郭东伟
- 作品数：8 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪传染性胃肠炎病毒S截短蛋白在干酪乳杆菌表面展示表达的研究
- 2013年
- 为构建细菌外膜展示表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S截短蛋白的重组干酪乳杆菌(Lactobacillus casei),本研究采用RT-PCR扩增TGEV S基因的截短片段BC和AD,构建了重组pLA-BC/L.casei和pLA-AD/L.casei,利用western blot、间接免疫荧光法(IFA)和流式细胞术(FACS)检测外源蛋白在干酪乳杆菌的表面表达与定位。IFA和FACS结果显示重组菌株pLA-BC/L.casei和pLA-AD/L.casei表面均能够检测到截短的S和PgsA融合表达蛋白与TGEV阳性血清的特异性荧光信号,而对照菌没有检测到荧光信号。表明本研究构建的的TGEV重组L.casei具有胞外展示表达TGEV抗原蛋白的功能,可以作为TGEV候选疫苗应用于动物试验研究。
- 田斌余丽芸侯喜林王桂华刘振格郭东伟刘秋晨齐浩林红丽
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白与BCCIP蛋白相互作用的鉴定被引量：2
- 2013年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白在病毒粒子组装和释放过程中发挥重要的作用。为筛选N蛋白与宿主细胞相互作用的蛋白,本研究分离健康猪肺泡巨噬细胞(PAM),构建了PAM的酵母cDNA文库,利用酵母双杂交方法筛选其中与PRRSV N蛋白相互作用的蛋白,结果获得3个阳性克隆。经测序并利用Blast方法比对GenBank数据库,筛选得到克隆插入的cDNA均与BCCIP(BRCA2 and CDKN1A interactingprotein)基因的1 bp～396 bp核酸序列一致。经酵母回返验证试验、GST-pulldown和免疫共沉淀试验验证了N蛋白与BCCIP之间的特异性相互作用,共定位试验显示N蛋白与BCCIP共定位于细胞核和细胞浆中。本研究鉴定了新的与PRRSV N蛋白相互作用的宿主蛋白BCCIP,BCCIP是否通过与N蛋白的相互作用参与PRRSV复制还有待深入研究。
- 尹曼曼郭东伟刘琴芳张枫张利杰李江南翁长江
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白相互作用
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白与RACK1蛋白相互作用的研究被引量：1
- 2013年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)编码的非结构蛋白NSP9为参与病毒复制的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp),而宿主蛋白与RdRp相互作用参与病毒基因组的复制机理尚不明确。为筛选与RdRp相互作用的宿主蛋白,本研究以PPRSV NSP9蛋白为"诱饵",利用酵母双杂交方法筛选猪肺泡巨噬细胞cDNA酵母表达文库,筛选结果显示PRRSV NSP9蛋白与宿主蛋白RACK1具有相互作用关系。进一步经酵母共转化试验和免疫共沉淀试验验证RACK1和NSP9特异性结合,并共定位于细胞浆中。研究结果表明,宿主蛋白RACK1是PRRSV NSP9蛋白的一种新的相互作用蛋白,然而RACK1参与PRRSV复制的详细机理有待深入研究。
- 郭东伟尹曼曼张枫李江南黄丽余丽芸翁长江
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白相互作用
- 2株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离及其基因测序
- 2012年
- 2006年，我国爆发了高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP—PRRSV），给养猪业造成了严重的经济损失，该HP-PRRSV在Nsp2区有30个氨基酸的不连续缺失。分子流行病学调查证实，目前我国流行的PRRSV毒株主要是HP—PRRSV毒株。2011年，从山东某猪场成功分离到2株PRRSV，分别命名为PRRSV-SDA2和PRRSV—SDA3；基因测序结果显示PRRSV-SDA2全长为15349bp，PRRSV-SDA3全长为15350bp。通过与涵盖欧洲型和北美型的24个毒株全基因比对，发现这2个毒株均属于北美型HP—PRRSV，与HuN4毒株的同源性最高，均高达99．5％，其NSP2蛋白的482和533～561位缺失了30个氨基酸。成功分离的SDA2和SDA32个HP—PRRSV及完成的基因测序，为构建HP—PRRSV毒株的感染性克隆奠定了基础。
- 张枫李江南尹曼曼郭东伟刘琴芳王朝翁长江熊涛
- 关键词：基因测序NSP2
- 与PRRSV NSP9相互作用的宿主蛋白的筛选与鉴定
- 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是20世纪80年代末出现的一种严重引起怀孕母猪繁殖障碍和各年龄猪呼吸道症状为特征的一种传染病，目前...
