列比对,与乙型脑炎病毒参考株同源性为88.3%～90.7%。监测结果显示,思茅地区蚊子JEV和YFV带毒率均较高,表明当地两种虫媒病毒病流行风险高。; 刘振江金宁一鲁会军李国江刘昊岳云强郭欢欢周红宁杨中华谢辉; 关键词：乙型脑炎病毒黄热病毒 RT-PCR

乳酸乳球菌高效电转化方法的建立被引量：8: 2012年; 以乳酸菌诱导型表达质粒pNZ8149为载体,Lactococcus lactis NZ3900为受体,采用电转化方法研究电场强度、电击杯规格、受体菌株的生长状态、感受态细胞浓度及分装体积、质粒浓度、电击脉冲时间以及电击杯使用次数等因素对电转化效率的影响。结果表明:在固定电阻200Ω、电容25μF条件下,收获对数生长前期的乳球菌制作感受态细胞,并以80μL体积分装,采用2 mm规格的电击杯,加入浓度为1.2μg/μL的质粒,在电场强度和脉冲时间分别为10 kV/cm和5 ms的条件下完成电击转化。转化后的菌液恢复培养2 h后涂板计数,转化效率最高可以达到2.6×104 CFU/μg DNA。研究结果为进一步构建乳酸菌高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株奠定了方法基础。; 任大勇李昌秦艳青杜寿文郭欢欢刘宏锋洛阳金宁一; 关键词：乳酸乳球菌电转化感受态细胞

基孔肯亚病毒和辛德毕斯病毒检测基因芯片的建立被引量：3: 2012年; 根据GenBank中收录的基孔肯亚病毒和辛德毕斯病毒基因的保守序列,合成2种病毒E基因序列及引物,设计针对2种病毒的寡核苷酸探针,制备基孔肯亚病毒与辛德毕斯病毒特异性检测基因芯片,并对该芯片的灵敏性、特异性和重复性进行了验证。结果显示,所建立基因芯片检测方法的灵敏度是普通PCR方法的100倍。利用所制备的基因芯片,能检测到基孔肯亚病毒和辛德毕斯病毒特异性杂交信号,阴性对照病毒(基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒,基因Ⅲ型流行性乙型脑炎病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒及流感病毒)均无杂交信号。本试验初步建立了基孔肯亚病毒与辛德毕斯病毒特异性基因芯片检测方法,该方法灵敏度高、特异性强,适用于基孔肯亚病毒与辛德毕斯病毒的流行病学调查和种特异性鉴定。; 凡敏田明尧赵权郭欢欢任静强刘昊刘振江岳云强袁森崔鹤馨鲁会军田宇飞金宁一; 关键词：基孔肯亚病毒辛德毕斯病毒基因芯片

口服疫苗抗原递送载体Lactococcus lactis NZ9000研究进展: 2012年; 综述了基因工程菌Lactococcus lactis NZ9000在基因组学、安全性、功能性、疫苗载体构建、菌株改造等方面的研究进展,对NZ9000作为口服疫苗载体的表达系统进行了评述,展望了其在生物制药、疫苗开发和食品工业等领域的应用前景,并对今后研究的发展方向做了分析。; 任大勇李昌秦艳青郭欢欢杜寿文刘宏锋高楠金宁一; 关键词：口服疫苗

乙型脑炎病毒分型基因芯片的制备与初步研究: 流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis, JE)简称乙脑,乙脑是由乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)引起的一种严重的病毒性脑炎疾病,该病毒属于黄病毒科,通...; 郭欢欢; 关键词：乙脑病毒基因分型基因芯片; 文献传递

重组辛德毕斯病毒E基因痘苗病毒的构建被引量：4: 2011年; 为了构建表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒,本研究通过基因重组的方法将辛德毕斯病毒E基因及绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因分别连接至痘苗病毒转移载体pSTK,酶切鉴定得到阳性重组质粒pSTK-SINE-EGFP。采用脂质体转染的方法,将该重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染BHK-21细胞,通过同源重组获得重组痘苗病毒。利用EGFP筛选阳性重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP,收集感染重组痘苗病毒的BHK-21细胞,SDS-PAGE电泳检测辛德毕斯病毒E基因在细胞中的表达情况,Western blot分析表达产物的免疫原性。结果证明辛德毕斯病毒E基因能在重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP中获得表达,且表达产物具有良好的免疫原性。表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒的成功构建,为研制辛德毕斯病毒活载体疫苗奠定了基础。; 刘振江刘昊刘燕瑜郭欢欢凡敏岳云强陆飞秦艳青李国江鲁会军金宁一; 关键词：辛德毕斯病毒绿色荧光蛋白重组痘苗病毒

东方马脑炎研究进展: 东方马脑炎作为一种严重的病毒性疾病，是一种潜在的、可以用于战争和恐怖活动的生物武器，已经引起了许多热带及亚热带国家和地区的重视。但目前，对于较严重的EEE临床病例并没有有效的治疗方法，疫苗的研究也仅停留在实验室阶段。概述...; 郭欢欢田明尧刘振江岳云强齐延新秦艳青金宁一; 关键词：病原鉴定流行病学

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郭欢欢

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