- 郭东伟
- 关键词：蛋白相互作用
- 文献传递
- 猪脑心肌炎病毒2B蛋白与RACK1蛋白相互作用的鉴定
- 2014年
- 为筛选与猪脑心肌炎病毒(EMCV)2B蛋白相互作用的宿主蛋白,本实验利用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞表达文库制备与EMCV 2B蛋白相互作用的宿主蛋白RACK1蛋白。酵母共转化试验和免疫共沉淀试验表明两者可以特异性结合,激光共聚焦试验表明两者共定位于细胞质中。为定位RACK1与2B蛋白相互作用区域,本研究构建了RACK1截短表达重组质粒,并将其与pCAGGS-Flag-2B共转染HEK293细胞,利用免疫共沉淀试验验证其相互作用区域。结果显示2B蛋白与宿主细胞RACK1蛋白存在相互作用,并且证明相互作用区域位于RACK1蛋白的N端。
- 王岩黄丽崔尚金李江南杨春梅于会彬郭东伟张元峰夏雪山翁长江
- 关键词：猪脑心肌炎病毒酵母双杂交相互作用
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9与宿主CALM2基因编码钙调蛋白的相互作用研究被引量：1
- 2015年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白Nsp9为该病毒RNA依赖的RNA聚合酶(Rd Rp),在病毒的转录复制过程中发挥关键性作用。为筛选与Nsp9相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交方法,以PRRSV Nsp9为诱饵蛋白,从猪肺泡巨噬细胞(PAM)酵母表达c DNA文库中筛选到CALM2(Calmodulin 2)基因。酵母回返验证试验和免疫共沉淀(Co-IP)试验证明CALM2基因编码的钙调蛋白(Ca M)与Nsp9特异地相互作用。激光共聚焦试验表明Ca M与Nsp9共定位于HEK293细胞胞浆内。本研究筛选到一个与Nsp9相互作用的新宿主蛋白Ca M,但该蛋白是否直接参与PRRSV的复制过程还有待进一步研究。
- 胡亮郭东伟李江南尹曼曼黄丽翁长江
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒酵母双杂交肺泡巨噬细胞钙调蛋白
- ETEC K99、K88菌毛蛋白抗原表位多肽的设计合成及免疫反应被引量：1
- 2013年
- 目的:通过生物信息学及蛋白分析软件等,寻找ETEC K88、K99菌毛蛋白的抗原表位。方法:通过生物信息学技术、DNAStar Protean蛋白分析软件及网络共享软件对ETEC K88、K99菌毛蛋白抗原性相关的参数进行预测分析,从而设计ETEC K88、K99菌毛蛋白的抗原表位多肽;采用腹腔注射的方式将合成的抗原表位多肽免疫小鼠,用ELISA法检测血清中产生的抗体,并对免疫小鼠进行了攻毒试验。结果:多肽免疫小鼠后均能诱导抗体产生,攻毒试验表明合成肽对小鼠具有保护作用。结论:成功预测了抗原表位,合成的表位多肽具有较好的抗原性。
- 余丽芸田斌温丽娟王桂华曹宁魏小曼郭东伟齐浩刘秋晨
- 关键词：ETECETEC抗原表位合成肽
